1、细细 菌菌 感感 染染 的的 检检测测 形态学检查形态学检查 可疑细菌可疑细菌感染感染 血清（双血清（双份）标本份）标本 含菌含菌标本标本 直接凝集试验直接凝集试验 乳胶凝集试验乳胶凝集试验 补体结合试验补体结合试验 ELISA等等 细菌分离培细菌分离培养与鉴定养与鉴定 细菌成细菌成分检测分检测 凝集试验、免疫荧光技术凝集试验、免疫荧光技术 酶免疫技术、免疫印迹试验等酶免疫技术、免疫印迹试验等 细菌培养、形态学检查细菌培养、形态学检查 生物试验、血清学鉴定生物试验、血清学鉴定 动物试验、药物敏感试验动物试验、药物敏感试验 核酸杂交、核酸杂交、PCR 16S rRNA基因序列分析基因序列分析 基
2、因芯片等基因芯片等 核酸核酸检测检测 抗原抗原检测检测 特异性抗特异性抗体检测体检测 实验二实验二 细菌的生长繁殖、细菌的生长繁殖、消毒与灭菌消毒与灭菌 一、讨论：一、讨论：1 1、消毒灭菌的方法、实验室生物安全、消毒灭菌的方法、实验室生物安全 2 2、细菌的人工培养：培养基、细菌培养技术、细菌生长现象、细菌的人工培养：培养基、细菌培养技术、细菌生长现象 二、示教：二、示教：1 1、消毒灭菌的常用方法、消毒灭菌的常用方法 2 2、药敏实验、药敏实验 3 3、培养基制备、种类、用途、培养基制备、种类、用途 4 4、细菌生长现象观察、细菌生长现象观察 三、操作：细菌的接种（液体、半固体、固体培养基
3、）三、操作：细菌的接种（液体、半固体、固体培养基）(一）消毒灭菌方法、实验室生物安全一）消毒灭菌方法、实验室生物安全 1.1.常用术语常用术语 消毒消毒(disinfection)(disinfection)：利用理化因素杀死物体或环境中病原微利用理化因素杀死物体或环境中病原微生物的措施。并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物生物的措施。并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物 灭菌灭菌(sterilization)(sterilization)：利用理化因素杀死物体上所有微生物利用理化因素杀死物体上所有微生物的过程，包括芽胞。的过程，包括芽胞。无菌操作（无菌操作（aseptic techn
4、ique)aseptic technique)：防止细菌进入人体或其他物防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。品的操作技术。（2 2）常用方法）常用方法 物理物理消毒灭菌法消毒灭菌法：热力灭菌法热力灭菌法：干热灭菌法干热灭菌法、湿热灭菌法湿热灭菌法 辐射杀菌法：电离辐射辐射杀菌法：电离辐射-X X、射线射线 非电离辐射非电离辐射-紫外线、日光、微波紫外线、日光、微波 滤过除菌法：滤过除菌法滤过除菌法：滤过除菌法 干燥低温抑菌法：抑菌和灭菌干燥低温抑菌法：抑菌和灭菌 化学化学消毒灭菌法消毒灭菌法：生物生物消毒灭菌法消毒灭菌法 热力灭菌法 干热灭菌干热灭菌 焚烧、烧灼、焚烧、烧灼、红外线红外线 干
5、烤（干烤（160170/2h160170/2h）热力灭菌法 湿热灭菌湿热灭菌 巴氏消毒法：巴氏消毒法：6230min 6230min 或或72 30sec72 30sec 煮沸法煮沸法 30min30min 流动蒸气消毒法流动蒸气消毒法 间歇蒸气灭菌法间歇蒸气灭菌法 高压蒸气灭菌法：高压蒸气灭菌法：121,1.05Kg/cm121,1.05Kg/cm2 2(15(15个大气压个大气压),20min),20min 辐射杀菌法辐射杀菌法 电离辐射：电离辐射：X X、射线射线 原理原理:通过产生通过产生OHOH、O O2 2等活性游离基进行杀菌；通过破坏等活性游离基进行杀菌；通过破坏DNADNA的结
