1、新型卵巢癌标记物新型卵巢癌标记物HE4 的研究进展的研究进展 崔崔 恒恒 北京大学人民医院北京大学人民医院 妇科肿瘤中心妇科肿瘤中心 世界范围统计资料世界范围统计资料 癌癌 新发新发 死亡死亡 宫颈宫颈 470,000 230,000 卵巢卵巢 190,000 114,000 内膜内膜 188,000 45,000 美国美国2008 卵巢癌的现状卵巢癌的现状 一个难题：无成熟的早期诊断方法；一个难题：无成熟的早期诊断方法；二个二个70%：确诊时约：确诊时约70%已属晚期；治疗已属晚期；治疗后即使是已达到临床完全缓解的病人仍后即使是已达到临床完全缓解的病人仍有有70%最终将复发；最终将复发；三个
2、进展：手术病理分期、肿瘤细胞减三个进展：手术病理分期、肿瘤细胞减灭术、紫杉醇灭术、紫杉醇+卡铂化疗方案卡铂化疗方案 四个焦点：保留生育四个焦点：保留生育/生理功能、早期的生理功能、早期的辅助治疗、晚期的治疗、复发的诊断和辅助治疗、晚期的治疗、复发的诊断和治疗治疗 卵巢癌的诊断策略卵巢癌的诊断策略-早期诊断早期诊断 卵巢癌的早期诊断一直是卵巢癌研究中卵巢癌的早期诊断一直是卵巢癌研究中最具挑战性的课题最具挑战性的课题 肿瘤诊断的三大支柱肿瘤诊断的三大支柱 图像诊断：图像诊断：B超超 CT、MRI PET/CT 血液与体液检测：肿瘤标记物血液与体液检测：肿瘤标记物 细胞学与组织学诊断细胞学与组织学诊
3、断 现阶段卵巢癌的诊断现阶段卵巢癌的诊断 目前常用的诊断方法包括：目前常用的诊断方法包括：1）妇科三）妇科三合诊；合诊；2）阴式彩色）阴式彩色B超；超；3）血清）血清CA125的检测；的检测；4）计算机断层扫描）计算机断层扫描（CT）、磁共振成像（）、磁共振成像（MRI）、正电）、正电子发射断层扫描（子发射断层扫描（PET或或PET/CT）等）等 关于诊断正在研究中的有：关于诊断正在研究中的有：放射免疫显像放射免疫显像（RII）新的或多种血清标记物的检测新的或多种血清标记物的检测 血清中卵巢癌特异抗体的检测血清中卵巢癌特异抗体的检测 恶性肿瘤危险指数评分恶性肿瘤危险指数评分（RMI)癌基因和抗
4、癌基因突变的检测癌基因和抗癌基因突变的检测，特别特别是与遗传相关基因的检测是与遗传相关基因的检测（芯片芯片）发现和寻找新的特异抗原和基因发现和寻找新的特异抗原和基因 肿瘤标记物的定义肿瘤标记物的定义 与肿瘤相关的抗原或某种生物活性物质与肿瘤相关的抗原或某种生物活性物质 肿瘤细胞异常表达肿瘤细胞异常表达 反映癌变发生反映癌变发生、发展过程发展过程 可被检出可被检出 有效的肿瘤标记物有效的肿瘤标记物 特异性强特异性强 敏感性高敏感性高 交叉反应小交叉反应小 早期诊断率高早期诊断率高 随病情变化监测值变化明显随病情变化监测值变化明显 临床应用临床应用 肿瘤诊断及鉴别诊断肿瘤诊断及鉴别诊断 肿瘤残存肿
5、瘤残存 复发的预测及复发部位监测复发的预测及复发部位监测 疗效观察及预后评估疗效观察及预后评估 对无症状早期癌及高危人群的筛查对无症状早期癌及高危人群的筛查 血清肿瘤标志物的检测血清肿瘤标志物的检测 CACA125125是应用最多的卵巢癌血清肿瘤标志物是应用最多的卵巢癌血清肿瘤标志物，特别特别是最常用的监测卵巢癌复发的指标是最常用的监测卵巢癌复发的指标。期卵巢癌患者仅有约期卵巢癌患者仅有约3030-5050%3535u/mlu/ml，监测复监测复发的敏感性发的敏感性、特异性特异性、阳性预测值分别为阳性预测值分别为7979、9595、100100。1 1健康妇女健康妇女、3 3良性卵巢肿瘤良性卵
6、巢肿瘤、6 6非卵巢相关非卵巢相关的良性疾病可有血清的良性疾病可有血清CACA125125水平升高水平升高。在子宫内膜在子宫内膜异位症异位症、盆腔结核盆腔结核、炎症等甚至高达炎症等甚至高达5050-7070%卵巢癌相关的其它标志物卵巢癌相关的其它标志物 基因分析和组织化学分析已发现许多新的可能与卵巢癌相关基因分析和组织化学分析已发现许多新的可能与卵巢癌相关的标志物的标志物 MUC1 Kallikreins：hK4,hK6,hK8,hK10 Mesothelin Antileukoproteinase 1(ALP1)Osteopontin VEGF S100A1 Inhibin LPA B7-H
