1、鸡新城疫免疫检测程序 教学实习内容鸡新城疫的免疫检测目的：系统掌握鸡新城疫的抗体检测技术。实验材料：新城疫疫苗、待测鸡蛋、生理盐水、5%柠檬酸钠、1%鸡红细胞悬液、胶头滴管、注射器、锥形瓶、15ml离心管、试管、96孔V型板、离心机等1.1%鸡红细胞悬液的制备1每组采取3ml左右健康鸡静脉血，迅速注入装有约0.3-0.4ml抗凝剂的离心管内，轻轻颠倒混匀；2参加适量生理盐水，混匀，3000rpmx10min，吸弃上清液和红细胞沉淀上层的白细胞层3参加适量生理盐水，重悬红细胞，3000rpmx10min，吸弃上清液。如此，重复3次。4量取红细胞沉淀的体积，用生理盐水配成1%的红细胞悬液，待用。2
2、.HA试验根据所用NDV液的凝集价，配制4单位病毒液。3.HI试验1待测卵黄样品的制备：用镊子敲破鸡蛋小头，将蛋清倒去，留蛋黄在蛋壳内；吸取0.5ml生理盐水，放入小试管内；去掉局部蛋壳，用1ml注射器不带针头吸取蛋黄0.5ml，加到有生理盐水的试管内，混匀防止其很多泡待检。2按照检测血清抗体的方法检测卵黄中的抗体。3判定和记录所检测鸡蛋的卵黄抗体效价。结果与分析对所测得的结果进行分析，确定该鸡群目前的免疫状态，并对生产提出合理建议或给出科学指导。分析并指出影响本实验结果的主要因素。二传染病的分子生物学检测PCR检测以PCV2为例1.DNA提取：将猪肝脏称重后，按照1:3WV的比例参加PBS，
3、L提取DNA。取冻融、离心后的组织悬液/血清300L，参加300 L细胞裂解缓冲液和5 L的蛋白酶K(20 mg/mL)，混匀，置50 消化2 h，每隔30 min，剧烈震荡一次；参加等体积的Tris饱和酚，充分振荡混匀，4 12000 rpm 离心10 min；取上层水相转入一新的l.5 mL eppendorf管中，参加等体积的酚：氯仿：异戊醇25:24:1混匀后，4 12000 rpm 离心10 min；用酚：氯仿：异戊醇25:24: l重复抽提一次；取上层水相转入一新的l.5 mL eppendorf管中，参加2倍体积冰预冷的无水乙醇和1/10体积的3 mol/L醋酸钠pH 5.2，室
4、温放置30 min 以沉淀基因组DNA；4 12000 rpm离心15 min，弃上清；用75%乙醇1 mL 洗涤沉淀，4 12 000 rpm 离心min后，上清，L含RNaseA(20 g/mL)的TE溶解DNA沉淀，直接用于检测病毒DNA或-20 保存待测。2.PCR检测：将所提取的DNA用特异性引物进行PCR扩增检测组织中PCV2。25 L反响体系如下：10Taq Reaction Buffer 2.5 L10 mmol/L dNTPs 2 L25 pmol/L上下游引物各 0.5 LDNA模板 2 LTaq DNA聚合酶 0.5 L三蒸水 17 L反响程序如下：94 变性3 min；
5、94 45 s，56 45 s，72 45 s，循环32次；72 延伸10 min。3.琼脂糖凝胶电泳11.5%琼脂糖凝胶的配制：称取1.5g琼脂糖，参加到锥形瓶中，参加100ml电泳液。微波加热4min。2制胶：准备好制胶板，待琼脂糖溶液温度下降到60度左右时，将胶液倒入制胶板内。3上样：拔去梳子，将凝胶放入电泳槽内，使电泳液浸没凝胶。取8ulPCR产物与1ul的上样缓冲液混匀后，参加凝胶孔内。4电泳：加样孔一端置于负极端，翻开电泳仪，电泳30min。由于DNA带负电，所以将会看到样品向正极涌动。5观察结果：电泳完毕后，关闭电泳仪，取出凝胶，在紫外灯下观察扩增条带是否与预期大小相同本实验中扩增的DNA条带大小为417bp。提前上网查找提取DNA及PCR扩增原理1%红细胞1%红细胞被检鸡蛋卵黄
