1、2.2.2 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体 1 1、概念、概念 动物细胞融合动物细胞融合也称细胞杂也称细胞杂交交，是指，是指两个或多个两个或多个动物细动物细胞形成一个细胞的过程胞形成一个细胞的过程 一、动物细胞融合一、动物细胞融合 2 2、原理：、原理：膜的流动性膜的流动性 一、动物细胞融合一、动物细胞融合 3 3、结果：形成杂交细胞。、结果：形成杂交细胞。杂交细胞：杂交细胞：融合后融合后形成的具形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的有原来两个或多个细胞遗传信息的单核单核 细胞。细胞。4 4、诱导方法：、诱导方法：聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）、）、灭活的病毒
2、、电激等。灭活的病毒、电激等。5 5、过程：、过程：3 3、过程：、过程：细胞相互凝集细胞相互凝集 膜上蛋白质分子和膜上蛋白质分子和脂质分子重新排布脂质分子重新排布 细胞膜打开细胞膜打开 细胞发生融合细胞发生融合 病毒表面含有的糖蛋白和一些病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜的糖蛋白发生酶能够与细胞膜的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集。作用，使细胞相互凝集。6 6、优点：、优点：突破了有性杂交的局限，突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能使远缘杂交成为可能 7 7、应用：、应用：用于研究细胞遗传、细胞免用于研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培养等的重疫、肿瘤和生物新品种培养等的重要手
3、段。要手段。最重要的用途：制备单克隆最重要的用途：制备单克隆抗体抗体 2 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？杂交或融合过程有什么影响？3 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？方法有哪些？离心、振动、电激等物理方法；离心、振动、电激等物理方法；PEGPEG等化学方法等化学方法 问题讨论问题讨论 动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。不须去除细胞壁和再生出细胞壁。、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个、植物体细胞
4、杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能，只能得到杂交细胞不能，只能得到杂交细胞 4 4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？有其他方法吗？能，还可以利用灭活的病毒（生能，还可以利用灭活的病毒（生物方法）进行诱导物方法）进行诱导 问题讨论问题讨论、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？原理是否相同？相同，都是细胞膜的流动性相同，都是细胞膜的流动性 问题讨论问题讨论 6 6、为什么要用、为什么要用灭活灭活的病毒？的病毒？病毒
5、一般对生物体是有伤害的。病毒一般对生物体是有伤害的。仙台病毒仙台病毒 物理或物理或 化学方法化学方法 丧失感染活性丧失感染活性 保留融合活性保留融合活性 主要用于制备主要用于制备 单克隆抗体单克隆抗体 获得杂种植株获得杂种植株 物理、化学方法物理、化学方法 （同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒 物理（离心、振物理（离心、振 荡、电激）荡、电激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）使细胞分散后诱使细胞分散后诱 导细胞融合导细胞融合 去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱 导原生质体融合导原生质体融合 细胞膜的流动性细胞膜的流动性 细胞膜的流动性细胞膜的流动性 用途用途 诱导方法诱导方法 步骤步骤 融合的原理融
6、合的原理 动物细胞融合动物细胞融合 植物体细胞杂交植物体细胞杂交 比较项目比较项目 8 8、植物、动物细胞融合的比较、植物、动物细胞融合的比较 1.1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？2.2.抗体是如何产生的？抗体是如何产生的？二、单克隆抗体二、单克隆抗体（一）获得抗体的传统方法（一）获得抗体的传统方法 1、方法：、方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，从动物血清中分离所需抗体。物产生抗体，从动物血清中分离所需抗体。2、缺点：、缺点：产量少、纯度低、特异性差产量少、纯度低、特异性差 .3、解决问题的设想、解决问题的设想:免疫反应过程中
7、，免疫反应过程中，每一个每一个B淋巴淋巴细胞细胞只分泌一种只分泌一种特异性抗体。特异性抗体。克隆单一的克隆单一的B淋巴细胞，形成细淋巴细胞，形成细胞群，获得大量的单一抗体。胞群，获得大量的单一抗体。4、面临的新问题：、面临的新问题：一个一个B淋巴细胞不可能在体外培养淋巴细胞不可能在体外培养条件下无限增殖的。条件下无限增殖的。.1 1、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？问题讨论问题讨论 提示：提示：1.1.什么样的细胞可以产生抗体？什么样的细胞可以产生抗体？2.2.什么样的细胞可以无限增殖？什么样的细胞可以无限增殖？2 2、瘤细胞和癌细胞有何区别？、瘤
8、细胞和癌细胞有何区别？共同点：共同点：两者都有无限增殖的能力两者都有无限增殖的能力 不同点：不同点：瘤细胞不能转移瘤细胞不能转移 1、设计方案：、设计方案：一个一个B淋巴细胞淋巴细胞只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖能无限增殖 杂种细胞杂种细胞（二）单克隆抗体的制备（二）单克隆抗体的制备 2 2、单克隆抗体制备过程、单克隆抗体制备过程 注射抗原注射抗原 B B淋巴细胞淋巴细胞 骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 细胞融合、细胞融合、筛选筛选 杂交瘤细胞杂交瘤细胞 细胞培养细胞培养 筛选筛选，继续培养，继续培养 足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群
