1、江西医药2022年11月 第57卷 第11期Jiangxi Medical Journal，November 2022，Vol 57，No11摘要：目的阐明miR-492在舌鳞癌发生发展及侵袭转移中的作用及机制，评价其作为舌鳞癌生物标志物及预后评估中的作用，为舌鳞癌的治疗提供新的分子靶点。方法对52例舌鳞癌及24例正常组织样本分析miR-492的表达差异，分析其表达与临床病理特点之间的关系。通过构建miR-492过表达和低表达舌鳞癌细胞系并检测其细胞增殖、侵袭转移，分析miR-492对舌鳞癌细胞生物学行为的影响。结果 miR-492在舌鳞癌组织中表达高于正常组织（P0.05），过表达miR-4
2、92提高了舌鳞癌细胞的增殖（P0.05）、转移（P0.05）、侵袭（P0.05）能力，抑制miR-492的表达可以抑制舌鳞癌细胞的增殖（P0.05）、侵袭（P0.05）、转移（P0.05）能力。结论 miR-492能促进舌鳞癌细胞的增殖、转移和侵袭，促进舌鳞癌发生发展，可以作为舌鳞癌抗癌新标靶。关键词：舌鳞癌；miR-492；增殖；转移；侵袭中图分类号：R739.86文献标识码：B文章编号：1006-2238(2022)11-1713-05DOI：10.3969/j.issn.1006-2238.2022.11.002The mechanism of miR-492 regulating pr
3、oliferation,invasion and metastasis of tongue squamous cell carcinoma JIANGLin,WU Yuan,HUANG Wenquan,et al.Department of Oral and Maxillofacial Surgery,Affliated Hospital of Jiangxi University ofTraditional Chinese Medicine,Nanchang,Jiangxi Province,330006,ChinaAbstract：Objective To clarify the role
4、 and mechanism of miR-492 in the occurrence,development,invasion and metastasisof tongue squamous cell carcinoma,and to evaluate its role as a biomarker of tongue squamous cell carcinoma and its role in theprognosis evaluation of tongue squamous cell carcinoma,this study will provide a new molecular
5、 target for the treatment of tonguesquamous cell carcinoma.Methods The differences of miR-492 expression in 52 cases of tongue squamous cell carcinoma and 24normal tissue samples were analyzed,and the relationship between miR-492 expression and clinicopathological characteristics wasanalyzed.The eff
6、ects of miR-492 on the biological behavior of tongue squamous cell carcinoma cells,including cell proliferation,invasion and metastasis were analyzed by constructing overexpression and under-expression cell lines of miR-492.Results Theexpression of miR-492 in tongue squamous cell carcinoma tissues w
7、as higher than that in normal tissues(P0.05),and the over-expression of miR-492 increased the ability of proliferation(P0.05),metastasis(P0.05)and invasion(P0.05)of tongue squamouscell carcinoma cells.Inhibition of miR-492 expression could inhibit the proliferation(P0.05),invasion(P0.05)and metastas
8、is(P0.05)of tongue squamous cell carcinoma cells.Conclusion miR-492 can promote the proliferation,metastasis and invasion oftongue squamous cell carcinoma and promote the occurrence and development of tongue squamous cell carcinoma,and can beused as a new anticancer target of tongue squamous cell ca
9、rcinoma.Key words:Tongue squamous cell carcinoma;miR-492;Proliferation;Migration;InvasionmiR-492 在舌鳞癌增殖与转移中的作用蒋琳，武媛，黄文泉，郭建徕，邵益森，王伟（江西中医药大学附属医院口腔创伤整形科，南昌 330006）基金项目：江西省教育厅课题，编号 170709；江西省自然科学基金面上项目，编号 20181BAB205039。通信作者：王伟 实验研究 舌鳞癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，近年来患病率呈升高趋势，但目前临床上缺乏行之有效的靶向治疗手段，同时该病发生发展的分子机制未能深入阐述。mi
