1、中国当代医药2023年1月第30卷第3期CHINA MODERN MEDICINE Vol.30 No.3 January 2023论著半乳糖凝集素 4 在非小细胞肺癌细胞中的表达及其对增殖、迁徙及凋亡的影响罗丹1，2梁玉灵1方梦莹1陈梦晴1王文军1吴其标2范贤明11.西南医科大学附属医院呼吸与危重症医学科，四川泸州 646000；2.澳门科技大学中医药学院，澳门 999078摘要目的探讨半乳糖凝集素 4（Gal-4）在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞中的表达及对细胞增殖、迁徙及凋亡的影响。方法选取 NSCLC 细胞作为实验组，正常支气管上皮细胞作为对照组；应用 RT-PCR 和 Western
2、 blot 检测NSCLC 细胞中 Gal-4 mRNA 及蛋白的表达；选取 Gal-4 蛋白表达最高、最稳定的细胞株转染 siRNA 以下调 Gal-4表达，应用 FAM-siRNA 及 Western blot 观察及检测转染效率；应用 CCK8、划痕实验、流式细胞术观察下调 Gal-4表达对 NSCLC 细胞增殖、迁徙及凋亡的影响。结果实验组的 Gal-4 mRNA 及蛋白表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）。A549 细胞转染 siRNA 后，实验组的 Gal-4 蛋白表达量低于对照组，差异有统计学意义（P0.05）；下调 A549 细胞 Gal-4 表达后，实验组细胞的
3、增殖能力低于对照组，差异有统计学意义（P0.05）。下调 A549 细胞 Gal-4 表达后，实验组划痕愈合慢于对照组，差异有统计学意义（P=0.043）。下调 A549 细胞 Gal-4 表达后，实验组与对照组的细胞凋亡率比较，差异无统计学意义（P=0.085）。结论Gal-4 在 NSCLC 细胞中高表达，促进 NSCLC 细胞的增殖及迁徙能力。关键词半乳糖凝集素4；非小细胞肺癌；增殖；迁徙中图分类号 R734.2文献标识码 A文章编号 1674-4721（2023）1（c）-0013-05Expression of galectin-4 in non-small cell lung ca
4、ncer cells and its effecton cell proliferation,migration and apoptosisLUO Dan1，2LIANG Yuling1FANG Mengying1CHEN Mengqing1WANG Wenjun1WU Qibiao2FAN Xianming11.Department of Respiratory and Critical Care Medicine,Affiliated Hospital of Southwest Medical University,SichuanProvince,Luzhou646000,China;2.
5、State Key Laboratory of Quality Research in Chinese Medicine,Macau University ofScience and Technology,Macau 999078,ChinaAbstract Objective To explore the expression of galectin 4(Gal-4)in non-small cell lung cancer(NSCLC)cells and itseffect on cell proliferation,migration,and apoptosis.Methods NSCL
6、C cells were chosen as the experimental group andnormal bronchial epithelial cells as the control group.The expression of Gal-4 mRNA and protein in NSCLC cells weredetected by RT-PCR and Western blot.The cell line with the highest and most stable Gal-4 protein expression was selectedtotransfect siRN
7、A todown-regulateGal-4 expression.The transfection efficiency was observed and detected by FAM-siRNAand Western blot.The effect of down-regulated Gal-4 expression on proliferation,migration and apoptosis of NSCLC cellswere respected by CCK8,scratch test and flow cytometry.Results The mRNA and protei
8、n expression levels of Gal-4 in theexperimentalgroupwerehigherthanthoseinthecontrolgroup,andthedifferenceswerestatisticallysignificant(P0.05).Aftertransfection of A549 cells with siRNA,the expression of Gal-4 protein in the experimental group was lower than that in thecontrol group,and the differenc