7、4 HE4，表达上调在卵巢癌中最常见，且在早、晚期患者中表达上调在卵巢癌中最常见，且在早、晚期患者中mRNA和蛋白的表达均上调。和蛋白的表达均上调。HE4 HE4（Human Epididymis Secretory Protein 4,人人附睾分泌蛋白附睾分泌蛋白4）1991年由年由Kirchhoff等从人的附睾中克隆出等从人的附睾中克隆出cDNA，基因定位在染色体基因定位在染色体 20q12-q13.1，全长为，全长为12kb左右，左右，由由5个外显子和个外显子和4个内含子组成，编码的蛋白质与个内含子组成，编码的蛋白质与细胞外蛋白酶抑制剂有很高的同源性，是一种酸细胞外蛋白酶抑制剂有很高的同
8、源性，是一种酸性蛋白质。性蛋白质。1999年年Schummer等发现等发现HE4 mRNA在卵巢癌组在卵巢癌组织中高表达，而在癌旁组织中织中高表达，而在癌旁组织中 不表达。不表达。HE4在在恶性肿瘤中的高表达多见于卵巢癌、子宫内膜癌恶性肿瘤中的高表达多见于卵巢癌、子宫内膜癌，少见于肺腺癌及间皮瘤。，少见于肺腺癌及间皮瘤。HE4在早期（在早期（I期）的卵巢癌中的敏感性及期）的卵巢癌中的敏感性及检测卵巢癌总的敏感性均高于检测卵巢癌总的敏感性均高于CA125，是卵，是卵巢癌敏感及特异的标志物，可用于对卵巢巢癌敏感及特异的标志物，可用于对卵巢癌的早期诊断及辅助监控卵巢癌患者的治癌的早期诊断及辅助监控卵
9、巢癌患者的治疗情况。疗情况。英国的一项研究对英国的一项研究对200，000妇女用妇女用30多种肿多种肿瘤标记物分别单独或与瘤标记物分别单独或与CA125联合进行卵巢联合进行卵巢癌筛查，癌筛查，HE4可以使诊断卵巢癌的敏感可以使诊断卵巢癌的敏感度和特异度提高度和特异度提高 Biochemistry of HE4 HE4-Human Epidiymis secretory protein 4 Member of the WAP-gene family of protease inhibitors(new name WFDC-gene family)Characterized by an appro
10、x 50 aa sequence with 8 highly conserved cysteine residues that form 4 disulphide bridges.WFDC(Whey Acidic Protein Four Disulphide Core)Tumour associated WFDC-proteins ALP1,Elafin,HE4(WFDC2),PS20(WFDC1)Chromosome 20q12-q13.1 contains a locus with several members of the WFDC family.Amplified in sever
11、al cancers:ovarian,breast,Colon,pancreatic,lung cancer WFDC gene locus HE4 mRNA expression profile Restricted expression profile in normal tissue Expressed in normal epididymis,and epithelia of the respiratory and reproductive tract Tumor-restricted expression in ovarian cancer 90%of serous ovarian
