1、第三章第三章 灭菌和消毒灭菌和消毒 消毒和灭菌两个词在实际使用中常被消毒和灭菌两个词在实际使用中常被混用，其实它们的含义是有所不同的。混用，其实它们的含义是有所不同的。消消毒毒是指应用消毒剂等方法杀灭物体表面和是指应用消毒剂等方法杀灭物体表面和内部的病原菌营养体的方法，而内部的病原菌营养体的方法，而灭菌灭菌是指是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物，使之呈无菌状态。所有微生物，使之呈无菌状态。一、物理方法一、物理方法 1、温度、温度 利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方法。高温可使微生物细胞用
2、而又方便有效的方法。高温可使微生物细胞内的内的蛋白质和酶类发生变性而失活蛋白质和酶类发生变性而失活，从而起灭，从而起灭菌作用，低温通常起抑菌作用。菌作用，低温通常起抑菌作用。）干热灭菌法）干热灭菌法 a.灼烧灭菌法灼烧灭菌法：利用火焰直接把微生物烧：利用火焰直接把微生物烧死。此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，死。此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，所以使用范围有限，只适合于接种针、环、试所以使用范围有限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品或实验动物的尸体等管口及不能用的污染物品或实验动物的尸体等的灭菌。的灭菌。b.干热空气灭菌法干热空气灭菌法：这是实验室中常用的：这是实验室中常
3、用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至中，升温至160，恒温，恒温1小时即可。此法适用小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。于玻璃皿、金属用具等的灭菌。）湿热灭菌法）湿热灭菌法 在同样的温度下，湿热灭菌的效果比干热在同样的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好，这是因为一方面灭菌好，这是因为一方面细胞内蛋白质含水量细胞内蛋白质含水量高，容易变性高，容易变性。另一方面。另一方面高温水蒸汽对蛋白质高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速从而加速蛋白质变性而迅速死亡。死亡。a.巴氏消毒法巴氏消毒法：有些食物
4、会因高温破：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质量，如牛奶、酱油、坏营养成分或影响质量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来杀死其啤酒等，所以只能用较低的温度来杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风味，又进行了消毒，保证了食品卫生。和风味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在该法一般在62，30分钟分钟即可达到消毒目即可达到消毒目的。此法为法国微生物学家巴斯德首创，的。此法为法国微生物学家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。故名为巴氏消毒法。b.煮沸消毒法煮沸消毒法：直接将要消毒的物品：直接将要消毒的物品放入放入清水清水中，中，煮沸煮沸15分钟
5、分钟，即可杀死细菌，即可杀死细菌的全部营养和部分芽孢。若在清水中加入的全部营养和部分芽孢。若在清水中加入1%碳酸钠碳酸钠或或2%的石炭酸的石炭酸，则效果更好。，则效果更好。此法适用于注射器、毛巾及解剖用具的消此法适用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒。毒。c.间歇灭菌法间歇灭菌法：上述两种方法在常压下，：上述两种方法在常压下，只能起到消毒作用，而很难做到完全无菌。只能起到消毒作用，而很难做到完全无菌。若采用间歇灭菌的方法，就能杀灭物品中所若采用间歇灭菌的方法，就能杀灭物品中所有的微生物。有的微生物。具体做法具体做法是：将待灭菌的物品是：将待灭菌的物品加热至加热至100，1530分钟分钟，杀死其中的
