1、MUC5AC 在胃型宫颈腺癌组织中的表达及其临床病理特征褚小莹1,2，周永泽1,2*（1武汉大学中南医院病理科，武汉 430071；2武汉大学病理中心，武汉 430071）摘要目的 分析胃型宫颈腺癌(gastric-type endocervical adenocarcinoma,GAS)组织病理形态学特点，检测 MUC5AC在该癌组织中的表达，研究 GAS 免疫组织化学表型特点及相关特征，并结合 AB-PAS 特殊染色结果探究 GAS 潜在诊断方法。方法 回顾性分析 2019 年 7 月 1 日至 2020 年 12 月 31 日于武汉大学中南医院就诊的 5 例 GAS 患者的临床资料，总结
2、其临床表现、病理特征、免疫表型及 AB-PAS 特殊染色特点。结果 免疫组织化学检测显示，5 例 GAS 患者癌组织 CK7、MUC6、CEA 及 MUC5AC 阳性，p16、MUC2、CDX2、ER 及 PR 阴性，Pax8 表达不稳定，p53 均为野生型表达，Ki-67 多为阳性高表达。AB-PAS 染色显示胞质均呈现红色。结论 与普通型宫颈腺癌相比，GAS 具有易被误诊的良性组织形态。本研究发现免疫组织化学标志物 MUC5AC 的稳定阳性表达及 AB-PAS 染色后胞质呈红色可能是诊断该病的关键性特征。关键词胃型宫颈腺癌；免疫组织化学染色；MUC5AC；AB-PAS 染色中图分类号R36
3、5 文献标识码A DOI：10.16705/ki.1004-1850.2022.06.008Expression of MUC5AC in gastric-type endocervical adenocarcinoma and its clinicopathological featuresChu Xiaoying 1,2,Zhou Yongze 1,2*(1Department of Pathology,Zhongnan Hospital of Wuhan University,Wuhan 430071,China;2 Pathology Center of Wuhan Universit
4、y,Wuhan 430071,China)AbstractObjective To study the histopathological characteristics of gastric-type endocervical adenocarcinoma(GAS);to de-tect the expression of MUC5AC in GAS;to analyze the phenotypic and related characteristics of GAS immunohistochemical indexes,and to explore the potential diag
5、nostic methods of GAS combined with the results of AB-PAS staining.Methods The retrospective analysis was performed in five patients with GAS who consulted in Zhongnan Hospital of Wuhan University from July 1,2019 to December 31,2020,and their clinical manifestations,pathological features,immunophen
6、otypes and special staining characteristics of AB-PAS were summarized.Results Immunohistochemical staining showed that 5 cases of GAS positively expressed with CK7,MUC6,CEA and MUC5AC,while the expression of p16,MUC2,CDX2,ER and PR were negative.The expression of Pax8 was un-stable.p53 and Ki67 were
7、 wild-type and strongly positive expression,respectively.AB-PAS staining results showed that the cytoplasm was red.Conclusion Compared with common endocervical adenocarcinoma,GAS has benign histomorphology that is easy to be mis-diagnosed.This study indicated that the stable positive expression of i
8、mmunohistochemical marker MUC5AC and the red cytoplasm after AB-PAS staining may be the key indexes for the diagnosis of the disease.KeywordsGastric-type endocervical adenocarcinoma;immunohistochemical staining;MUC5AC;AB-PAS staining中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY AND CYTO