6、构导致菌体死亡的结构导致菌体死亡 非电离辐射：非电离辐射：紫外线紫外线、微波、超声波、日光、微波、超声波、日光 辐射杀菌法辐射杀菌法：非电离辐射：非电离辐射 .紫外线：紫外线：200 200 300nm300nm日光日光(最佳：最佳：265265266nm)266nm)原理：导致原理：导致DNADNA分子构型改变分子构型改变DNADNA复制出现差错复制出现差错 用途：只用于空气和物品表面的消毒（注意防护）用途：只用于空气和物品表面的消毒（注意防护）.微波：细菌体内的蛋白质、核酸等分子在微波场下高速旋微波：细菌体内的蛋白质、核酸等分子在微波场下高速旋转、振动，细菌蛋白质凝固、核酸变性而死亡。转、
7、振动，细菌蛋白质凝固、核酸变性而死亡。常用于对非金属器械的消毒，优点是无污染而且迅速常用于对非金属器械的消毒，优点是无污染而且迅速 。.超声波是指频率大于超声波是指频率大于20kHz20kHz的声波，其频率高，波长短，定的声波，其频率高，波长短，定向性好，穿透力强。向性好，穿透力强。原理：空化作用原理：空化作用 用途：液体或可放置液体中不影响其性能的物品用途：液体或可放置液体中不影响其性能的物品 滤过除菌法 贝克菲滤器贝克菲滤器 蔡氏滤器蔡氏滤器 玻璃滤器玻璃滤器 膜滤器膜滤器 孔径孔径 0.22um0.22um-0.45um0.45um除菌除菌 空气过滤器空气过滤器:无菌棉花、活性炭及细无菌
8、棉花、活性炭及细玻璃纤维等玻璃纤维等 可对空气进行过滤除菌可对空气进行过滤除菌 2、化学消毒灭菌法 常用消毒剂常用消毒剂(disinfectants)(disinfectants)的杀菌机制的杀菌机制 使菌体蛋白变性或凝固使菌体蛋白变性或凝固 干扰微生物酶系统和影响其代谢干扰微生物酶系统和影响其代谢 损伤细胞壁、细胞膜损伤细胞壁、细胞膜 环氧乙烷消毒设备环氧乙烷消毒设备 化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法 高效消高效消毒剂毒剂 highhigh-level level 中效消毒中效消毒剂剂 intermediateintermediate-levellevel 低效消毒剂低效消毒剂 lowlow-l
9、evellevel 可杀死包括细菌芽胞在可杀死包括细菌芽胞在内所有微生物内所有微生物 不能杀死芽胞，可杀死不能杀死芽胞，可杀死细菌繁殖体、真菌、大细菌繁殖体、真菌、大多数病毒多数病毒 可杀死大多数细菌繁殖可杀死大多数细菌繁殖体，对真菌、病毒杀灭体，对真菌、病毒杀灭力弱力弱 1 1.含氯消毒剂含氯消毒剂 2 2.过氧化物消毒剂过氧化物消毒剂 3 3.醛类消毒剂醛类消毒剂 4 4.环氧乙烷环氧乙烷 1 1.含碘消毒剂含碘消毒剂 2 2.醇类消毒剂醇类消毒剂 1.1.季铵盐类季铵盐类 2 2.氯已定氯已定 3 3.高锰酸钾高锰酸钾 医疗器械物品的消毒灭菌医疗器械物品的消毒灭菌 高危器械物品高危器械物
10、品 需进入无菌组织的物品需进入无菌组织的物品。所有这些物品都应该灭菌所有这些物品都应该灭菌。中危器械物品中危器械物品 不进入无菌组织但接触黏膜的器械不进入无菌组织但接触黏膜的器械。采用消毒即可采用消毒即可。低危器械物品低危器械物品 只接触未损伤皮肤只接触未损伤皮肤但但不进入无菌组织和不接触黏膜的物品不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。一般用一般用后清洗后清洗、消毒即可消毒即可。快速周转的医疗器械快速周转的医疗器械 室内空气消毒灭菌室内空气消毒灭菌 a.物理消毒法物理消毒法 紫外线照射紫外线照射（1.5W/m3，1h）最常用最常用；滤过除菌滤过除菌：空气通过孔径小于空气通过孔径小于0.2 m的高效
11、过滤装置的高效过滤装置以除去细菌和带菌尘埃以除去细菌和带菌尘埃 b化学消毒法化学消毒法 包括化学消毒剂喷雾和熏蒸包括化学消毒剂喷雾和熏蒸 过氧乙酸喷雾过氧乙酸喷雾、熏蒸熏蒸；过氧化氢喷雾过氧化氢喷雾；二氧化氯溶液二氧化氯溶液喷洒；喷洒；中草药点燃烟熏中草药点燃烟熏 手和皮肤的消毒手和皮肤的消毒 用肥皂和流动水经常并正确洗手用肥皂和流动水经常并正确洗手 病原微生物污染时应用消毒剂消毒病原微生物污染时应用消毒剂消毒 消毒灭菌的方法消毒灭菌的方法 热力灭菌法热力灭菌法 辐射杀菌法辐射杀菌法 滤过除菌法滤过除菌法 干燥与低温抑菌法干燥与低温抑菌法 干热灭菌法干热灭菌法 湿热灭菌法湿热灭菌法 物理消毒灭