9、e was statistically significant(P0.05).After downregulating the expression of Gal-4 in A549cells,the proliferative ability of the experimental group was lower than that of the control group,and the difference wasstatistically significant(P0.05).After downregulating the expression of Gal-4 in A549 ce
10、lls,scratch healing in theexperimental group was slower than that in the control group,and the difference was statistically significant(P=0.043).Afterdown-regulating the expression of Gal-4 in A549 cells,there was no significant difference in the apoptosis rate between theexperimental group and the
11、control group(P=0.085).Conclusion Gal-4 is highly expressed in NSCLC cells andpromotes the proliferation and migration of NSCLC cells.Key words Galectin-4;Non-smallcelllungcancer;Pro-liferation;Metastasis基金项目四川省科技创新苗子工程资助项目（2021030）；西南医科大学校级科研项目（2020ZRQNB031）。作者简介罗丹（1989-），女，四川泸州人，硕士，主要从事肺部肿瘤的诊治及研究。
12、通讯作者13论著中国当代医药2023年1月第30卷第3期CHINA MODERN MEDICINE Vol.30 No.3 January 2023肺癌是癌症相关性死亡的最常见原因，是影响全球数百万人生命安全的严重公共卫生问题1。非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是肺癌最常见的病理类型，约占 85%2。随着诊疗技术的进步，NSCLC 诊治水平得到不断提高，但因其具有发病隐匿、转移率高、进展快等特点，导致该病预后仍极差，5年生存率不足 20%3-4。因此，深入研究 NSCLC 发生发展的分子机制，积极寻找用于 NSCLC 早期诊断的生物学标志物及有效
13、治疗靶点是 NSCLC 治疗取得突破性进展的关键所在。半乳糖凝集素 4（galectin-4，Gal-4）是-半乳糖家族成员之一，广泛表达于多种生物体内，参与细胞增殖、黏附、凋亡及肿瘤发生发展等过程5。目前Gal-4 在消化道中的研究较为深入，在肺癌中研究甚少，仅少量文献报道 Gal-4 在淋巴结转移的肺腺癌及肺泡癌中高表达，可作为不良预后的预测指标6-7；在前期研究中发现，NSCLC 组织 Gal-4 的表达高于正常肺组织，表达量与病理组织类型相关，在肺腺癌表达量最高8。为进一步明确 Gal-4 在 NSCLC 细胞中的表达及其对肿瘤进程的影响，本研究检测了 Gal-4 mR-NA 及蛋白在
14、 NSCLC 细胞中的表达，通过选取 Gal-4蛋白水平表达最高、最稳定的细胞株转染 siRNA 下调Gal-4 表达，观察 Gal-4 对 NSCLC 细胞增殖、迁徙、凋亡的影响，进一步探讨 Gal-4 在 NSCLC 发生发展中的作用机制。1材料与方法1.1主要试剂和仪器A549、H460、H520、BEAS-2B 细胞及 BEAS-2B培养基（中科院典型培养物保藏委员会昆明细胞库）；胎牛血清、RPMI-1640 培养基（美国 HyClone 公司）；Trizol（北京天根生化科技有限公司）；Rever Tra AceqPCR RT Kit、SYBR Green RT-PCR Master
15、 Mix（日本TOYOBO 公司）；Gal-4 兔抗人单克隆抗体（美国 Bi-world 公司）；转染试剂 Lipo6000TM、-actin 兔抗人单克隆抗体、HRP 标记的山羊抗兔 IgG、CCK8 试剂盒、Annexin V-FITC 试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）；LGALS4-siRNA（上海生工生物工程股份有限公司）；倒置显微镜（日本 Olympus 公司）。1.2方法1.2.1细胞培养用含 1%青链霉素及 10%胎牛血清的RPMI 1640 完全培养基培养 NSCLC 细胞，BEAS-2B专用培养基培养 BEAS-2B 细胞，于 37、5%CO2饱和湿度的恒温培养箱中培养。
16、1.2.2 RT-PCR 将 15107个细胞置于无酶 EP 管中，使用 Trizol 试剂进行总 RNA 提取，测定 RNA 浓度后，用反转录试剂合成 cDNA，GAPDH 为内参，SYBR Green RT-PCR Master Mix 试剂进行 PCR 反应。引物序列 GAPDH（正向）：5-ATGGGGAAGGTGAAG-GTCG-3，（反向）：5-GGGGTCATTGATGGCAACAA-TA-3；Gal-4（正 向）：5-TTGATCTGTCCATTCGCT-GT-3，（反 向）：5-ATGTGTCCACCCTCTGGAAG-3。PCR 扩增反应条件：95 30 s 变性（退火温度 60，延伸温度 72）；95 5 s，55 10 s，72 15 s，循环40 次。采用 2-CT法计算目的基因相对反应起始拷贝数。1.2.3 Western blot 将 1107个细胞置于 EP 管中，以 1 ml/107个细胞的比例加入细胞裂解液，冰上裂解 30 min。4，14 000g，离心 15 min，取上清，BCA 法测定蛋白含量。选择 10%分离胶（Gal-4：36 kDa），
