1、果蝇唾液腺染色体的观察一、 实验目的1)练习剖取果蝇三龄幼虫唾液腺的方法。2)掌握制作果蝇唾液腺染色体标本的技术3)观察果蝇唾液腺染色体的形态特征。 二、实验原理1） 果蝇三龄幼虫的唾液腺细胞处于永久早期，染色体解旋呈伸展状态在幼虫发育过程中细胞核中的DNA多次复制，但细胞、细胞核不分裂。复制后的染色单体DNA不分开，这种现象叫做核内有丝分裂，从而形成了多线染色体。加之唾液腺细胞中同源染色体互相靠拢在一起呈现一种联会状态，而使其比一般体细胞中的染色体粗10002000倍，长100200倍。2） 唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，所以左手持解剖针按压住虫体前端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖
2、针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。如图。3）由于在唾液腺细胞中8条染色体之间以着丝粒互相连结在一起形成染色盘或异染中心和同源染色体之间的假联会，经碱性染料染色后，可以观察到一个染色较深的染色盘和以染色盘为中心向外辐射出的5条染色体臂。在这些染色体臂上可以看到染色深浅不同，被称做明带、暗带的横纹，这些横纹的位置，宽窄、数目都具有物种的特异性。不同物种，不同染色体的不同部位形态位置是固定的。因此根据染色体各条臂带纹特征和各条臂端部带纹特征能准确识别各条染色体。在染色体臂上还可看到某些带纹通过染色体的解旋、膨大形成的疏松区和巴尔比尼氏环，其富含转录出来的RNA，因此不着色，是基
3、因活动的区域。在个体发育的不同阶段，疏松区或巴尔比尼氏环在染色体上出现的部位不同，据此研究基因的表达，开展各种染色体变异的研究等等。三、 器具和生物实验生物：果蝇的三龄幼虫；器具：双筒解剖镜、显微镜、镊子、解剖针，载玻片、盖玻片实验试剂： 醋酸洋红染液、蒸馏水、lNHCI。四、 实验步骤1） 准备发育充足、肥大的三龄幼虫（选择在低温下（16C-18C培养下，充分发育但尚未化蛹但活动十分活跃的幼虫）；2） 剥离唾腺：在一干净的载玻片上滴一滴蒸馏水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，置于载玻片上。每只手各持一个解剖针在解剖镜下进行操作。由于果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，所
4、以左手持解剖针按压住虫体前端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出；3） 解离：在唾腺组织上滴一滴1NHCl，解离1-2min ，以松软组织；4） 吸去HCl，用水冲洗2-3次，滴加醋酸洋红染液染色10min，染色时间不可过长，否则背景也着色。之后盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。将片子放在实验台上，用大拇指用力压住。（注意不要使盖片移动）；5） 镜检：先用低倍镜进行观察，找到分散好的染色体再转用高倍镜进行观察；6） 整理实验器材，处理废物； 五：实验现象 多线染色体六：实验问题1：在实验过程中要注意什么？。答：1)取果蝇幼虫时一定要取粗大的；2
5、）一定要加蒸馏水，否则唾液腺容易干，影响其正常形态，进而影响观察。但水不可加太多，否则幼虫会漂浮而且活跃。如水多了，请再剥离唾腺前吸走些，唾腺剥离后请勿吸水，以防将唾腺一起吸走。3)清除脂肪组织时要量力而行；在实验中，我发现如果严格按照实验步骤所写剥离唾液腺，撕裂后唾液腺将与脂肪分离，得到较干净的唾液腺，很少脂肪干扰。4）尽可能的保留完整的唾液腺5)染色液勿过多，否则压片时唾腺易随染色液漂走。如染色时间到后，染色液已干，应再少加些染色液，再盖上盖波片，避免气泡产生。6)染色时间不要太长，否则背景会着色，影响观察效果。7)用吸水纸吸取液体时，一定要注意不要将唾液腺吸走。2：本次实验为什么没有成功？ 答：1）没有找到足够大的果蝇； 2）剥离脂肪与唾液腺时老是会把果蝇的唾液腺给破坏； 3）剥离时间过长，唾液腺高温下渐渐分解了； 4）洗去盐酸时将唾液腺冲走了； 5）染色时间没有控制好；第3页
