1、第 53 卷 第 2 期2023 年 2 月Vol.53 No.2Feb.2023233 日 用 化 学 工 业（中英文）China Surfactant Detergent&Cosmetics Received:February 17,2022;Revised:February 1,2023.*Corresponding author.Tel.:+86-0771-5838968,E-mail:.广西药品监督管理局2021年药品安全科研项目“化妆品微生物污染分析及防腐体系评价”DOI：10.3969/j.issn.1001-1803.2023.02.015Analysis of microbi
2、al contamination of cosmetics and identification of contaminated bacteria in Guangxi from 2018 to 2020TaoWang,HuiminTan,BinZhu*（Guangxi Institute for Food and Drug Control,Nanning,Guangxi 530021,China）Abstract:According to the“Technical Specification for Safety of Cosmetics”（2015 edition）,the cosmet
3、ics are tested for microbial indicators.The contaminated bacteria are identified by malDI-TOF-MS and 16S rRNA sequencing technology,and the homology of the contaminated strains is compared and analyzed to investigate the microbial contamination of cosmetics in Guangxi.The results show that the homol
4、ogy of the same bacterial strain（Pluralibacter gergoviae）from three batches of mask of the same manufacturer is high after comparison and analysis.A total of 1 521 batches are qualified among 1 538 batches of cosmetics with the pass rate of 98.9%during 2018 to 2020.Among them,the qualified rate of a
5、erobic bacterial count is 99.0%,the qualified rate of mold and yeast is 99.9%,the qualified rate of Pseudomonas aeruginosa is 99.9%,and the qualified rate of Staphylococcus aureus and heat-resistant coliform is 100.0%.The samples of contaminated microorganisms are mainly facial mask,skin care,toothp
6、aste,hair care,and skin care products for infants.The unqualified samples are 10 batches of facial mask,4 batches of skin care,2 batches of toothpaste and 1 batch of hair care.The work indicates that the contaminated microorganisms are exceeded the standard in some cosmetics,and the conditioned path
7、ogens above the standards（such as Burkholderia cepacia complex，BCC and Pluralibacter gergoviae）are detected in some samples.Although the qualified rate of microbial indicators in cosmetics is increasing year by year,microbial contamination still needs to be paid attention to.Key words:cosmetics;cont
8、aminated microorganism;analysis;identification234第 53 卷分析与检测日 用 化 学 工 业（中英文）化妆品是以涂擦、喷洒或者其他类似方法，施用于皮肤、毛发、指甲、口唇等人体表面，以清洁、保护、美化、修饰为目的的日用化学工业产品1。随着人们生活水平的提高和对美的不断追求，化妆品现已成为人们生活中最为常见的消费品之一。化妆品由化学或天然成分组成，含有多种营养物质，如水分、蛋白质、氨基酸、脂类、肽类、醇类和维生素等，为各种微生物的生存与增殖提供了适宜的条件2,3。受到微生物污染的化妆品不但会引起产品腐败变质，更重要的是致病微生物污染会给消费者的健康
9、带来危 害4,5。本文对20182020年实验室接收的1 538批化妆品按照化妆品安全技术规范（2015年版）进行微生物学指标检验，对结果进行统计分析，并对化妆品中检出的污染菌进行鉴定及同源性比对，以期发现潜在的风险，为保障消费者的健康安全，提高化妆品的卫生质量，以及加强化妆品监督管理提供科学 依据。1 实验部分1.1 主要材料、试剂与仪器20182020年实验室抽检、委托检验等化妆品，共计1 538批。样品可分为如下几大类：护肤类：531批；面膜类：603批：特殊用途类：42批；婴幼儿和儿童类：47批；发用类：108批；美容修饰类：72批；牙膏：135批。卵磷脂-吐温80琼脂培养基，北京陆桥
