1、茶业通报，（）：投稿平台：安徽省三个黄山白茶特异品种（系）的分子指纹图谱构建华冰清管鹏鹏桂利权，沈周高张爱嘉陶玲玲朱俊彦韦朝领刘升锐”安徽农业大学 茶树生物 学与资源利用国家重点 实验室、农业农村部茶树生物 学与茶叶加工重点 实验室，安徽合肥 ；谢裕大茶叶股份有限公司，安徽合肥 ）摘要：本研究 筛选了个多态性高且稳定性好的 标记作为一个核心标记组，对黄山白茶三个特异茶树品种（系）及其余份茶树品种（系）进行基因分型，根据扩增 条带的大 小构建了三个黄山白茶特异品种（系）的分子指纹图谱。结果表明，个标记扩增 条带清晰，不同样品间具有较好的多态性，共扩增出等位基因数个，平 均为；主效等位基因频率为，
2、均值为；观测杂合度和 期望杂合度均值分别为 和；多态性信息含量为，平均 为。根据等位基因片段大 小分别构建了黄山白茶号品种、黄山白茶号品系和黄山白茶号品系的分子指纹图谱，为黄山白茶种质资源鉴定、品种保护和推广利用提供重要理论依据。关键词：黄山白茶；标记；遗传多态性；分子指纹中图分类号：文献标识码：文章编号：（）收稿日期 项基金安徽农业大学校级大学生创新训练项（）和安徽省科技重大专项（）作者简介华冰清（），女，浙江省金华市人，茶学本科生，研究方向为茶树育种学，：。通讯作者刘升锐（），男，安徽省滁州市人，副教授，研究方向为茶树遗传与育种研究，：。盛，芽叶肥壮，雨水充足，有效内含物丰富，品质较好。而
3、秋季由于昼夜温差大，芽叶生长缓慢，对夹叶多，有效成分含量少，条索细瘦，朴片多，色泽、净度差，香味淡弱。春茶香高味醇，耐冲泡；夏茶香气低，味带涩；秋茶香气较低，滋味不及春茶醇厚、耐泡要确保不同时期出厂汉屮仙毫品质的一致性，宜将汉屮仙毫春茶、夏茶、秋茶进行合理拼配，达到成品 品质均衡一致，实现季节调剂。精选与包装精选是汉中仙毫加工过程中最重要的工序之一，通过精选能进一步提升成茶品质，符合汉屮仙毫精、细的标准要求。汉屮仙毫精选宜采用机械、人工相结合，先用色选机进行机选，然后用人工再次精选，能达到很好的精选效果，降低精选成本。汉中仙毫具有易吸湿、吸异味、易氧化变质的特性，在销售和藏过程中其品质会受到水
4、分、温度、氧气、光照、异味等因素影响，因此销售、於藏过程屮的产品包装显得尤为重要。在具体实践屮，需根据：藏和销售需求，选择不同规格的包装袋进行包装，在包装过程中可以配合进行灭菌处理，在密封包装好后还应将产品低温冷藏。参考文献郝晓云，李闯，魏春丽，等屮国茶叶区域公用品牌价值评估报告屮国茶，（）：王树林主编茶树栽培学北京：中国农业出版社，：王运科，纪昌 中茶叶西安：三秦出版社，：杨选民，惠康杰，黄风琴浅谈绿茶拼配技术茶叶科学技术，（）：（责任编辑：徐千懿）DOI：1016015 j cnki jteabusiness 20220042第期华冰清，等：安徽省三个黄山白茶特异品种（系）的分子指纹图谱构
5、建我国茶树种质资源丰富多样，其中新梢叶色白化茶树品种是重要的特异资源，因其对气候因子敏感程度不同，可分为温度敏感型和光照敏感型。黄山白茶（）原产于安徽省歙县境内的新安江支流，因产地居古徽州府所辖，故又名徽州白茶属于温度敏感型白化茶树变种其春茶芽叶呈玉白色，随着春季气温升高和芽叶变大，由叶片主脉、支脉、叶肉细胞依次返绿，叶色逐渐变成黄白色、黄绿色、浅绿色，夏秋茶则为绿色。其制 成的干茶色泽略显金黄、冲泡汤色明亮、香高持久、滋味鲜爽，游离氨基酸含量较高，且富含人体所需的硒、铁、锌等多种微量元素，兼具饮用与观赏价值，备受广大消费者青睐。目前，通过短穗扦插繁育的无性系黄山白茶号品种（安徽省省级良种）、