10、RNA是一种长度在17-25 nt的单链非编码RNA，它们广泛存在于真核细胞中，能通过降解靶mRNA或抑制其翻译等手段，来调节细胞增殖、分化与凋亡，参与个体发育、机体代谢以及肿瘤发生发展等过程1。研究显示miRNA既可作为原癌基因参与恶性肿瘤的发生和发展过程，又可作为抑癌基因参与恶性肿瘤的形成，其在肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡和机体发育、代谢等基本生命活动过程中发挥重要作用2-3，并可以作为肿瘤早期诊断和治疗的生物标志物。miR-492在多种肿瘤中均被发现表达异常，如宫颈癌、肝癌等。同时也有研究发现miR-492同肿瘤的化疗耐药有关。目前关于miR-492与舌鳞癌的相关研究未见报道。本研究拟探索
11、miR-492在舌鳞癌组织中的表达及其同舌鳞癌患者临床病理之间1713江西医药2022年11月 第57卷 第11期Jiangxi Medical Journal，November 2022，Vol 57，No11的关系，探讨miR-492调控舌鳞癌增殖及侵袭转移的机制，以期为舌鳞癌的治疗提供新的思路，寻找新的治疗靶点。1材料和方法1.1临床标本收集52例舌癌组织和24例癌旁组织（2 cm外舌体组织）标本均来自江西中医药大学附属医院口腔科，患者手术时间2014年7月-2020年7月。患者为初发舌癌且全身检查未发现远处转移，术前未行放化疗及其他治疗，手术方式均为舌颌颈联合根治术。所有入选病例术后均
12、得到组织病理确认。手术切除的标本立即放入液氮，在液氮中长期保存。1.2组织总RNA提取 组织样本的提取采用Re-coverAll总核酸提取试剂盒（Ambion，USA）提取肿瘤组织及正常组织总RNA，SmartSpec Plus分光光度计（Bio-Rad，USA）对总RNA进行定量。1.3 cDNA合成与qRT-PCR取100 ng总RNA按操作说明书进行反转录cDNA，反应程序：16 30min，42 30 min，85 5 min。按Taqman Mi-croRNA Assays（Applied Biosystems，USA）说明检测成熟的miRNA，以miR-492和U6作模板，miR-
13、492和U6荧光探针作引物扩增，反应程序为：95 45 s，95 15 s，60 15 s，45个循环，所有试验重复3次。1.4构建过表达和抑制表达舌鳞癌细胞系 该实验选用舌鳞癌细胞株UM1，UM2细胞株，用含10%FBS的DMEM/F12培养基培养UM1和UM2，置于37C恒温、5%CO2的饱和湿度培养箱中培养，待细胞铺满80%镜下视野时用0.25%含EDTA胰酶消化传代。所有细胞复苏后常规传代两次，取生长状态良好的细胞用于后续实验。miR-492 mimics及LNA购买于上海吉玛公司，按照siPORT TM NeoFXTM转染试剂（Ambion USA）说明书转染物进入舌鳞癌细胞系，mi
14、R-492 mimics和control mimics分别加入UM2细胞系，至终浓度45 nmol/L，24 h后，qRT-PCR检 测miR-492的 表 达 水 平；miR-492LNA和miR-492 LNA negative control组分别加入UM1细胞系，至终浓度45 nmol/L，24 h后，qRT-PCR检测miR-492的表达水平。1.5细胞增殖检测 转染细胞及对照舌鳞癌细胞铺于96孔板，待细胞密度长至3104/每孔加MTT溶液（5 mg/mL）20 L。继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加150 L DMSO，振荡10 min，使结晶物充分融解，在酶
15、联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，选择570 nm波长，MTT法实验重复3次。1.6细胞迁移检测 待转染细胞及对照舌鳞癌细胞生长至对数生长期时，消化离心后用无血清的培养基重悬细胞，将含有1105个细胞悬液加入不含基质胶的小室，小室下层置5%血清培养基，孵育24小时后，棉签轻轻擦去小室内未迁移的细胞，4%多聚甲醛固定10 min，DAPI染色10 min，单蒸水洗涤后风干，于倒置显微镜下观察，拍照，每组细胞重复三次实验。1.7细胞侵袭检测 基质胶孵育Transwell小室24小时后，实验步骤同细胞转移检测实验。1.8统计学处理 采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析，数据以（xs）表
16、示，采用单因素方差分析比较多项指标。计量资料组间比较采用t检验，检验水准=0.05。2结果2.1 miR-492在癌旁正常组织及舌鳞癌组织中的表达情况qRT-PCR检测结果显示，miR-492在舌鳞癌组织中表达高于正常组织，差异有统计学意义（P0.05）。见图1。图 1 癌旁正常组织及舌鳞癌组织中 miR-492 的表达情况（N:正常舌体组织，TSCC：舌鳞癌组织）2.2 miR-492的表达与舌鳞癌患者的临床病理特征的关系miR-492的表达与T分期、临床分期、淋巴结是否转移、肿瘤分化程度均有相关性，差异具有统计学意义。见图2。2.3 miR-492在不同舌鳞癌细胞株中的表达 结果显示：miR-492在舌鳞癌细胞（UM1，UM2）中表达高于正常细胞（HaCat），miR-492在UM1中表达较1714江西医药2022年11月 第57卷 第11期Jiangxi Medical Journal，November 2022，Vol 57，No11高，在UM2中表达较低。图 3 miR-492 在不同舌鳞癌细胞株中的表达情况2.4沉默miR-492对舌鳞癌细胞体外增殖侵袭转移能力的影响 为探
