1、论著临床研究基金项目:湖北省武汉市医学科研项目(WX19Y03)作者简介:胡莹洁(1987 )，女，硕士，主治医师，研究方向:糖尿病的发病机制。2 型固有淋巴细胞与儿童 1 型糖尿病的相关性胡莹洁(武汉市第四医院内分泌科，湖北省武汉市430033)【摘要】目的探讨 2 型固有淋巴细胞(ILC2)与儿童 1 型糖尿病(T1DM)的相关性。方法纳入 20 例T1DM 患儿(T1DM 组)和20 名健康儿童(正常对照组)。收集两组儿童的一般资料，并检测两组儿童的血生化指标(空腹血糖、餐后2 h 血糖、HbA1c、总胆固醇、HDL-C、LDL-C、三酰甘油)、ILC2 占外周血单个核细胞(PBMC)比
2、例和血清白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13 水平。分析 T1DM 患儿 ILC2 占 PBMC 比例与其他指标间的相关性。结果与正常对照组比较，T1DM 组 ILC2 占 PBMC 比例及血清 IL-4、IL-5、IL-13 水平均升高(均 P 0 05)。T1DM 患儿 ILC2 占 PBMC 比例与空腹血糖、餐后 2 h 血糖、HbA1c 及血清 IL-4、IL-5、IL-13 水平均呈正相关(均 P 0 05)。结论T1DM 患儿体内 ILC2 增加，其与患儿的血糖控制水平及炎症水平呈正相关，ILC2 可能通过与炎症因子相互作用，参与 T1DM 的发生和发展。【关键词】1 型糖
3、尿病;2 型固有淋巴细胞;白细胞介素 4;白细胞介素 5;白细胞介素 13【中图分类号】725 8【文献标识码】A【文章编号】0253-4304(2022)23-2713-05DOI:10 11675/j issn 0253-4304 2022 23 02Correlation of type 2 innate lymphoid cell with type 1 diabetes mellitus in childrenHU Ying-jie(Department of Endocrinology，Wuhan Fourth Hospital，Wuhan 430033，Hubei，China)【
4、Abstract】ObjectiveTo investigate the correlation of type 2 innate lymphoid cell(ILC2)with type 1 diabetesmellitus(T1DM)in children MethodsA total of 20 T1DM children(the T1DM group)and 20 healthy children(the normal control group)were enrolled The general data of children in both groups were collect
5、ed，and the serumbiochemical indices with respect to fasting blood glucose，2-hour postprandial blood glucose，HbA1c，total cholesterol，HDL-C，LDL-C and triacylglycerol，and the proportion of ILC2 in peripheral blood mononuclear cell(PBMC)，aswell as the levels of serum interleukin(IL)-4，IL-5，and IL-13 wer
6、e detected in both groups The correlation of theproportion of ILC2 in PMBC with other indices in T1DM children was analyzed esultsCompared with the normalcontrol group，the T1DM group exhibited an elevated proportion of ILC2 in PBMC，and elevated levels of serum IL-4，IL-5 and IL-13(all P 0 05)The prop
7、ortion of ILC2 in PBMC positively correlated with the levels of fasting bloodglucose，2-hour postprandial blood glucose，HbA1c，and serum IL-4，IL-5 and IL-13 of T1DM children(all P 005)ConclusionILC2 is increased in T1DM children，and positively correlates with blood glucose control level andinflammator
8、y levels of children ILC2 may be involved in the occurrence and development of T1DM by the interactionwith inflammatory factors【Key words】Type 1 diabetes mellitus，Type 2 innate lymphoid cell，Interleukin 4，Interleukin 5，Interleukin 131 型糖尿病(type 1 diabetes mellitus，T1DM)是一种器官特异性自身免疫性疾病，表现为胰岛 细胞破坏或功能衰
