1、HeLaHeLa细胞的传代培养细胞的传代培养 教学目标教学目标 1.理解细胞传代培养的概念和原理 2.能按照操作规程进行细胞传代培养的操作 细胞传代培养的概念细胞传代培养的概念 概念：指细胞从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。HeLa细胞是一种贴壁生长的细胞，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代。培养细胞一代生长过程培养细胞一代生长过程 实验前准备实验前准备 1 1、材料：、材料：HeLaHeLa细胞细胞 2 2、试剂：、试剂：0.250.25胰蛋白酶、胰蛋白酶、16401640培养基（含培养基（含1010 小牛血清）、小牛血
2、清）、PBS PBS 实验前准备实验前准备 超净工作台 CO2培养箱 倒置显微镜 3.3.仪器设备仪器设备 离心机 恒温水浴锅 3.3.仪器设备仪器设备 实验前准备实验前准备 培养瓶，移液管，酒精灯，酒精棉球，试管架，记号笔等。3.3.仪器设备仪器设备 实验前准备实验前准备 （1）细胞培养用的器材和试剂灭菌；（2）超净工作台准备（75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min）；（3）试剂预热（37水浴锅）；（4）操作人员准备（75%酒精擦拭双手等）。4.4.实验前准备实验前准备工作工作 实验前准备实验前准备 细胞生存环境：无菌、无毒细胞生存环境：无菌、无毒 细胞传代操作细胞传代操作 1、倒去培养瓶
3、中的旧培养液，加入2-3mL预热的PBS液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去悬浮在细胞表面的碎片。吸除培养液 细胞传代操作细胞传代操作 2、胰蛋白酶消化：加入适量0.25胰蛋白酶消化液，37消化，注意消化液的量以盖住细胞最好。加消化液 细胞传代操作细胞传代操作 3、盖紧瓶盖，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将消化液弃去，加入适量预热后的培养液终止消化。（一般消化时间约为2-3分钟）。消化前细胞 消化后细胞（适度状态）吸除消化液 细胞传代操作细胞传代操作 4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液。吹打成细胞悬液吹打成细胞悬液 分装 细胞传代操作细胞传代操作 5、以1：
4、2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，置于37 CO2培养箱培养（如果瓶盖不带通气孔，则需将瓶盖旋开半圈）。24h后即可对细胞的生长情况进行观察记录。当细胞长成单层后即可用于接种或冻存。实验操作注意事项实验操作注意事项 1.用电安全 2.操作仪器安全 3.及时规范记录 HeLa细胞传代培养实验原理细胞传代培养实验原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。贴壁细胞需经消化后才能分瓶。ThankyouThankyou