6、营，杀死其中的营养体。然后冷却，放入养体。然后冷却，放入37恒温箱中过夜恒温箱中过夜，让残留的芽孢萌发成营养体。第让残留的芽孢萌发成营养体。第2天再天再重复重复上述步骤，上述步骤，三次左右三次左右，就可达到灭菌的目的。，就可达到灭菌的目的。此法不需加压灭菌锅，适于推广，但操作麻此法不需加压灭菌锅，适于推广，但操作麻烦，所需时间长。烦，所需时间长。d.加压蒸汽灭菌法加压蒸汽灭菌法：这是发酵工业、：这是发酵工业、医疗保健、食品检测和微生物学实验室中医疗保健、食品检测和微生物学实验室中最常用的一种灭菌方法。它适用于各种耐最常用的一种灭菌方法。它适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌，也适用于玻热、体积
7、大的培养基的灭菌，也适用于玻璃器皿、工作服等物品的灭菌。璃器皿、工作服等物品的灭菌。加压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品放在一个可加压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的，以大量蒸汽密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的，以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸汽压的上升，水的沸使其中压力升高。由于蒸汽压的上升，水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到点也随之提高。在蒸汽压达到1.055公斤公斤/厘米厘米2时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到121。在。在这种情况下，微生物（包括芽孢）在这种情况下，微生物（包括芽孢）在1520分钟分钟便会被杀死，而达到灭菌目的。如灭菌的对象
8、便会被杀死，而达到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等面积大、含菌多、传热差的是砂土、石蜡油等面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时间。物品，则应适当延长灭菌时间。在加压蒸汽灭菌中，要引起注意的一个问在加压蒸汽灭菌中，要引起注意的一个问题是，在恒压之前，一定要题是，在恒压之前，一定要排尽灭菌锅中的冷排尽灭菌锅中的冷空气空气，否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具，否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系，这样会大大降低灭菌效果。对应关系，这样会大大降低灭菌效果。）影响灭菌的因素）影响灭菌的因素 a.不同的微生物或同种微生物的不同菌龄不同的微生物或同种微生物的不同菌龄对高温的敏感性不同
9、。多数微生物的营养体和对高温的敏感性不同。多数微生物的营养体和病毒在病毒在5065，10分钟分钟就会被杀死；但各种就会被杀死；但各种孢子、特别是芽孢最能抗热，其中抗热性最强孢子、特别是芽孢最能抗热，其中抗热性最强的是嗜热脂肪芽孢杆菌，要在的是嗜热脂肪芽孢杆菌，要在121，12分钟分钟才被杀死。对同种微生物来讲，幼龄菌比老龄才被杀死。对同种微生物来讲，幼龄菌比老龄菌对热更敏感。菌对热更敏感。b.微生物的数量多少显然会影响灭菌的效微生物的数量多少显然会影响灭菌的效果，数量越多，热死时间越长。果，数量越多，热死时间越长。c.培养基的成分与组成也会影响灭菌效果。培养基的成分与组成也会影响灭菌效果。一般
10、地讲，蛋白质、糖或脂肪存在，则提高抗一般地讲，蛋白质、糖或脂肪存在，则提高抗热性，热性，pH在在7附近，抗热性最强，偏向两极，附近，抗热性最强，偏向两极，则抗热能力下降，而不同的盐类可能对灭菌产则抗热能力下降，而不同的盐类可能对灭菌产生不同的影响；固体培养基要比液体培养基灭生不同的影响；固体培养基要比液体培养基灭菌时间长。菌时间长。）灭菌对培养基成分的影响）灭菌对培养基成分的影响 a.pH值普遍下降。值普遍下降。b.产生混浊或沉淀，这主要是由于一些离产生混浊或沉淀，这主要是由于一些离子发生化学反应而产生混浊或沉淀。例如子发生化学反应而产生混浊或沉淀。例如Ca2+与与PO43-化合，就会产生磷酸
