1、第七章第七章 细菌感染的检查方法细菌感染的检查方法 与防治原则与防治原则 一、细菌感染的诊断一、细菌感染的诊断 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则 细菌的形态学检查细菌的形态学检查 细菌的分离培养和生化鉴定细菌的分离培养和生化鉴定 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法 检测方法检测方法 病原菌的检验程序病原菌的检验程序 药物敏感试验药物敏感试验 直接涂片检查直接涂片检查 分离培养分离培养 生化试验生化试验 血清学试验血清学试验 动物试验动物试验 初步诊断初步诊断 分子生物学技术分子生物学技术 其他检测技术其他检测技术 明明确确诊诊断断 1 1、标本的采集和处理原则、标本的采集和处理原
2、则 标本采集的一般原则标本采集的一般原则 标本的处理标本的处理 When?What?How?何时取，取什么，怎么取？何时取，取什么，怎么取？如何保持细菌的活性如何保持细菌的活性 When?尽早采集：尽早采集：在发病的在发病的早期或急性期早期或急性期采集标本采集标本 最好在抗生素使用前（如使用过抗生素应最好在抗生素使用前（如使用过抗生素应在申请单上注明）。在申请单上注明）。选择不同采集时机和标本种类：选择不同采集时机和标本种类：不同不同病程病程致病菌在体内分布和排出部位不同。致病菌在体内分布和排出部位不同。What?根据病史与临床表现确定标本采集的类型与根据病史与临床表现确定标本采集的类型与部位
3、，尽量采集部位，尽量采集病变明显部位标本病变明显部位标本。食物中毒食物中毒:可疑食物可疑食物,呕吐物呕吐物,粪便粪便 痢疾：脓血便痢疾：脓血便 败血症败血症:血血 化脓感染的病灶化脓感染的病灶 How?无菌采集。无菌采集。无菌标本：脑脊液、血液、穿刺液等。无菌标本：脑脊液、血液、穿刺液等。有菌标本：有菌标本：无菌容器无菌容器 根据目的菌的特性，采用根据目的菌的特性，采用不同的方法采集不同的方法采集，以，以保保证证目的菌目的菌的活性。的活性。（需氧菌、厌氧菌、兼性厌氧菌、（需氧菌、厌氧菌、兼性厌氧菌、L型细菌）型细菌）安全采集安全采集 污染：环境，正常菌群污染：环境，正常菌群 上呼吸道标本采集上
4、呼吸道标本采集 标本：鼻拭子、咽拭标本：鼻拭子、咽拭子子 上呼吸道存在正常菌上呼吸道存在正常菌群，在采集标本与结群，在采集标本与结果分析时应予考虑果分析时应予考虑。直接涂片检查；分离培养。直接涂片检查；分离培养。标本：痰液、支气管灌洗标本：痰液、支气管灌洗液等。液等。采集时间：晨痰，且在取采集时间：晨痰，且在取痰前用清水反复漱口。痰前用清水反复漱口。方法：方法：（1）自然咳痰法：）自然咳痰法：（2）气管镜下采集法；）气管镜下采集法；（3）气管穿刺法。）气管穿刺法。下呼吸道标本采集下呼吸道标本采集 直接涂片检查；分离培养。直接涂片检查；分离培养。1.1.对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟对
5、环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检保温并立即送检。2.2.其他所有的标本采集后最好其他所有的标本采集后最好在在2h之内送检之内送检。3.3.用于细菌培养的用于细菌培养的标本保存时间不应超过标本保存时间不应超过24h24h。4.4.若不能及时送检，标本应置于若不能及时送检，标本应置于4 4保存。保存。5.5.送检过程中要采取适当的保存方式，注意防护。送检过程中要采取适当的保存方式，注意防护。标本的处理标本的处理 时间？保存？时间？保存？保持细菌的活性保持细菌的活性 1 1早期采集，早期采集，不同病程不同标本。不同病程不同标本。2 2无菌采
6、集无菌采集 3 3采集病变明显部位的新鲜标本。采集病变明显部位的新鲜标本。4 4根据目的菌的特性用不同的方法采集根据目的菌的特性用不同的方法采集 5.5.采集适量标本。采集适量标本。6.6.安全采集。安全采集。7.7.及时送检，注意保温。及时送检，注意保温。标本采集和处理的一般原则标本采集和处理的一般原则 安全、有效地采集到安全、有效地采集到可能存在的病原菌，可能存在的病原菌，并保持其活性。并保持其活性。2、细菌形态学检查、细菌形态学检查 观察观察细菌形态细菌形态、排列、结构排列、结构和和染色性染色性。有助于对病原菌的有助于对病原菌的初步识别初步识别，对临床对临床早期诊早期诊断断和治疗有一定的
7、参考意义。和治疗有一定的参考意义。了解有无细菌及大致的了解有无细菌及大致的菌量菌量。形态学检查方法形态学检查方法 不染色法：悬滴法不染色法：悬滴法 压片法压片法 染色法：革兰染色法，染色法：革兰染色法，抗酸染色法。抗酸染色法。细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况。活状态下细菌的动力及运动状况。初步鉴定细菌。初步鉴定细菌。常用的方法：常用的方法：压滴法和悬滴法。压滴法和悬滴法。不染色标本不染色标本 单染色法：单染色法：只能观察微生物的大小、形状和只能观察微生物的大小、形状和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及其特细胞排列状况，但不能鉴
