1、免疫测定室内质控血清的应用免疫测定室内质控血清的应用 张 瑞 卫生部临床检验中心 免疫测定用室内质控血清的调整免疫测定用室内质控血清的调整 随着临床实验室检验水平的不断提高和检测试剂质量的不断改进，原有的室内质控物已经不能满足室内质控工作的需要，因此部中心对免疫测定用室内质控血清的含量进行了调整，同时改进了包装。针对的检测项目针对的检测项目 HBsAg 抗HCV 抗HIV 梅毒螺旋体抗体 提供不同含量的质控物是为了实验室根据不同试剂的检测值选择合适的质控物，使质控物的检测值（S/CO值）在1.54之间。HBsAg质控血清定值的调整质控血清定值的调整 HBsAg定值单位改变：2004年，WHO研
2、制了第二代HBsAg标准物质，并将定值单位从ng/ml改为IU/ml。现1IU/ml0.5ng/ml 定值（调整前）定值（调整后）调整原因 0.2IU/ml 用于一些灵敏度较高的试剂 0.5IU/ml 0.5ng/ml 1IU/ml 1ng/ml 2IU/ml 2ng/ml 4IU/ml 5ng/ml 浓度较高 1万ng/ml “钩状效应”HBsAg室内质控品的选用室内质控品的选用 定值 适用试剂 0.2IU/ml Murex，生物梅里埃试剂 0.5IU/ml Ortho，Bio-Rad试剂，雅培i2000和Axsym检测系统和配套试剂 1IU/ml 国产试剂盒（万泰、新创、科华），血站和医院
3、用 2IU/ml 国产试剂盒（万泰、新创、科华），医院用 4IU/ml 国产试剂盒（万泰、新创、科华），医院用 抗抗HCV质控血清定值的调整及选用质控血清定值的调整及选用 定值（调整前）定值（调整后）适用试剂 1NCU/ml 国产试剂盒（万泰、新创、科华、丽珠）和DiaSorin的试剂 1NCU/ml 2NCU/ml Murex、Ortho等试剂 2NCU/ml 4NCU/ml 雅培i2000和Axsym检测系统和配套试剂 现现1NCU/ml0.5NCU/ml 抗抗HIV质控血清定值的调整及选用质控血清定值的调整及选用 定值（调整前）定值（调整后）适用试剂 1NCU/ml 国产试剂盒（万泰、新
4、创、科华、丽珠）1NCU/ml 2NCU/ml Bio-Rad等试剂 2NCU/ml 4NCU/ml 进口试剂及配套仪器 4NCU/ml 8NCU/ml 进口试剂及配套仪器 现现1NCU/ml0.5NCU/ml 1NCU/ml的确定：参考国际单位定值方法，采用的确定：参考国际单位定值方法，采用5种或以上试剂盒，结种或以上试剂盒，结果果63的试剂盒（按泊松分布计算）检测结果为阳性的值为的试剂盒（按泊松分布计算）检测结果为阳性的值为1NCU/ml。梅毒螺旋体抗体定值的调整及选用梅毒螺旋体抗体定值的调整及选用 定值（调整前）定值（调整后）适用试剂 1NCU/ml（特异）国产试剂盒 2NCU/ml（特
5、异）国产试剂盒 2NCU/ml（特异）4NCU/ml（特异）进口试剂及/或配套仪器 2NCU/ml（非特异）2NCU/ml（非特异）RPR、TRUST 现现1NCU/ml0.25NCU/ml 注意事项注意事项 室内质控物仅用于相应项目的室内质量控制，不能用于阴阳性结果的判断。定值质控物不适合评价试剂盒整体性能是否合格,但可用于试剂的批内、批间变异和测定下限的评价质检。如果需要对试剂进行比较评价和全面质检请选用相应项目的临床考核血清盘。临床考核血清盘临床考核血清盘 项目项目 规格规格 支数/套 HBsAg 0.5ml/支 40 抗HCV 0.25ml/支 40 梅毒螺旋体抗体 0.5ml/支 4
6、0 HBsAg血清盘血清盘 灵敏度 特异性 HBsAg变异的检测能力：如G145R等 Hook效应导致的假阴性 样本样本编号编号 含量含量(IU/ml)A（S/CO)B（S/CO)C（S/CO)D（S/CO)E（S/CO)1 68 0.2 0.4 0.4 9.5 7.3 2 810 1.0 0.7 0.4 9.8 14.9 10 2000000 40.8 37.6 36.2 27.1 24.1 16 约约1600000 40.0 43.9 41.0 47.1 35.0 8 阴性阴性 20.9 1.5 0.4 0.7 0.7 19 阴性阴性 9.4 7.7 19.2 0.4 0.4 27 阴性阴
7、性 16.6 0.3 0.8 0.5 0.6 36 0.5-1.0 1.6 1.6 2.9 7.3 8.5 37 0.5-1.0 1.1 1.3 3.0 3.8 6.8 38 约约0.2 0.6 0.8 1.8 2.4 3.9 39 0.2-0.5 0.2 0.6 0.9 1.1 3.0 HBsAg血清盘血清盘 抗抗HCV血清盘血清盘 不同试剂厂家的不同试剂厂家的ELISAELISA试剂盒所用包被抗原的差异：试剂盒所用包被抗原的差异：目前抗目前抗HCVHCV检测检测ELISAELISA试剂盒均采用试剂盒均采用HCVHCV的基因工程或合成多肽的基因工程或合成多肽抗原（核心区、抗原（核心区、NS3