11、钙沉淀。化合，就会产生磷酸钙沉淀。c.不少培养基颜色加深。不少培养基颜色加深。d.体积和浓度有所变化。体积和浓度有所变化。e.营养成分有时受到破坏。营养成分有时受到破坏。2、辐射、辐射 利用辐射进行灭菌消毒，可以避免高温灭菌利用辐射进行灭菌消毒，可以避免高温灭菌或化学药剂消毒的缺点，所以应用越来越广，目或化学药剂消毒的缺点，所以应用越来越广，目前主要应用在以下几个方面：前主要应用在以下几个方面：）接种室、手术室、食品、药物包装室常）接种室、手术室、食品、药物包装室常应用紫外线杀菌。应用紫外线杀菌。）应用）应用射线作食品表面杀菌，射线作食品表面杀菌，射线用于射线用于食品内部杀菌。经辐射后的食品，
12、因大量微生物食品内部杀菌。经辐射后的食品，因大量微生物被杀灭，再用冷冻保藏，可使保存期延长。被杀灭，再用冷冻保藏，可使保存期延长。3、过滤、过滤 采用机械方法，设计一种滤孔比细菌还小采用机械方法，设计一种滤孔比细菌还小的筛子，做成各种过滤器。通过过滤，只让液的筛子，做成各种过滤器。通过过滤，只让液体培养基从筛子中流下，而把各种微生物菌体体培养基从筛子中流下，而把各种微生物菌体留在筛子上面，从而达到除菌的目的。这种灭留在筛子上面，从而达到除菌的目的。这种灭菌方法适用于一些菌方法适用于一些对热不稳定对热不稳定的的体积小体积小的的液体液体培养基培养基的灭菌以及的灭菌以及气体气体的灭菌。它的最大优点的
13、灭菌。它的最大优点是是不破坏培养基中各种物质的化学成分不破坏培养基中各种物质的化学成分。但是。但是比细菌还小的病毒仍然能留在液体培养基内，比细菌还小的病毒仍然能留在液体培养基内，有时会给实验带来一定的麻烦。有时会给实验带来一定的麻烦。二、化学方法二、化学方法 一般化学药剂一般化学药剂无法杀死所有的微生物，而无法杀死所有的微生物，而只能杀死其中的病原微生物，所以只能杀死其中的病原微生物，所以是起消毒剂是起消毒剂的作用的作用，而不是灭菌剂。，而不是灭菌剂。能迅速杀灭病原微生物的药物，称为能迅速杀灭病原微生物的药物，称为消毒消毒剂剂。能抑制或阻止微生物生长繁殖的药物，称。能抑制或阻止微生物生长繁殖的
14、药物，称为为防腐剂防腐剂。但是一种化学药物是杀菌还是抑菌，。但是一种化学药物是杀菌还是抑菌，常不易严格区分。常不易严格区分。消毒剂在低浓度时也能杀菌。由于消毒消毒剂在低浓度时也能杀菌。由于消毒防腐剂没有选择性，因此对一切活细胞都有防腐剂没有选择性，因此对一切活细胞都有毒性，不仅能杀死或抑制病原微生物，而且毒性，不仅能杀死或抑制病原微生物，而且对人体组织细胞也有损伤作用，所以只能用对人体组织细胞也有损伤作用，所以只能用于于体表、器械、排泄物和周围环境体表、器械、排泄物和周围环境的消毒。的消毒。常用的化学消毒剂常用的化学消毒剂有：有：石碳酸、来苏水（甲石碳酸、来苏水（甲醛溶液）、氯化汞、碘酒、酒精
15、等醛溶液）、氯化汞、碘酒、酒精等。三、常用消毒剂三、常用消毒剂 1、氯化物、氯化物 2、碘化合物、碘化合物 3、溴化物、溴化物 4、季胺化合物、季胺化合物 5、酸杀菌剂、酸杀菌剂 6、阴离子酸杀菌剂、阴离子酸杀菌剂 7、酸、酸-季胺杀菌剂季胺杀菌剂 8、过氧化氢、过氧化氢 9、臭氧、臭氧 10、戊二醛、戊二醛 常用杀菌剂特性常用杀菌剂特性 特性特性 蒸汽蒸汽 碘伏碘伏 氯化物氯化物 酸酸 季胺化合物季胺化合物 杀菌效果杀菌效果 好好 营养细胞营养细胞 好好 好好 选择性选择性 杀灭酵母杀灭酵母 好好 好好 好好 好好 好好 杀灭霉菌杀灭霉菌 好好 好好 好好 好好 好好 毒性毒性 使用稀释使用
16、稀释液液 依赖于溶剂依赖于溶剂 无无 依赖于溶剂依赖于溶剂 中等中等 缓释能力缓释能力 是是 是是 是是 是是 稳定性稳定性 储藏储藏 随温度变化随温度变化 低低 很好很好 很好很好 使用使用 随温度变化随温度变化 随温度变化随温度变化 很好很好 很好很好 速度速度 快快 快快 快快 快快 快快 穿透性穿透性 差差 好好 差差 好好 很好很好 膜的形成膜的形成 无无 无到轻无到轻 无无 无无 有有 有机物影响有机物影响 无无 中等中等 高高 低低 低低 受水中其它因受水中其它因素的影响素的影响 不不 高高pH 低低pH和铁和铁 高高pH 是是 测量难易测量难易 差差 很好很好 很好很好 很好很好 很好很好 使用难易使用难易 差差 很好很好 很好很好 泡沫多泡沫多 泡沫多泡沫多 气味气味 无无 碘碘 氯氯 有一些有一些 无无 口味口味 无无 碘碘 氯氯 无无 无无 对皮肤的影响对皮肤的影响 烧伤烧伤 无无 有一些有一些 无无 无无 腐蚀性腐蚀性 无无 不腐蚀不锈钢不腐蚀不锈钢 广泛腐蚀低碳广泛腐蚀低碳钢钢 对低碳钢较差对低碳钢较差 无无 成本成本 高高 中中 低低 中中 中中 特性特性
