1、肿瘤防治研究2023年第50卷第1期 CancerResPrevTreat,2023,Vol.50,No.138doi:10.3971/j.issn.1000-8578.2023.22.0538临床研究PD-L1在结直肠癌原发灶中的表达及对 肝转移微波消融术后复发的预测价值任建伟1，周祖邦2，马雯娟2，杨大雄1，任医群1，张芝1，牛彦强1，曹雷1Expression of PD-L1 in Primary Colorectal Cancer and Its Predictive Value for Recurrence After Microwave Ablation of Liver Met
2、astasesRENJianwei1,ZHOUZubang2,MAWenjuan2,YANGDaxiong1,RENYiqun1,ZHANGZhi1,NIUYanqiang1,CAOLei11.The First Clinical Medical College of Gansu University of Chinese Medicine,Lanzhou 730000,China;2.Department of Ultrasound,Gansu Provincial Hospital,Lanzhou 730000,ChinaCorresponding Author:ZHOU Zubang,E
3、-mail:Abstract:Objective Toinvestigatetheexpressionofprogrammeddeathligand1(PD-L1)inprimarytumorcells(TCs)andtumor-infiltratingimmunecells(TICs)inpatientswithlivermetastasesfromcolorectalcancer(CRC)anddetermineitspredictivevalueforrecurrenceaftermicrowaveablation(MWA)oflivermetastases.Methods Thepar
4、affin-embeddedspecimensof28patientswithCRClivermetastasiswerecollectedretrospectively.TheexpressionofPD-L1intheprimarylesionswasdetectedbyimmunohistochemistry,andtherelationshipbetweenPD-L1andclinicalfeatureswasanalyzed.Recurrence-freesurvival(RFS)wasanalyzedbyKaplan-MeiermethodandLogranktest.Coxpro
5、portionalhazardsregressionmodelwasusedtoanalyzethefactorsinfluencingrecurrence.Results ThepositiveratesofPD-L1inTCsandTICsinprimaryCRCwere14.3%(4/28)and46.4%(13/28),respectively.PD-L1expressioninprimaryTICsofCRCpatientswithlivermetastaseswassignificantlycorrelatedwiththelargesthepatictumordiameter(P
6、0.05).PD-L1expressioninprimaryTICsofCRCpatientswithlivermetastasiswascorrelatedwithpoorRFSafterMWA(P3cminCRCpatientswithlivermetastasesweretheriskfactorsforrecurrenceafterMWA(P0.05).Conclusion PD-L1expressioninprimaryTICsofCRCpatientswithlivermetastasismayincreasetheriskofrecurrenceafterMWAforliverm
7、etastasis.Key words:PD-L1;Colorectalcancer;Livermetastases;Microwaveablation;RecurrenceFunding:ScienceandTechnologyProjectofGansuProvince(No.20YF3FA015)Competing interests:Theauthorsdeclarethattheyhavenocompetinginterests.摘 要：目的 探讨程序性死亡配体1（PD-L1）在结直肠癌（CRC）肝转移患者原发灶肿瘤细胞（TC）和肿瘤浸润免疫细胞（TIC）中的表达情况，及其对肝转移微
8、波消融（MWA）术后复发的预测价值。方法 回顾性收集28例CRC肝转移患者原发灶的石蜡包埋标本，采用免疫组织化学法检测其中PD-L1表达水平，分析其与临床特征的关系。Kaplan-Meier法和Logrank检验进行无复发生存（RFS）分析，Cox比例风险回归模型进行影响复发的多因素分析。结果 PD-L1在CRC原发灶TC和TIC中的阳性率分别为14.3%（4/28）和46.4%（13/28）。CRC肝转移患者原发灶TIC的PD-L1表达与肝转移瘤最大径有显著关联（P0.05），与肝转移MWA术后更差的RFS相关（P3cm是影响肝转移MWA术后复发的危险因素收稿日期：2022-05-18；修回
