1、江西医药2022年11月 第57卷 第11期Jiangxi Medical Journal，November 2022，Vol 57，No11摘要：目的探索白芨胶在家兔肾穿刺通道中的止血及穿刺通道填塞作用，为无管化经皮肾镜术提供一种可能的止血栓塞剂。方法建立家兔肾穿刺通道模型，使用明胶海绵及微孔多聚糖（MPH）通道填塞，与白芨胶进行对比研究，观察三组在止血时间、通道愈合时间及尿液晶体数量方面的差异。结果三种材料对比止血时间结果为：MPH组白芨胶组明胶海绵组，差异有统计学意义（P0.05）。穿刺通道HE染色及免疫组化观察显示，白芨胶组炎症反应最轻，瘢痕愈合最早。各时间点尿液晶体对比显示白芨胶组晶
2、体数显著低于另外两组（P0.05）。结论白芨胶填塞肾穿刺通道，利于穿刺通道组织的愈合，结石形成风险较小。关键词：白芨胶；明胶海绵；微孔多聚糖；肾穿刺通道中图分类号：R692文献标识码：B文章编号：1006-2238(2022)11-1735-05DOI：10.3969/j.issn.1006-2238.2022.11.008白芨胶、明胶海绵、MPH 在肾穿刺通道中止血作用的对比研究赵长永，李道兵（遵义医科大学附属医院，遵义 563000）基金项目：贵州省中医药管理局资助项目，编号 QZYY-2016-029通信作者：李道兵泌尿系结石为泌尿外科常见病多发病，居住院患者首位，我国发病率为15%1，
3、目前经皮肾镜碎石术最常用于肾脏及输尿管上段结石的治疗2。目前大多数肾穿刺通道需留置肾造瘘管，其作用为减少出血及尿外渗，二期处理残石等，如过早拔出有肾脏大出血、尿外渗导致尿源性囊肿等并发症可能3。留置肾造瘘管术后住院时间长，感染风险高。无管化经皮肾镜的使用可大大减少患者出院时间，减少病人痛苦，降低住院费用4-7。但是肾穿刺通道无管化会使出血、尿外渗、尿性囊肿等风险增加，为减少无管化经皮肾镜所带来风险，国内外学者尚无统一肾穿刺通道处理方法，本研究探索白芨胶作为肾穿刺通道填塞材料可能性。1材料与方法1.1动物及材料新西兰实验兔126只（雌雄不限），体重2.0 kg2.5 kg，由遵义医科大学动物实验
4、中心提供。实验中以颗粒饲料及自来水喂养，严格遵行遵义医科大学动物实验伦理准则。白芨购自武汉博士德生物有限公司，将10 g白芨干粉加入100 mL蒸馏水中，搅拌均匀，呈胶冻状，高压消毒备用。明胶海绵购自广州快康医疗器械有限公司，微孔多聚糖止血粉，购自江苏奥科生物科技有限公司。1.2方法1.2.1肾穿刺通道动物模型的建立将126只家兔，随机分成为白芨胶组、明胶海绵组及MPH组，每组42只。使用2%戊巴比妥(4 mg/kg)耳缘静脉麻醉，下腹切口，打开腹腔，分离输尿管上端及肾脏背侧，头皮针穿刺输尿管向肾盂注水。肾穿刺针沿肾脏背侧正中穿刺肾盂，使用筋膜扩张器逐号扩张至F16。肾穿刺通道填塞明胶海绵、M
5、PH及白芨胶，记录肾穿刺通道止血时间，关闭切口。1.2.2肾穿刺通道组织IL-10、TNF-的监测3组实验兔各时间点处死，切取右肾。肾穿刺通道组织行HE染色，并行免疫组化，检测IL-10、TNF-的表达，均采用平均光密度测定：使用Leica Qwin采集图像，每组选取非连续的切片6张，每张切片随机选取3个视野，使用Image-proplus 6.0图像分析软件以积分光密度(IOD)为指标，进行相对定量分析。1.2.3止血时间、尿液晶体数量的监测 术中准确记录各实验组肾脏穿刺通道止血时间。将各时间点抽取的膀胱尿液行尿沉渣定量分析，取得尿液结晶数量值。1.3统 计 学 方 法定 量 资 料 进 行
6、 单 样 本Kol-mogorov-Smirnov检验，满足正态分布的使用（xs）表示，差异比较时使用单因素方差分析；两两比较采用Bonferroni法；不满足正态分布的使用中位数及四分位（Median/P25-P75）表示，差异比较采用 临床研究 1735江西医药2022年11月 第57卷 第11期Jiangxi Medical Journal，November 2022，Vol 57，No11Kruskal-Wallis H检验，两两比较采用Mann-Whit-ney U秩和检验；所有分析使用SPSS19.0统计软件进行。2结果2.1止血时间比较分析 各组肾穿刺通道止血时间比较，差异有统计
7、学意义，止血时间不全相同，明胶海绵组白芨胶组MPH组，两两比较差异均有统计学意义（P0.05）；2W，3W，4W，6W，8W，白芨胶组晶体数显著低于其余两组（P0.05）。2.3三个实验组不同时间点尿液晶体数量比较。见表2。表 2 不同时间点的尿液晶体数的比较 Median（P25-P75）注：*表示白芨胶组与明胶组差异有统计学意义，&表示白芨胶组与MPH组差异有统计学意义。2.4 HE染色观察穿刺通道肾组织病理变化白芨胶组：3 d时肾穿刺通道见大量肉芽组织及新生血管形成，伴炎性细胞浸润。2周后见少量瘢痕组织形成，3周后肾脏穿刺通道基本愈合，可见大量明显老化的纤维组织而形成的较窄线性瘢痕组织。
8、另外两组显示3周通道内可见较多成熟的血管腔，伴有少量瘢痕组织增生以及炎性细胞浸润，表明仍处于通道修复中；约于建模后6周左右才可见瘢痕组织，表明通道已基本愈合。图 AC 白芨胶组，图 DF 明胶海绵组，图 GI MPH 组图 1 各组肾穿刺通道 HE 染色结果2.5各时间点IL-10的表达的比较 各组IL-10免疫组化结果：显微镜下观察阳性染色呈棕黄色颗粒。IL-10的表达主要在肾小管及肾小球胞浆中。使用ToupView拍摄免疫组化监测图片，见图2。不同时间位点各组肾脏穿刺通道组织中IL-10积分光密度(IOD)结果比较分析。见表3。表 3 不同时间点 IL-10 的比较 Median（P25-