6、黄山白茶号品系和黄山白茶号品系已推广种植。现今，全国各地已选育出大量不同类型的白化茶树品种，仅通过传统的形态学鉴定难以区分，且对于温度敏感型白化茶树品种夏秋季返绿后与其它品种更加难以区分，为茶树资源保护和品种鉴别带来了一定的 困难和挑战。分子标记技术是从水平上对物种的遗传特性进行鉴定，鉴定结果准确、稳定、不受环境影响（）分子标记具有共显性、稳定性好、多态性高、且基因组分布广泛等优点，是茶树遗传研究屮最常用的分子标记技术之一。目前，分子标记已广泛应用于构建茶树品种分子指纹。如章志芳和马建强利用个标记对个茶树新品种进行了遗传多样性分析，并构建了各自特异的分子指纹图谱；等从个标记屮筛选了）个标记作为
7、核心标记组，并构建了份茶树品种的分子指纹图谱；等从个 标记屮筛选了个多态性高且稳定性好的标记作为核心标记组，并构建了个茶树品种（品系）的分子指纹图谱？；阮旭等利用筛选的对 标记对安徽省各个茶区共份茶树品系进行遗传多样性分析，并选出材亥心标记组构建了其各自特异的分子指纹图谱？；等选用了个 标记作为核心标记组，构建了份广西茶树种质资源的分子指纹图谱。本研究以课题组先前开发的标记为基础，进一步筛选了个多态性高且稳定性好的标记，将其作为核心标记组，对份茶树品种（系）进行了快速的基因分型，构建了黄山白茶号黄山白茶号和黄山白茶号品种（系）特有的分子指纹图谱。研究结果为黄山白茶特异茶树种质资源的鉴定、保护和
8、利用提供了重要依据。材料与方法实验材料三个黄山白茶品种（系）及其余份茶树品种（系）均来源于安徽农业大学皖中试验站的茶树生物学与资源利用国家重点实验室的茶树种质资源圃（。，。），取嫩叶后用干冰速冻，置于冰箱保存备用。样品名称及产地来源详见表。实验方法提取与检测选用（，）试齐盒提取茶树样品基因组。利用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测浓度和纯度，所有样品稀释至？用于扩增实验。引物选择与合成从本课题组先前开发的 标记中选取对 弓丨物？，序列由上海通用生物有限公司合成，引物序列及退火温度详见表。茶业通报 表选取的份茶树品种（系）信息序才品种（系）名称产地来源序寸品种（系）名称产地来源龙井 浙江 政和大
9、白茶福建毛蟹福建桂红寸广两雪芽？南 若波绿安徽安白茶浙江碧香早湖南本山福建金玫瑰福建桂香号广西 柿大茶号安徽菊花春浙江紫鹃云南黄观音虽建励库大叶种云南名山白毫四川 南糯山号云南佛手福建桂红广西英红号广东 云抗号云南南糯山才云南贺 开云南多抗香安徽名选四川水金龟福建鸿雁广东勐海大叶种？南云抗 力云南川沐四川 淸水号云南半天妖福建云南短节白毫云南尧山秀绿广西黄金桂福建 安塘广两菜茶虽建 金牡丹福建普洱种云南 黄山白茶号安徽 黄魁安徽黄山白茶吁安徽 瑞香福建黄山白茶号安徽表六个标记的引物信息标己名称正向 引物（）反向 引物退火温度（）表六个标记对份茶树品种扩增多态性分析标记名称等位基闽数主效等位基闽
10、频率观测杂合度期望杂合度多态性佶息含量 平均值 第期华冰清，等：安徽省三个黄山白荼特异品种（系）的分子指纹图谱构建中文名称：？黄 山 白茶号种成类蟹：安戡 萏 茶 良种此种分类选痒地区：安敝省分 子指纹代码：（：￥；：？；：；：；：；：）中文名称：？黄山白茶种质类型：安茶 树良种种分类：选胄地：安徽 省分子指 纹代 码：（：；：；：￥；：；：）中文名：？黄山白茶号种 思类型：安？茶树良种亚神分类：丨丨 选地以：安 徽符分指纹代 码：（：；：；：；：；：；：）图三黄山白荼，品种（系）的分子指纹图谱，扩增及毛细營电泳检测反应体系、扩增程序、毛细 管电泳检测及条带分析参考相关文献么数据整理与分析根据