8、NS3、NS4NS4和和NS5NS5等）包被固相，以间接法进行等）包被固相，以间接法进行测定，上述测定，上述HCVHCV抗原的组合、来源及用量等方面的差异而造成抗原的组合、来源及用量等方面的差异而造成检测结果不一致。检测结果不一致。抗抗HCVHCV ELISAELISA出现假阳性的主要原因有：出现假阳性的主要原因有：1 1.类风湿因子类风湿因子（RFRF）的干扰的干扰 2 2.高免疫球蛋白血症高免疫球蛋白血症 3 3.标本中超氧化物歧化酶标本中超氧化物歧化酶（SODSOD）的干扰的干扰 4 4.用于固相包被的用于固相包被的HCVHCV基因工程抗原不纯基因工程抗原不纯 抗抗HCV血清盘血清盘 样
9、本样本 编号编号 A B C D E F G RIBA NS4 NS3 C NS5 28 1.22 1.87 0.65 0.78 0.77 0.67 0.3 +33 7.83 11.9 6.32 4.28 6.2 4.76 0.62 +34 0.92 0.68 0.61 0.84 1.14 0.65 0.3+35 6.41 4.11 1.86 2.99 2.81 2.04 0.34 +38 1.6 2.06 1.86 0.68 1.68 2.05 1.38 +15 2.42 0.82 0.55 0.65 0.5 0.5 0.5 检测方法 1.检测非特异性抗体-使用类脂质抗原的血清学试验：RPR
10、、TRUST 2.检测特异性抗体-使用密螺旋体抗原的血清学试验：FTA-ABS、TPHA、TPPA、ELISA、WB 梅毒螺旋体抗体血清盘梅毒螺旋体抗体血清盘 梅毒螺旋体抗体血清盘梅毒螺旋体抗体血清盘 TP14 TP17 TP45 TP47 EUIgM EUIgG A(OD值值)B C(OD值值)D(OD值值)RPR 胶体金胶体金 1+0.09 0.736 3.199 27.35 3.776 3.604+4+0.335 0.96 4.041 27.61 2.169 2.006+7+0.256 1.12 0.654 31.24 1.215 0.978+23+/-+/-+0.225 1.13 3.
11、948 30.24 1.897 1.367+33+0.160 0.082 1.329 0.90 0.027 0.662 +Hook效应 原倍原倍 1：10 1：20 1：40 1：80 1：160 1 3.357 2.946 2.099 1.428 0.936 0.490 4 2.277 2.256 1.970 1.615 1.060 0.603 7 1.703 3.066 2.938 3.023 3.125 2.289 23 2.360 3.089 2.884 2.975 2.258 1.481 梅毒螺旋体抗体血清盘梅毒螺旋体抗体血清盘 1、4、7、23号血清稀释结果显示存在hook效应。I
12、gM抗体漏检 梅毒螺旋体抗体血清盘梅毒螺旋体抗体血清盘 TP14 TP17 TP45 TP47 EUIgM EUIgG A(OD值值)B C(OD值值)D(OD值值)RPR 胶体金胶体金 1+0.09 0.736 3.199 27.35 3.776 3.604+4+0.335 0.96 4.041 27.61 2.169 2.006+7+0.256 1.12 0.654 31.24 1.215 0.978+23+/-+/-+0.225 1.13 3.948 30.24 1.897 1.367+33+0.160 0.082 1.329 0.90 0.027 0.662 +使用方法使用方法 质控血
13、清都经过灭活处理，但仍应按照有潜在生物传质控血清都经过灭活处理，但仍应按照有潜在生物传染性样本对待。染性样本对待。HBsAgHBsAg，抗，抗HCVHCV，抗，抗HIVHIV，梅毒螺旋体抗体的质控血清加，梅毒螺旋体抗体的质控血清加样时按待测病人原始样本对待，依照试剂盒说明书进样时按待测病人原始样本对待，依照试剂盒说明书进行操作。行操作。实验室收到血清后应将血清保存在实验室收到血清后应将血清保存在1818以下，保质期以下，保质期为为1 1年。使用时将血清在室温复融，应注意待血清完全年。使用时将血清在室温复融，应注意待血清完全融化后平衡至室温并充分混匀。复融后的血清如果当融化后平衡至室温并充分混匀。复融后的血清如果当日未使用完且无污染，可保存在日未使用完且无污染，可保存在2 288，限，限1 1周内用完，周内用完，避免反复冻融和重新分装质控血清样本。避免反复冻融和重新分装质控血清样本。谢谢 谢！谢！