12、cancer HE4 mRNA highly expressed in lung adenocarcinomas 60%high expression in AdC 150pM CUTOFF=73.7pM CUTOFF=150pM 上皮性卵巢癌 96 8 14 74 91.7（88/96）77.1%(74/96)盆腔良性疾病 305 262 40 3 14.1%(43/305)0.98%(3/305)非盆腔良性疾病 95 62 32 1 34.7%(33/95)1.05%(1/95)其它肿瘤患者 98 62 33 3 36.7%(36/98)3.1%(3/98)健康人群 363 345 18
13、0 4.95%(18/363)0 干扰样本 110 89 10 11 19.1%(21/110)10%(11/110)说明：在干扰样本中，提示高胆红素可能对说明：在干扰样本中，提示高胆红素可能对HE4的检测有干扰，与国外研究结果的检测有干扰，与国外研究结果 一致。一致。HE4在卵巢癌恶性肿瘤中的在卵巢癌恶性肿瘤中的 动态监测的评价动态监测的评价 动态监测动态监测HE4浓度变化要求：浓度变化要求：为了为了避免试剂检测中存在的偏差，避免试剂检测中存在的偏差，选择选择2.5倍的最大精密倍的最大精密度度(CV)作为作为HE4浓度变化的指标。浓度变化的指标。HE4的阳性变化（阳转）的阳性变化（阳转）/阴
14、性变化（阴转）为当前结果比前一测试结果的测定值阴性变化（阴转）为当前结果比前一测试结果的测定值升高或者降低至少升高或者降低至少2.5倍最大倍最大CV。动态监测样本：动态监测样本：多中心临床动态监测评价，共收集多中心临床动态监测评价，共收集34例上皮性卵巢癌患例上皮性卵巢癌患者的者的64份血清。份血清。32例患者同时收集了术前、术后样本。例患者同时收集了术前、术后样本。2例患者动态监测均为术后样本。例患者动态监测均为术后样本。HE4浓度变化与病程发展情况统计浓度变化与病程发展情况统计 HE4浓度变化浓度变化 恶化恶化 无恶化无恶化 合计合计 阳转阳转 0 3 3 无阳转无阳转 0 61 61 合
15、计合计 0 64 64 临床动态监测符合率临床动态监测符合率:61/64=95.3%，HE4 可以用于上皮性卵巢可以用于上皮性卵巢 癌的疗效监测。癌的疗效监测。32例患者术前例患者术前/术后术后HE4HE4浓度变化图浓度变化图 备注：备注：HE4HE4浓度变化值浓度变化值=（手术后（手术后HE4HE4浓度浓度-手术前手术前HE4HE4浓度）浓度）/手术前手术前HE4HE4浓度浓度100%100%其中其中1 1-2525号为阴转样本，号为阴转样本，2626-3232号为非阴转样本。号为非阴转样本。-120.00%-100.00%-80.00%-60.00%-40.00%-20.00%0.00%2
16、0.00%1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 卵巢癌患者姓名 HE4浓度变化值（%）HE4 EIA精密度的评价精密度的评价 三家临床医院测定的三家临床医院测定的3份高、中、低临床样份高、中、低临床样本结果分别进行汇总分析本结果分别进行汇总分析 每份样本有每份样本有30次检测结果，分别计算次检测结果，分别计算CV值，值，CV值均低于值均低于15%符合临床试验方案要求。符合临床试验方案要求。HE4在交界性肿瘤的浓度分布在交界性肿瘤的浓度分布 临床试验过程中共检测了临床试验过程中共检测了10例交界性肿瘤，例交界性肿瘤，其中其中2例例HE4浓度分布为浓度分布为150-300pM，3例为例为73.7-150pM，5例低于例低于73.7pM。研究结果研究结果 当以当以73.7 pM作为作为CUT-OFF值时，临床在进行诊值时，临床在进行诊断中如果能结合其它的临床诊断方法，可以大大断中如果能结合其它的临床诊断方法，可以大大提高对上皮性卵巢癌病人的诊断率，避免漏检，