9、CHEMISTRY第 31 卷第 6 期2022 年 12 月Vol.31.No.6December.2022收稿日期2022-01-16 修回日期2022-12-03作者简介褚小莹，女（1988 年），汉族，主管技师*通讯作者(To whom correspondence should be addressed)：yongze_宫颈癌在全球女性死亡因素中排第4位，是一种严重危害女性健康的恶性肿瘤。浸润性宫颈癌的组织学亚型主要包括鳞状细胞癌和宫颈腺癌。宫颈癌中鳞状细胞癌最常见，占总体发病率的80%，然而近几年来宫颈腺癌的发病率呈明显的逐年上升趋势。在第 5 版WHO 女性生殖肿瘤分类中关于宫颈
10、腺癌的分类依赖于是否存在人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染。约 80%90%的宫颈腺癌的发病与高危型 HPV 感染相关。在少数非 HPV感染相关的宫颈腺癌中以胃型宫颈腺癌(gastric-type endocervical adenocarcinoma,GAS)最为常见1。GAS由日本病理学家于2007年首次报道2，是一种侵袭性极强的恶性肿瘤，5 年疾病生存率仅为 30%，褚小莹等.MUC5AC 在胃型宫颈腺癌组织中的表达及其临床病理特征第 6 期 593而HPV相关性宫颈腺癌的5年疾病生存率为77%3。GAS 通常出现在晚期，有骨盆播散的趋势，特别是卵巢、
11、腹膜、大网膜和远处转移4。GAS 临床表现较轻微，患者初期症状无特异性，主要以阴道排液及阴道不规则出血为首发症状。GAS 表现出从分化良好到分化较差的腺癌组织学形态特征5，并与 HPV 相关的宫颈腺癌形态学特征重叠。大多数早期 GAS 患者形态学与良性病变相似，主要表现为粘液性腺体大小不均匀且数目增多，可见腺体有分支，呈角状，有轻度异型性且出现浸润性生长模式。因此，准确诊断宫颈腺癌变异是适当治疗的关键。单纯依靠形态学诊断 GAS 较为困难，其误诊率高达 34%。部分患者由于病理确诊时机延误，导致影响治疗并预后较差。因此，在临床病理诊断过程中有效发现并利用免疫组织化学表型对于GAS 的准确诊断至
12、关重要。材料与方法1 临床资料本研究收集 2019 年 7 月1日至 2020 年12月31日于武汉大学中南医院通过病理诊断为宫颈腺癌患者共 82 例，其中 GAS 癌患者 5 例。回顾分析 5 例GAS 癌患者的临床首发症状、肿瘤标志物、HPV 感染情况、TCT 细胞学情况、病理形态学特征、免疫组织化学及组织化学染色等资料。经病理科两位主治医师在“双盲”的前提下，根据国际宫颈腺癌标准和分类标准对82例宫颈腺癌患者的组织学切片进行重新阅片并将其分为两组：HPV 相关性宫颈腺癌和非 HPV 相关性宫颈腺癌。HPV 相关性宫颈腺癌相对容易识别，肿瘤细胞顶部常见核分裂象和凋亡小体。GAS（包括微偏腺
13、癌）的诊断标准包括：肿瘤细胞含有丰富胞浆,胞浆透明、泡沫样或轻度嗜酸，细胞边界相对清晰。按 2009 年国际妇产科联盟（FIGO）分期分析6，该 5 例 GAS 患者中 Ia 期患者 1 例，a 期患者 2 例（其中一例伴有盆腔淋巴结转移），b 期患者 2 例。5 例 GAS 患者均行宫颈癌根治性手术治疗。2 试剂p16（克隆号：1C1）、p53（克隆号：D0-7）、ER（克隆号：EP1）、PR（克隆号：EP2）、CK7（克隆号：UMAB161）、MUC6（克隆号：MRQ-20）、CEA（克隆号：12-140-10）、Ki-67（克隆号：UM-AB107）、MUC5AC（克隆号：MRQ-19）
14、、PAX8（克隆号：0TI6H8）、MUC2（克隆号：Ccp58）及CDX2（克隆号：EP25）即用型抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。Envision FLEX/HRP试剂和乙二胺四乙酸（EDTA）抗原修复液购自丹麦 DAKO公司。AB-PAS 试剂盒购自珠海贝索生物技术有限公司。3 EnVision 法免疫组织化学染色及判读标准5 例 GAS 手术标本经 4%中性甲醛固定液固定后规范取材，标本经组织脱水及石蜡包埋后切 34 m 厚组织切片；石蜡切片置于 80 烤箱中烘烤 20 min，冷却至室温后二甲苯I、II中各脱蜡10 min，梯度乙醇水化；PBS 冲洗 3 min3 次；pH
15、6.0 的 EDTA抗原修复液中高温高压修复2 min；PBS冲洗3 min3次；于 DAKO 全自动免疫组织化学仪（Autostainer Link 48）中进行后续操作：3%过氧化氢孵育10 min，PBS冲洗1 min3次；即用型一抗室温孵育1 h，PBS冲洗 1 min3 次；EnVision FLEX/HRP 室温孵育 20 min，PBS 冲洗 1 min3 次；DAB 室温显色 10 min。苏木素复染，梯度乙醇脱水，中性树胶封片。免疫组织化学结果判读：由临床病理诊断医师根据阳性细胞所占百分比及细胞染色强度进行综合分析判定（表 1）。评定分数=表达强度评分 表达细胞数评分，得分
16、4 分判定为阴性表达，4 分判定为阳性表达。4 AB-PAS 组织化学染色石蜡切片常规脱蜡并蒸馏水洗 5 min，爱先蓝（pH 2.5）作用 20 min 后流水冲洗，高碘酸溶液氧化 10 min，蒸馏水洗 2 min，浸入 schiff 试剂中室温避光染色 1520 min，流水冲洗 5 min，苏木素染液（Mayer）中染细胞核 5 min，流水冲洗返蓝 3 min，常规脱水透明，中性树胶封片。表 1 免疫组织化学检测评分标准Tab.1 Scoring criteria for immunohistochemistry评 分0 分1 分2 分3 分4 分表达强度不着色 淡黄色黄色棕黄色黑褐色表达细胞数目 5%625%2650%5075%76%中国组织化学与细胞化学杂志594第 31 卷结 果1 GAS 患者临床病理特征2019 年 7 月1日至 2020 年12月31日于武汉大学中南医院通过病理诊断为宫颈腺癌患者共82例，其中 GAS 癌患者 5 例（表 2）。患者中位年龄 46 岁（3766 岁）。主要临床首发症状为透明状无异味的阴道流液（3/5，60%），阴道不规则流血（2/5