9、特定抗体的细胞群 体外培养体外培养 注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔 单克隆抗体单克隆抗体（选择性培养基）（选择性培养基）诱导其融合的诱导其融合的方法有哪些？方法有哪些？单克隆抗体的制备 单克隆抗体的制备 B BB B BB B B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤 、细胞融合后培养液中有几种细胞？、细胞融合后培养液中有几种细胞？筛选杂种细胞筛选杂种细胞 思考：思考：杂交瘤细胞杂交瘤细胞、制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？、制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？细胞融合技术、细胞培养技术细胞融合技术、细胞培养技术 3、单克隆抗体的概念：、单克隆抗体的概念：化学性质单一，特异性强的抗体化学性质单一，特异性强的抗体
10、 4、单克隆抗体的优点：、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并可大量制备。特异性强，灵敏度高，并可大量制备。诊断疾病诊断疾病（识别作用，如（识别作用，如同位素标记单克隆抗体，同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形可诊断肿瘤、心血管畸形等）等）（三）单克隆抗体的应用（三）单克隆抗体的应用 优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速 用于治疗疾病和运载药物（用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症主要用于癌症治疗，也可运载药物，如治疗，也可运载药物，如 “生物导弹”）“生物导弹”）（导向作用，作为载体，生物导弹（导向作用，作为载体，生物导弹=单克隆抗体单克隆抗体+药物，用于治疗
11、肿瘤）药物，用于治疗肿瘤）（位置准确、疗效高、副作用小）（位置准确、疗效高、副作用小）小结小结 两个过程两个过程 动物细胞培养过程动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程 三个“一”三个“一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒 一个新细胞一个新细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞 一个优势一个优势单克隆抗体特异单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势性强、灵敏度高的优势 单克隆抗体单克隆抗体 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案体实验方案 2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、
12、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_ 3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_ 5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体 B细胞细胞 抗体抗体 细胞融合细胞融合 灭活病毒灭活病毒 双亲细胞双亲细胞 分泌抗体分泌抗体 无限增殖无限增
13、殖 原代原代 传代传代 50 B 体外培养体外培养 骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞 足够数量的细胞群足够数量的细胞群 注射到注射到 小鼠腹腔小鼠腹腔 A C 世界上第一只克隆羊世界上第一只克隆羊“多莉”的培育过程如“多莉”的培育过程如图所示，请据图回答：图所示，请据图回答：乙乙 甲甲 a b c d e f(1)图中的甲为苏格兰绵羊，图中的甲为苏格兰绵羊，乙为多莉羊。那么，乙为多莉羊。那么，a和和b是通过是通过_分裂形成的，分裂形成的，其其DNA含量是体细胞的含量是体细胞的 _ ；c肯定是肯定是_ 细细胞，乙的遗传性状与提供胞，乙的遗传性状与提供 _的绵羊的绵羊 一致一致.减数减数
14、 一半一半 体体 细胞核细胞核 乙乙 甲甲 a b c d e f(2)产生产生 甲和乙的过程分别甲和乙的过程分别是是和和（3）在形成乙是的过程中，）在形成乙是的过程中，需要将需要将d的细胞核取出，将的细胞核取出，将c细胞核移入细胞核移入d细胞内，此技术细胞内，此技术叫叫。所需的受体细胞。所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因大多采用动物卵细胞的原因是是（4）绵羊的白色对黑色为）绵羊的白色对黑色为显色。若甲是白色绵羊，要显色。若甲是白色绵羊，要判断它是否纯合体，选用与判断它是否纯合体，选用与它交配的绵羊最好是它交配的绵羊最好是-有性生殖有性生殖 克隆克隆 核移植核移植 卵细胞大，易于操作；卵细
15、卵细胞大，易于操作；卵细胞具有继续分化的潜能胞具有继续分化的潜能。黑毛黑毛 乙乙 甲甲 a b c d e f（5）在产生多莉羊时，需将）在产生多莉羊时，需将e细胞形成的早期胚胎移入另一细胞形成的早期胚胎移入另一头母羊（头母羊（f）子宫里，这种技术）子宫里，这种技术在细胞工程中叫在细胞工程中叫（6）继植物组织培养后，克隆）继植物组织培养后，克隆绵羊的培育成功，证明动物细绵羊的培育成功，证明动物细胞也有胞也有（7）在繁殖多莉羊的过程中，）在繁殖多莉羊的过程中，是否遵循孟德尔遗传规律？多是否遵循孟德尔遗传规律？多莉羊的性状与莉羊的性状与d羊、羊、c羊及羊及f羊的羊的关系是什么？关系是什么？胚胎移植胚胎移植 全能性全能性 不遵循，多莉羊的多数性状象不遵循，多莉羊的多数性状象c羊，个别性羊，个别性状象状象d羊，发育也会受到羊，发育也会受到f羊影响羊影响。