9、P75）注：*表示白芨胶组与MPH组差异有统计学意义，&表示白芨胶组与明胶海绵组差异有统计学意义。由表3可知，3 d，1 w，2 w，3 w，4 w，6 w，8 w，组别例数（n）止血时间（s）F值P值白芨胶组4292.6922.63MPH组42120.3326.23a31.5040.001明胶海绵组4282.4018.40bc白芨胶组明胶海绵组MPH2P3d403.00(320.00-578.00)540.00(411.25-811.75)694.50(459.25-792.00)3.4150.1811w893.50(785.75-986.00)1000.00(939.50-1224.75)
10、920.00(872.75-1255.00)3.5860.1662w42.50(17.00-83.00)*&517.00(326.50-785.50)576.50(446.00-689.50)11.486 0.0033w3.50(0.00-8.00)*&161.50(120.50-184.25)192.00(95.25-223.50)11.673 0.0034w1.00(0.00-2.50)*&17.00(13.50-33.00)28.00(20.25-65.75)12.737 0.0026w0.00(0.00-8.50)*&16.00(1.50-23.75)15.50(9.00-30.00)
11、6.2460.0448w0.00(0.00-0.75)*&16.00(4.50-24.00)11.00(6.75-24.25)9.6420.008白芨胶组MPH组明胶海绵组2P3d558.014*&(543.236-563.932)469.428(446.902-484.529)450.688(428.731-485.023)35.3700.0011w625.396*&(618.080-634.263)584.447(576.819-596.834)583.027(563.137-593.958)35.6850.0012w692.522*&(669.256-722.674)618.506(60
12、7.815-633.200)603.670(598.854-612.722)34.6340.0013w545.875*&(535.743-553.506)496.858(487.180-511.150)500.186(492.518-515.314)33.4680.0014w481.813*&(475.745-490.896)428.655(423.152-453.416)438.032(423.814-464.279)33.3390.0016w488.659*&(482.967-492.997)427.464(418.555-441.464)428.556(416.289-452.836)3
13、5.4000.0018w489.398*&(478.779-492.727)422.920(412.201-439.827)420.391(402.794-436.531)35.3550.0011736江西医药2022年11月 第57卷 第11期Jiangxi Medical Journal，November 2022，Vol 57，No11白芨胶组IL-10的表达显著高于明胶海绵组及MPH组（P0.05）。2.6免疫组织化学监测兔肾穿刺通道组织TNF-的表达各组TNF-免疫组化结果：显微镜下观察阳性染色呈棕黄色颗粒。TNF-的表达在肾小管及肾小球胞浆中。使用ToupView拍摄免疫组化监测图
14、片，见图3。不同时间位点各组肾脏穿刺通道组织中TNF-积分光密度(IOD)结果比较分析，见表4。表 4 不同时间点 TNF-的比较 Median（P25-P75）注：*表示白芨胶组与MPH组有显著差异，&表示白芨胶组与明胶海绵组有显著差异。由表4可知，3d，1w，2w，3w，4w，6w，8w白芨胶组TNF-的表达显著低于明胶海绵组及MPH组（P0.05）。3讨论白芨为兰科植物白芨的干燥茎块，有收敛、消肿生肌、止血、清热利湿等功效，可促进创面愈合之功效，如糖尿病足、胃溃疡等的愈合8。明胶海绵及微孔多聚糖（MPH）的止血作用已在临床得到证实并广泛使用9-11，本研究选取这两种具有代表性的止血材料与
15、白芨对比。研究结果证实止血时间明胶海绵组白芨胶组及MPH组。明胶海绵在术中通道止血时间最短，考虑原因为明胶海绵血液浸润后自身膨胀体积增加，导致物理压迫止血，因而由于其与两种材料。而白芨胶与MPH组止血时间无差异。对比HE染色结果，显示白芨胶促进创面快速愈合，由于其余两种材料，创面愈合快，尿外渗及出血风险相应减少。在进行穿刺通道填塞过程中，相当于异物入肾脏，有结石形成风险。已有研究证实尿液结晶与结石形成密切相关，尿液中有形成分结晶的析出是结石形成的前提条件12。本研究使用尿液中结晶图 2 各组肾穿刺通道结果 IL-10 免疫组化结果白芨胶组MPH组明胶海绵组2P3d417.043*&(386.4
16、13-469.130)457.714(402.211-482.842)483.442(452.815-505.278)14.970 0.0011w495.380*&(477.540-502.448)587.845(523.176-600.894)601.963(582.622-632.695)36.817 0.0012w523.198*&(510.757-534.231)660.820(636.296-684.811)687.732(668.043-725.302)38.043 0.0013w536.870*&(527.351-561.323)608.109(589.584-620.480)614.806(599.836-632.918)33.027 0.0014w515.549*&(501.544-528.426)540.422(528.170-568.173)583.548(532.599-594.157)18.522 0.0016w390.629*&(379.367-414.529)494.111(466.106-516.190)499.091(478.641-513.183)3
