1、现代食品现代食品XIANDAISHIPIN214214/分析检测分析检测Analysis and Testingdoi:10.16736/41-1434/ts.2022.24.056UPLC 法测定辣条中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量Determination of Benzoic Acid,Sorbic Acid and Saccharin Sodium in Spicy Sticks by UPLC 吴 迪，李姝睿，孔凡丽，李 刚（吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，吉林 长春 130033）WU Di,LI Shurui,KONG Fanli,LI Gang(Institute
2、of Agricultural Quality Standards and Testing Technology,Jilin Academy of Agricultural Sciences,Changchun 130033,China)摘 要：建立 UPLC 法快速测定辣条中苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量的分析方法。样品用 80%的乙腈提取，正己烷脱脂萃取，经 Oasis PRiME HLB 小柱萃取净化，采用 C18色谱柱，以 10 mmolL-1乙酸铵+乙腈溶液为流动相进行洗脱，外标法定量。结果表明，各组分在 1 200 gmL-1线性良好，r2 0.999，检出限均为 3 mgkg-1，定
3、量限均为 10 mgkg-1；添加 10 mgkg-1、20 mgkg-1、100 mgkg-1 3 个浓度水平的平均回收率为 91.1%97.3%，RSD 为 1.67%4.32%。建立的方法简单快速，准确可靠，适用于辣条中苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量的测定。关键词：辣条；苯甲酸；山梨酸；糖精钠Abstract：A method was established for the determination of benzoic acid,sorbic acid and saccharin sodium in hot strips by UPLC.The sample was extracted
4、with 80%acetonitrile,extracted with n-hexane,purified by Oasis PRiME HLB column,eluted with 10 mmolL-1 ammonium acetate+acetonitrile solution on C18 column,and quantified by external standard method.The results show that each component has a good linearity within the range of 1200 gmL-1,r20.999,the
5、detection limit is 3 mgkg-1,and the quantification limit is 10 mgkg-1;The average recoveries were 91.1%97.3%and RSD was 1.67%4.32%at 10 mg kg-1,20 mg kg-1 and 100 mg kg-1 concentration levels.The method is simple,rapid,accurate and reliable,which is suitable for the determination of benzoic acid,sor
6、bic acid and saccharin sodium in hot strips.Keywords：spicy sticks;benzoic acid;sorbic acid;saccharin sodium中图分类号：TS202.3辣条是以小麦粉或其他谷物、豆类为主要原料，添加食用油、食用盐、香辛料、味精及食品添加剂制成的一种调味面制食品，是休闲零食中的头号“网红”。为了防止被微生物污染和追求口感色泽，市售的辣条多会使用大量的添加剂。苯甲酸、山梨酸是常用的防腐剂，对霉菌、酵母和细菌均有抑制作用，苯甲酸钠的急性毒性较小，但过量使用也会引起腹泻、腹痛和心跳加速等症状；山梨酸（钾）的防腐效果
7、比苯甲酸（钠）好，但长期食用也会刺激肠胃系统1。糖精钠作为食品加工中常用的甜味剂，其毒性不强，但有一作者简介：吴迪（1988），女，硕士，助理研究员，研究方向为食品安全检测。通信作者：李刚（1963），男，博士，研究员，研究方向为作物栽培及农产品质量安全。E-mail：laoli201 。现代食品现代食品XIANDAISHIPIN215215/分析检测分析检测 Analysis and Testing定的致癌性。对于这 3 种添加剂的限量问题，在食品安全国家标准 食品添加剂使用标准（GB 27602014）2中有明确的规定，因此，准确地测定其含量对企业添加剂的使用有指导作用。气相色谱法3-5和
8、液相色谱法6-9是测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠常用的检测方法，前处理过程中常用亚铁氰化钾和乙酸锌来沉淀蛋白10-11，用正己烷除脂12，但对辣条（基质较复杂的样品）中这 3 种添加剂的研究不多。本文以辣条为研究对象，使用乙腈水溶液提取，正己烷除脂，结合通过式固相技术，建立了简单快速测定苯甲酸、山梨酸及糖精钠的方法。1 材料与方法1.1 仪器与试剂辣条样品，购自长春本地超市，于粉碎机充分搅碎，冷藏备用；苯甲酸钠（纯度99.0%）、山梨酸钾（纯度99.2%）、糖精钠（纯度99.1%），中国标准物质中心；乙腈、正己烷，色谱纯，上海安谱实验科技股份有限公司；Oasis PRiME HLB固相萃取柱，美国
9、Wters公司。ACQUITY UPLC H-Class 超高效液相色谱，美国 Wters 公司；JP-020PLUS 超声波清洗器，昆山舒美；VORTEX3 涡旋混匀仪，德国 IKA 公司；MS204/A 电子天平，梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司；RV10 旋转蒸发仪，德国 IKA 公司。1.2 实验方法1.2.1 标准溶液的配制混合标准储备溶液（1 000 mgL-1）：取一定量的糖精钠标准品于 120 的烘箱中烘至恒重，置于干燥器中冷却。分别准确称取干燥后的糖精钠 0.117 0 g、苯甲酸钠 0.118 0 g、山梨酸钾 0.134 0 g 于同一 100 mL容量瓶，用水溶解
10、定容至刻度。混合标准中间溶液（200 mgL-1）：准确量取上述混合标准储备溶液 10 mL 于 50 mL 的容量瓶中，用水定容至刻度。混合标准工作溶液：分别精确吸取 0.05 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.50 mL、5.00 mL和10.00 mL混合标准中间溶液置于 10 mL 容量瓶，用流动相定容至刻度，稀释成质量浓度分别为 1 mgL-1、5 mgL-1、10 mgL-1、20 mgL-1、50 mgL-1、100 mgL-1和200 mgL-1的混合标准工作溶液。现用现配。1.2.2 样品前处理取市售辣条约 200 g，用粉碎机充分捣碎后，准确称取2.