9、日期：2022-07-17基金项目：甘肃省科技计划项目（20YF3FA015）作者单位：1.730000兰州，甘肃中医药大学第一临床医学院；2.730000兰州，甘肃省人民医院超声医学科通信作者：周祖邦（1973-），男，硕士，主任医师，主要从事超声诊断和超声介入治疗工作，E-mail:作者简介：任建伟（1993-），男，硕士在读，医师，主要从事介入超声相关研究（P3cm9例。纳入标准：（1）术前未接受放疗和化疗；（2）原发病灶行根治性手术切除，术后经病理确诊为CRC；（3）无论同时或异时肝转移都符合中国结直肠癌肝转移诊断和综合治疗指南（2020版），且肝功能Child-Pugh分级为A或B级
10、。排除标准：（1）患有其他肿瘤；（2）临床病理及随访资料不完整者。本研究经甘肃省人民医院伦理委员会批准。1.2 研究方法1.2.1 PD-L1蛋白免疫组织化学检测及判读标准 试剂：PD-L1（SP263）抗体试剂及DAB染色液均购自西安元鼎体外诊断试剂有限公司。检测方法：使用CRC石蜡包埋标本，4 m厚度切片，在罗氏全自动免疫组织化学染色仪上进行染色，步骤严格按照试剂盒说明书执行，染色结束后清洗、封片，显微镜观察。检测PD-L1在肿瘤细胞（TC）和肿瘤浸润免疫细胞中（TIC）的表达情况，PD-L1蛋白定位于细胞膜和（或）细胞质，当所观察指标部位出现棕黄色颗粒为阳性细胞。分别计算PD-L1染色阳
11、性TC/TIC在整张片的TC/TIC总数中所占的百分比，5%定义为阳性表达，5%为阴性表达11。1.2.2 CRC肝转移病灶MWA治疗及术后随访 仪器：超声诊断仪LOGIQE9（美国GE公司），造影剂为声诺维（上海Bracco公司），微波消融仪（南京维京九洲医疗器械研发中心）。本研究病例MWA操作由介入超声科经验丰富的高年资医师完成，常规使用超声定位并引导消融，术后行超声造影，确认病灶是否消融完全，必要时行补充消融。术后通过电子病例、门诊记录及电话等方式，每3个月对患者复发情况进行随访，并记录患者术后无复发生存期（RFS），末次随访时间为2021年12月31日。复发的定义：增强影像学检查提示靶
12、病灶最大径至少增加20%或出现新病灶。1.3 统计学方法采用SPSS25.0软件进行统计学分析。用2或Fisher精确检验分析不同PD-L1表达与临床参数的关系，Kaplan-Meier计算累积无复发生存率及绘制曲线，Logrank检验进行不同PD-L1表达的无复发生存分析。Cox回归分析CRC肝转移患者MWA术后复发的独立危险因素。P0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1 PD-L1在CRC原发灶TC和TIC中的表达CRC肝转移患者原发灶中，PD-L1在TC中的阳性表达为14.3%（4/28），在TIC中为46.4%（13/28），且主要表达在淋巴细胞和巨噬细胞，见图1。2.2 不同PD
13、-L1蛋白表达与CRC肝转移患者临床特征的关系CRC肝转移患者中，原发灶TIC中PD-L1表达在肝转移瘤最大径间差异有统计学意义（P0.05）；原发灶TC中的PD-L1表达在年肿瘤防治研究2023年第50卷第1期 CancerResPrevTreat,2023,Vol.50,No.140龄、性别、原发灶位置、肝转移出现时间、转移瘤数目、转移瘤最大径间差异均无统计学意义（P0.05），见表1。2.3 不同PD-L1表达对CRC肝转移患者MWA术后复发的影响28例患者均得以有效随访，随访时间230个月，中位随访12个月，随访过程中18例患者出现消融后复发。CRC原发灶TC中的PD-L1阳性表达患者
14、中位无复发生存时间为10个月，阴性表达患者为12个月，差异无统计学意义（P0.05），见图2A。CRC原发灶TIC中的PD-L1阳性表达患者中位无复发生存时间为8个月，阴性表达患者为18个月，差异有统计学意义（P0.05），见图2B。2.4 Cox回归分析影响CRC肝转移患者MWA术后复发的危险因素单因素分析显示，原发灶TIC中PD-L1表达、肝转移瘤最大径均是影响CRC肝转移患者MWA术后复发的危险因素（P0.05），见表2。3 讨论CRC的发生、发展涉及十分复杂的生物学过程，其机制尚未完全明确，研究12显示，肿瘤免疫微环境从中扮演着重要角色，在所有阶段都暗示了肿瘤细胞与免疫系统之间复杂而动
15、态的相互作用，预先存在的免疫参数可能与患者的生存相关。PD-1/PD-L1信号通路是肿瘤免疫检查点阻断治疗的热门靶点，CRC肝转移部分患者已从中获益13。热消融治疗不仅可以杀死癌细胞，还能诱发特异性抗肿瘤免疫反应，已广泛应用于治疗原发性和转移性肝恶性肿瘤。目前局部热消融联合免疫检查点阻断治疗是一个非常活跃的肿瘤研究图1 PD-L1在CRC原发灶TC(A)和TIC(B)中的阳性表达(IHC200)Figure 1 Positive PD-L1 expression in TCs(A)and TICs(B)of primary CRC(IHC200)表1 CRC肝转移患者原发灶TC和TIC中PD-
16、L1的表达与临床特征的关系(n=28)Table 1 Relation between PD-L1 expression in TCs and TICs of primary loci and clinical features of patients with CRC liver metastasis(n=28)VariablePD-L1expressionofTC2PPD-L1expressionofTIC2PPositiveNegativePositiveNegativeAge(years)0.0971.0000.1910.44960210576021488Gender0.0291.0000.0571.000Male317911Female1744Primarysite0.1091.0002.1840.228Rectum316712Colon1863Timeoflivermetastasis0.0351.0000.5260.655Metachronous3191111Synchronous1524Numberoflivermetastasistumor0.0241.0000.61