11、条带峰图进行人工方法读带建立原始数据矩阵，并根雛件要求转换数据格式利用软件计算等位基因数（椒）和主效等位義倒频率，）。利用，软件计奮引物的观测杂合度（开，）、期望 杂合度（，）和多态性臂息含量（，）结果与分析毛细管电泳检测扩增产物根据先前的研究，选取了个多态性高、稳定性好的 标记作为核心标记组，并对份供试茶树品种（系）进行扩增以构建黄山白茶特异的分子指纹图谱。利用毛细管电泳检测产物结果可知，个标记对份茶树品种（系）扩增 条带清晰、片段大迹设计片段区间内、且均显示出较好的 多态性（可参见图）标记多态性分析对检测的个标记进行多态性分析（可参见表）。结果显示，共检测到个等位位点数平均为个；主效等位基
12、祖频率值在（：厘（）之间，事均为；观测杂合度从最低的（）至最高的（）平均为；期望杂合度在）至（和？）之间，平均值为；多态性信息含量（）在）寒（）之间，平均为。值是衡羹位点多态性的最重要的指标，当时为高度多态位点，当 矣时为中度多态位点当莓，时为低度多态位点结果显示，所选的个标记的值均高于，表明它们均具有较高的多态性黄山白茶品种（系）分子指纹图谱构建毛细管电泳检测可以清晰的显示每个样品扩增条带的大小。为了更加直观地呈现结果，个标记、和分别用、，、和？替代。通过标记结合扩增条带大小的方式，编码每个品种（系）的指纹图谱此外，分子指纹代码结合品种（系）名称、种质类型、亚种分类育地区等信息，构 建每个品
13、种（系）的特异分子指纹图谱、，详见图讨论与结论分子标广泛应用于茶树进化起源研究、遗传多样性分析、种质资源黎定、基因定位、茶业通报 分子指纹图谱构建等方面，具有重要作用基于分子标记构建指纹图谱，可以快速、准确的对植物新品种（系）及杂交后代等进行真伪鉴定，并且具有很强的个体特异性分子指纹可以进行品种真实性的鉴别从而保护品种权所有者的合法权益，也可以鉴定已知种质与新种质资源的区别，便于育种工作者进行遗传研究本研究筛选了个多态性高且稳定性好的标记作为一个核心标记组，利用高通量、高分辨率的毛细管电泳技术进行鉴定，分析了个标记的遗传多态性。结果表明，标记平均 等位基因数、平均主效等位基因数和平均多态性信息
14、含量分别为、和，总体上各指标均较高。标记多态性的核心指标值显著高于先前的研究结果，但与另外几个研究结果值差别不大，主要是由于这些指标受多种因素的影响，如标记数目、标记的重复基序次数和类型、样本数量和遗传背景差异大小、电泳检测方法等。此外，利用筛选的核心标记组成功构建了三个黄山白茶特异品种（系）的分子指纹图 谱，为黄山白茶特异种质资源鉴定、品种保护和推广利用奠定了坚实基础。参考文献刘丁丁，梅菊芬，王君雅，等茶树白化突变研究进展中国茶叶，（）：毕军生徽州白茶保护与开发茶业通报，（）：周汉深，刘亚芹，雷攀登不同白化期的黄山白茶代谢物差异分析热带亚热带植物学报，（）：沈周高，江稳华，方世辉安徽歙县黄山
15、白茶产业发展现状及对策思考屮国农学通报，（）：沈周高，周月琴，李叶云，等黄山白茶短穗扦插快繁技术研究茶业通报，（）：王龙平宣城市白化、黄化品种茶产业发展现状及建议茶业通报，（）：）陈杰丹，马春雷，陈亮我国茶树种质资源研究 年屮国茶叶，丨，（）：，（），：刘升锐，董心雨，郭锐，等安徽省“太平猴魁”茶区柿大茶群体种遗传多样性的 分析安徽农业大学学报，（）：章志芳，马建强基于 标记的茶树新品种遗传多样性分析及指纹图谱构建湖南农业科学，：，：，（），：阮旭，徐奕鼎，吴琼，等安徽省各茶区茶树品系遗传多样性分析及指纹图谱构建分子植物育种，（）：，：张成才，刘园，姜燕华，等 标记鉴定浙江省主要无性系茶树品种的研究植物遗传资源学报，（）：王松琳，马春雷，黄丹娟，等基于 标记的白化和黄化茶树品种遗传多样性分析及指纹图谱构建茶叶科学，（）：（责任编辑：徐千懿）