11、00 g试样于50 mL离心管中，加10 mL提取液（乙腈水=8 2）于离心管中，涡旋振荡 1 min，超声波提取15 min，10 000 r min-1离心5 min，过滤上层清液。固体残渣中加入 10 mL 提取液再提取一次，合并上层清液于分液漏斗，加入 20 mL 正己烷，振荡静止分层，收集中间乙腈层，旋转蒸发至近干，用 5%的乙腈定容至 5.0 mL，先取约 2 mL 润洗 Oasis PRiME HLB 固相萃取柱，流干后弃去流出液，再移取 2.0 mL 加入固相萃取柱，保持每秒 1 滴的速度通过，收集流出液，供 UPLC 检测。1.2.3 超高效液相色谱条件色谱柱：ZORBAX
12、SB C18（100 mm2.1 mm，1.7 m）；流动相：10 mmolL-1乙酸铵+乙腈=95+5；流速：0.3 mLmin-1；检测波长：230 nm；进样量：3 L；柱温：40。2 结果与分析2.1 色谱条件的选择苯甲酸、山梨酸、糖精钠在紫外均有吸收，所以，选择紫外检测器检测，扫描最大吸收波长，综合考虑确定测定波长为 230 nm。比较了乙酸铵和乙腈不同比例下色谱分离情况，发现乙酸铵乙腈=95 5 时，3 个待测物有较好的分离度，确定流动相乙酸铵乙腈=95 5（V V）。比较了不同乙酸铵浓度对分析效果的影响，结果发现，待测物的保留性均随乙酸铵浓度的增加而增强，但乙酸铵浓度超过10 m
13、molL-1时，待测物的峰形也变得扭曲，峰展宽，拖尾明显，综合考虑，本实验最终选择乙酸铵浓度为 10 mmolL-1。2.2 方法学考察2.2.1 线性关系1.2.1 混合标准工作液和 1.2.2 试样提取溶液分别经超高效液相色谱仪按照 1.2.3 的条件进样，测定 3 个待测物质的峰面积，以混合标准工作溶液中待测物的质量浓度（mgL-1）为横坐标（x），相应待测物的峰面积为纵坐标（y），绘制标准曲线，结果见表 1。2.2.2 方法检出限与定量限制备不同浓度的阳性加标样品，待测物的信噪比为 3 1 时，对应的加标浓度为方法检出限，当信噪比为 10 1 时，对应的加标浓度为方法定量限。3 个待测
14、物的检出限、定量限见表 1。2.2.3 准确度与精密度制备 3 个浓度的加标样品，分别为 10 mgkg-1、现代食品现代食品XIANDAISHIPIN216216/分析检测分析检测Analysis and Testing20 mgkg-1、100 mgkg-1，同时做样品空白。经 1.2.2处理，按 1.2.3 测定，计算加标回收率及相对标准偏差，结果见表 2。结果表明，苯甲酸、山梨酸、糖精钠在 3 种不同添加浓度下的回收率范围为 91.1%97.3%，RSD 为 1.67%4.32%，完全满足检测方法对加标回收率和相对标准偏差的要求。表 1 3 种待测物线性方程、相关系数、检出限和定量限表
15、化合物名称线性方程相关系数（r2）检出限/mgkg-1定量限/mgkg-1苯甲酸y=24 918x-535 110.999 5310山梨酸y=19 583x+132 970.999 2310糖精钠y=48 195x-256 350.999 6310表 2 回收率与精密度结果表（n=6）化合物名称加标量/mgkg-1测定平均值/mgkg-1平均回收率/%RSD/%苯甲酸109.8192.33.372018.3291.64.1510097.3497.33.56山梨酸109.4594.54.322018.4692.31.6710091.1191.12.56糖精钠109.1391.33.322019.
16、0195.13.4410095.1295.13.233 结论用乙腈水溶液提取辣条中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠，Oasis PRiME HLB 固相萃取柱净化，线性关系、回收率和精密度理想，适用于辣条中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定。参考文献1 官咏仪，林海丹，邱志超，等.高效液相色谱法测定调味酱中的苯甲酸和山梨酸 J.食品科技，2014，39（3）：285-287.2 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 食品添加剂使用标准：GB 27602014S.北京：中国标准出版社，2014.3 鲍忠定，许荣年，许佳飞，等.气相色谱内标法测定食品中防腐剂脱氢乙酸、苯甲酸和山梨酸 J.食品工业科技，2001（2）：78-79.4 赵笑虹，李秋荣，刘浩.酱油中防腐剂山梨酸和苯甲酸的气相色谱快速分析方法 J.广州食品工业科技，2004（2）：111-112.5 庞楠楠，努尔马力克迪丽，牛蓓，等.快速气相色谱法测定食品中的常见防腐剂 J.分析试验室，2005（3）：48-52.6 崔小军.关于运用 HPLC 同时测定饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸以及合成色素的研究 J.食品研究与开