8、别微生物以及其特殊构造等。殊构造等。复染色法：复染色法：用两种或两种以上染色液进行染用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。染色法。常用的有：常用的有：革兰氏染色法革兰氏染色法、抗酸染色法、荧光、抗酸染色法、荧光染色等。染色等。常用的染色方法常用的染色方法 1.革兰染色革兰染色（gram stain）G+球菌球菌 G-杆菌杆菌 丹麦丹麦C.Gram于于1884年创建，用于细菌分类学研究年创建，用于细菌分类学研究 革兰染色的意义革兰染色的意义 初步识别和鉴定细菌。初步识别和鉴定细菌。为抗菌药物的选择提供参考。为抗菌药物的选择
9、提供参考。了解病原菌的致病性。了解病原菌的致病性。3、细菌的分离培养和鉴定、细菌的分离培养和鉴定 培养基的种类和选择培养基的种类和选择 细菌分离及培养的方法细菌分离及培养的方法 细菌生化反应和鉴定细菌生化反应和鉴定 4 4、细菌的非培养检测方法、细菌的非培养检测方法 免疫学检测免疫学检测 分子生物学检测分子生物学检测 细菌毒素的检测细菌毒素的检测 动物实验动物实验 免疫学检测免疫学检测 基本原理基本原理 依据抗原抗体特异性结合的原理，依据抗原抗体特异性结合的原理，用已知的抗原用已知的抗原检测未知的抗体检测未知的抗体 或用已知的抗体，或用已知的抗体，检测未知的抗原检测未知的抗原。细菌抗原的检测细
10、菌抗原的检测 体内抗体的检测体内抗体的检测 快速，简单、敏快速，简单、敏感，特异性强。感，特异性强。二、细菌感染的特异性预防二、细菌感染的特异性预防 获得性免疫产生的方式获得性免疫产生的方式 主动免疫主动免疫 自然免疫自然免疫 患病、隐性感染患病、隐性感染 人工免疫人工免疫 疫苗、类毒素疫苗、类毒素 被动免疫被动免疫 自然免疫自然免疫 胎盘、初乳胎盘、初乳 人工免疫人工免疫 抗毒素、丙球抗毒素、丙球 人工免疫人工免疫 采用人工方法将疫苗、类毒素等或含有某采用人工方法将疫苗、类毒素等或含有某种特异性抗体、细胞免疫制剂等接种于人种特异性抗体、细胞免疫制剂等接种于人体，以增强宿主的抗病能力。体，以增
11、强宿主的抗病能力。生物制品：人工免疫的免疫原、免疫血清、生物制品：人工免疫的免疫原、免疫血清、细胞制剂及诊断细胞制剂及诊断 制剂的生物性制剂。制剂的生物性制剂。将疫苗或类毒素接种于人体，使机体将疫苗或类毒素接种于人体，使机体产生获得性免疫力的一种防治微生物感染产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施。的措施。作用作用：特异性预防，：特异性预防，人工主动免疫人工主动免疫 artificial active immunity 用于人工主动免疫用于人工主动免疫的生物制品的生物制品 死疫苗死疫苗 活疫苗活疫苗 类毒素类毒素 亚单位疫苗亚单位疫苗 核酸疫苗核酸疫苗 区别点区别点 死疫苗死疫苗 活疫苗活
12、疫苗 制剂特点制剂特点 死，强毒株死，强毒株 活减毒株活减毒株 接种剂量与特点接种剂量与特点 量较大，量较大，23次次 量较小，量较小，1次次 保存及有效期保存及有效期 易保存，约易保存，约1年年 不易保存不易保存 免疫效果免疫效果 较低，较低，维持数月维持数月2年年 较高，较高，维持维持35年甚至更长年甚至更长 死疫苗与活疫苗的比较死疫苗与活疫苗的比较 人工被动免疫人工被动免疫 artificial passive immunity 注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白抗体，或细胞因子等免疫制剂，使机疫球蛋白抗体，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获
13、得特异性免疫。体即刻获得特异性免疫。作用：作用：治疗，紧急预防治疗，紧急预防 抗毒素抗毒素 用于人工被动免疫用于人工被动免疫的生物制品的生物制品 丙种球蛋白丙种球蛋白(麻疹、甲肝、脊髓灰质炎）麻疹、甲肝、脊髓灰质炎）区别要点区别要点 人工主动免疫人工主动免疫 人工被动免疫人工被动免疫 免疫物质免疫物质 抗原抗原 抗体或细胞因子等抗体或细胞因子等 免疫出现时间免疫出现时间 慢，慢，24周周 快，立即快，立即 免疫维持时间免疫维持时间 长，数年长，数年数月数月 短，短，23周周 主要用途主要用途 预防预防 治疗或紧急预防治疗或紧急预防 人工主动免疫与人工被动免疫的比较人工主动免疫与人工被动免疫的比
14、较 小小 结结 细菌的致病机制细菌的致病机制 细菌的致病的物质基础细菌的致病的物质基础 宿主的免疫防御机制（详见免疫学）宿主的免疫防御机制（详见免疫学）感染的类型感染的类型 医院感染医院感染 细菌感染的诊断细菌感染的诊断 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则 人工免疫的方法和特点人工免疫的方法和特点 思 考 题 细菌致病的相关因素和物质基础细菌致病的相关因素和物质基础 试比较内毒素与外毒素的区别？试比较内毒素与外毒素的区别？机体抗菌免疫的特点机体抗菌免疫的特点 何谓带菌者何谓带菌者 致病菌引起全身感染的类型致病菌引起全身感染的类型 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则 人工免疫的方法和特点人工免疫的方法和特点 谢谢 谢！谢！谢谢 谢！谢！