9、竭引起的血糖升高，患者需终生依赖胰岛素治疗维持生命。T1DM 多发生于青少年，由于多数 T1DM 患者发病时年龄偏低、自控能力差，使得血糖控制难度较大，其导致的糖尿病酮症酸中毒是 1 型糖尿病儿童最常见的死亡原因之一，因此研究 T1DM的防治手段尤为重要1。目前认为 T1DM 的发生是遗传、免疫、环境等多种因素共同作用的结果，免疫因素可能在 T1DM 的发展中扮演重要角色并受到越来3172广西医学2022 年 12 月第 44 卷第 23 期越多的关注2。人体免疫系统分为固有免疫系统和适应性免疫系统两大类。固有淋巴细胞(innate lymphoid cell，ILC)是固有免疫系统的重要效应
10、细胞群，广泛存在于哺乳动物的皮肤、肺、肠道及脂肪组织等防御屏障，具有介导免疫、协助组织修复重建、调节肠道菌群等多种功能3。ILC 可根据其表达的特定转录因子和分泌的细胞因子分为三类，即 ILC1、ILC2 和 ILC3。其中，ILC2 主要分布于黏膜组织(肺和肠道)、非淋巴器官(肝、肾和内脏脂肪组织)、淋巴器官(脾、骨髓)及血液，在宿主防御、组织修复及抵抗炎症性疾病中发挥重要作用4。ILC2 主要介导 Th2 类免疫应答，并可以通过多种效应细胞因子调控不同信号通路，参与哮喘、特异性皮炎、嗜酸性胃肠炎等多种免疫性疾病的发生5。ILC2 作为单独的细胞亚群，在激活的状态下可迅速产生 Th2 细胞相
11、关的细胞因子和其他效应分子，包括白细胞介素(interleukin，IL)-4、IL-5、IL-9、IL-13 和表皮生长因子受体配体双向调节因子，并通过这些细胞因子驱动 2 型免疫反应的发生6。本研究通过分析 T1DM 患儿与正常儿童 ILC2 及相关细胞因子的表达差异，初步探讨 ILC2 与 T1DM 的相关性。1资料与方法11临床资料选取 2018 年 1 月至 2020 年 1 月于武汉市第四医院住院的 20 例 T1DM 患儿为 T1DM组。纳入标准:(1)年龄 8 18 岁;(2)符合 1999 年世界卫生组织制定的 1 型糖尿病诊断标准7。排除标准:(1)2 型糖尿病患儿;(2)
12、合并糖尿病急性并发症，如糖尿病酮症、酮症酸中毒、高血糖高渗状态;(3)患有 T1DM 以外的其他自身免疫性疾病;(4)有遗传病家族史。另选取同期来武汉市第四医院体检中心体检的 20 名健康儿童为正常对照组。纳入标准:(1)年龄 8 18 岁;(2)无糖尿病及糖调节受损;(3)尿糖阴性。排除标准:(1)患有自身免疫性疾病;(2)有遗传病家族史。本研究经武汉市第四医院医学伦理委员会审核通过，研究对象家属均签署知情同意书。1 2研究方法1 2 1收集一般资料:收集两组儿童的年龄、性别、血压。1 2 2生化指标检测:于 T1DM 组患儿入院时采集其空腹肘静脉血 5 mL，于正常对照组儿童在体检时采集其
13、空腹肘静脉血 5 mL，采用己糖激酶法检测空腹血糖及餐后 2 h 血糖，采用氧化酶法检测总胆固醇、三酰 甘 油，采 用 直 接 法 检 测 LDL-C、HDL-C，使 用ADVIA 2400全自动生化分析仪(Siemens 公司)检测上述指标，严格按照试剂盒(重庆中元生物技术有限公司，批号:H200905、H201109、H201008、H201203、H201106;积水医疗科技有限公司，批号:841IS)说明书进行检测。采用高效液相色谱法检测 HbA1c，检测仪器为伯乐 D-10糖化血红蛋白仪(试剂盒:伯乐实验室有限公司，批号:64431018)。1 2 3外周血单个核细胞的分离:于 T1
14、DM 组患儿入院时采集其空腹肘静脉血 3 mL，于正常对照组儿童在体检时采集其空腹肘静脉血 3 mL，经肝素钠抗凝后，在室温下 1 500 r/min 离心 10 min。离心结束后将下层细胞沉淀物移至 50 mL 离心管中，并加入PBS 稀释，用无菌吸管小心吸取白色细胞层置于另一无菌离心管(已事先加入等体积单核细胞分离液)，室温下 2 500 r/min 离心 25 min，加入适量 PBS，1 500 r/min离心10 min，得到的白色沉淀即为外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)。1 2 4流式细胞术检测 PBMC 中的 IL
15、C2 水平:取200 L PBMC 悬液至流式细胞仪上机管，加入 5 L鼠抗人 CD45 抗体、5 L 鼠抗人 CD127 抗体、5 L 鼠抗人 CD294 抗体及人 Lineage 复合抗体(由 CD2、CD3、CD4、CD7 等组成)，以上抗体均购自伯乐实验室有限公司。充分混匀，室温避光孵育 40 min。将LineageCD45+CD127+CD294+细胞判定为 ILC2，采用流式细胞仪分析 ILC2 占 PBMC 的比例。上述实验设置 3 个复孔。1 2 5ELISA 检测:于 T1DM 组患儿入院时采集其空腹肘静脉血 2 mL，于正常对照组儿童在体检时采集其空腹肘静脉血 2 mL，
16、常温下 3 000 r/min 离心20 min，收集上清液。采用 ELISA 测定血清 IL-4、IL-5和 IL-13 水平。ELISA 试剂盒购于上海恒远生化试剂有限公司(批号:20200708、20200802、20200907)。1 3统计学分析采用 SPSS 26 0 软件进行统计学分析。计量资料以(x s)表示，两组间比较采用两独立样本 t 检验;计数资料以例数表示，比较采用 2检验;指标间的相关性采用 Pearson 检验进行分析。以P 0 05 为差异有统计学意义。2结果21两组一般资料及生化指标的比较两组的性别、年龄、收缩压、舒张压及总胆固醇、HDL-C、LDL-C、三酰甘油水平差异均无统计学意义(均 P 005)。与正常对照组相比，T1DM 组的空腹血糖、餐后 2 h 血糖、HbA1c 水平均升高(均 P 005)。见表1。4172Guangxi Medical Journal，Dec 2022，Vol 44，No 23表 1两组一般资料及生化指标的比较组别n性别(n)男童/女童年龄(x s，岁)空腹血糖(x s，mmol/L)餐后 2 h 血糖(x s，mmol