12、菌法物理消毒灭菌法 化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法 高效消毒剂高效消毒剂 中效消毒剂中效消毒剂 低效消毒剂低效消毒剂 3 3、实验室生物安全、实验室生物安全 生物安全生物安全（biosafetybiosafety）是生物技术安全的简称是生物技术安全的简称 狭义狭义的的指现代生物技术的研究指现代生物技术的研究、开发开发、应用及转应用及转基因生物可能对生物多样性基因生物可能对生物多样性、生态环境和人类健生态环境和人类健康产生潜在的危害康产生潜在的危害。广义广义的的指与生物有关的各种因素指与生物有关的各种因素 对社会对社会、经济经济、人类健康及生态人类健康及生态 环境所产生的危害或潜在风险环境所产生的
13、危害或潜在风险。（1）生物安全的内容）生物安全的内容 转基因生物、外来入侵物种、环境污染转基因生物、外来入侵物种、环境污染 病原微生物（感染性疾病、人畜共患疾病、病原微生物（感染性疾病、人畜共患疾病、动物疾病、食源性疾病、医院感染）动物疾病、食源性疾病、医院感染）实验室泄漏：实验室泄漏：生物武器、生物恐怖生物武器、生物恐怖 遗传资源保护遗传资源保护 合成生物技术合成生物技术 转基因及其它新型生物技术转基因及其它新型生物技术 事故引发的事故引发的生物危害生物危害 是由进行病原体研究是由进行病原体研究、教学教学、诊断诊断、治疗治疗、生物制品研发和生产等生物制品研发和生产等机构的事故导致病原体泄漏机
14、构的事故导致病原体泄漏，引发了传染病暴发的生物灾害引发了传染病暴发的生物灾害。这类这类生物灾害往往影响较大生物灾害往往影响较大，危害范围小危害范围小，造成局部灾害大造成局部灾害大，持续短持续短 19791979年年，苏联国防微生物与病毒研究所炭疽芽孢干粉制剂车间的苏联国防微生物与病毒研究所炭疽芽孢干粉制剂车间的加压系统爆炸加压系统爆炸，约约1010公斤芽孢粉剂泄漏公斤芽孢粉剂泄漏，造成斯维尔德洛夫斯克造成斯维尔德洛夫斯克城数百人伤亡城数百人伤亡。20032003年年9 9月新加坡国立卫生研究院月新加坡国立卫生研究院BSLBSL3 3实验室发生研究人员感实验室发生研究人员感染染SRASSRAS病
15、毒的事故病毒的事故。20032003年年1212月我国台湾省一实验室也发生了研究人员感染月我国台湾省一实验室也发生了研究人员感染SRASSRAS病毒病毒的事故的事故，20042004年年4 4月我国国家月我国国家CDCCDC的专业实验室发生了的专业实验室发生了SARSSARS的实验室人员感的实验室人员感染染。（2）如何实现实验室生物安全？）如何实现实验室生物安全？加强管理，规范行为，消除隐患，确保安全加强管理，规范行为，消除隐患，确保安全 如何管？如何管？依法、规范管理依法、规范管理 管那些？管那些？病原微生物、实验室设立、病原微生物、实验室设立、风险评估、实验活动、实验风险评估、实验活动、实
16、验 装备、废弃物、人员装备、废弃物、人员 类类 别别 根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，第一类第一类 能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物未发现或者已经宣布消灭的微生物 。第第二二类类 能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。第第三三类类 能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物 第第四四类类 在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等病病毒等 病原微生物分类管理病原微生物分