10、技术责任有限公司；SCDLP液体培养基，广东环凯微生物科技有限公司；双倍乳糖胆盐培养基，北京陆桥技术责任有限公司；孟加拉红培养基，广东环凯微生物科技有限公司；氯化钠，国药集团化学试剂有限公司；Baird-Parker琼脂培养基，广东环凯微生物科技有限公司；十六烷三甲基溴化铵琼脂，广东环凯微生物科技有限公司。BD400生化培养箱，德国BINDER公司；AC2-6S1生物安全柜，新加坡ESCO公司；MicroflesLT飞行时间质谱微生物鉴定系统（MALDI-TOF MS），德国Bruker。1.2 实验方法1.2.1 样品检验按照化妆品安全技术规范（2015年版）进行检验。检验项目为菌落总数、耐
11、热大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌。1.2.2 评价标准按照化妆品安全技术规范（2015年版）中规定，化妆品的微生物学应符合下列规定：菌落总数：眼部、口腔及儿童用化妆品500 CFU/mL（g），其他化妆品1 000 CFU/mL（g）；霉菌和酵母菌 100 CFU/mL（g）。耐热大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌不得检出。凡出现1项指标不符合标准的判定为不合格样品。1.2.3 菌株鉴定样品中检出的污染菌，经分离、纯化，采用MALDI-TOF-MS和16S rRNA、recA测序技术进行鉴定，并对经鉴定为相同菌种的进行同源性比对分析。20182020年广西化妆品微生物
12、污染状况分析及 污染菌鉴定王 涛，谭慧敏，朱 斌*（广西壮族自治区食品药品检验所，广西 南宁 530021）摘要：考察分析广西化妆品微生物污染状况。按化妆品安全技术规范（2015年版）对化妆品进行微生物学指标检验，对结果进行统计分析，通过MALDI-TOF-MS和16S rRNA测序技术等方法鉴定检出污染菌，并对污染菌株进行同源性比对分析。20182020年期间1 538批化妆品，合格1 521批，总合格率为98.9%。其中，菌落总数合格率99.0%，霉菌和酵母菌合格率99.9%，铜绿假单胞菌合格率99.9%，金黄色葡萄球菌、耐热大肠菌群合格率均为100.0%。微生物学指标合格率逐年上升，但仍
13、有部分品种存在微生物污染超标情况，部分样品检出目前标准规定以外的条件致病菌（如洋葱伯克霍尔德菌复合体），应引起重视。关键词：化妆品；微生物污染；分析；鉴定中图分类号：TQ658 文献标识码：A 文章编号：1001-1803（2023）02-0233-06235第 2 期分析与检测王 涛，等：20182020年广西化妆品微生物污染状况分析及污染菌鉴定 1）MALDI-TOF-MS检测将待测菌株纯化后接种于TSA培养基中，置于（361）培养24 h。挑取单个菌落涂布于MALDI靶板的靶点上，覆盖1 L 70%甲酸水溶液在样品点上，自然晾干。然后覆盖1 L HCCA溶液在样品点上，自然晾干，待完全干
14、燥后进行MALDI-TOF-MS检测。通过软件检索，将待测菌质谱图与数据库质谱图进行统计学分析，得到与之匹配的相应菌株鉴定分值及排名。得分愈高则说明待测菌株的谱图同质谱库中某一标准菌株的谱图（质量和峰高）愈相近。所得的图谱采用Biotyper的MSP聚类分析。2）测序分析16S rRNA基因序列鉴定：将相应的细菌菌株提取DNA后，以通用引物27F和1492R扩增目标菌株的16S rRNA基因序列。ITS基因鉴定：真菌菌株采用通用引物ITS1和ITS4扩增ITS序列。16SrRNA、ITS扩增序列委托北京乐八科技有限公司进行测序。测序结果在NCBI上采用BLAST软件进行同源性搜索，得出最可能的
15、鉴定结果，初步判断菌株的分类地位。对同一厂家检出的同一种菌选择相关的参考菌株序列经Clustal X比对后，使用软件MEGA5.0，构建菌株的系统发育树，并进行同源性分析。2 结果与讨论2.1 总体情况20182020年，1 538批样品微生物学指标检验，合格1 521批，总合格率为98.9%。不合格17批，总不合格率1.1%。其中，菌落总数合格率99.0%，霉菌和酵母菌合格率99.9%，铜绿假单胞菌合格率99.9%，金黄色葡萄球菌、耐热大肠菌群合格率均为100.0%。各年度微生物学指标合格率见表1。表1 20182020年化妆品微生物学指标检测结果Tab.1 De tection resul
16、ts of the cosmetic microbiology indicators from 2018 to 2020年份样品数不合格数合格率/%2018272797.42019615599.22020651599.220182020年检验结果显示：金黄色葡萄球菌、耐热大肠菌群均未检出，合格率100%；菌落总数合格率：2020年99.2%，2019年99.2%，2018年97.4%；铜绿假单胞菌合格率：2020年100%，2019年100%，2018年99.6%；霉菌和酵母菌合格率：2020年99.8%，2019年100%，2018年100%。其中2020年的同1批次样品细菌总数及霉菌和酵母菌均不合格。各项检验指标情况见表2。表2 20182020年度微生物学各指标合格率Tab.2 Qualified rate of each indicator in microbiology from 2018 to 2020年度样品数菌落总数耐热大肠菌群金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌霉菌和酵母菌合格数/批 合格率/%合格数/批 合格率/%合格数/批 合格率/%合格数/批 合格率/%合格数/批 合格率
