1、食品安全与检验检疫2018 年 2022 年广西爬行动物沙门菌血清型分布分析顾桂敏1，覃定勇1，杨自宁1，吕鹏1，黄昌盛1，阮海1，游武霖1，王鸣柳2*，许学斌3*(1 广西壮族自治区产品质量检验研究院，广西南宁 530007;2 广西壮族自治区疾病预防控制中心，广西南宁 530021;3 上海市疾病预防控制中心病原生物检定所 上海 200336)中图分类号:S858 299 26文献标识码:B文章编号:1002 5235(2023)01 0037 04doi:10 3969/j issn 1002 5235 2023 01 016摘要:为了解 2018 年 2022 年广西爬行动物中沙门菌的
2、血清型别分布，本研究于 2018 年 2022 年采集了广西 282 份爬行动物的相关样品，对沙门菌进行分离、培养和鉴定分析。结果发现，282 份样品中检出沙门菌60 株，共有 31 种血清型，其中以奥雷宁堡沙门菌(Sal-monellaoreninburg)和汤卜逊沙门菌(Salmonellathomp-son)为主。研究表明，应加强爬行动物沙门菌生态学监测，以防止与沙门菌相关的疾病暴发。关键词:沙门菌;爬行动物;血清型随着人们生活水平的提高及动物保护意识的加强，与爬行类宠物密切接触，均会增加沙门菌从动物传播给人的风险，然而爬行动物可分为食用型、观赏型、药用型，因此美国每年接触爬行动物等被感
3、染沙门菌的病例约 7 4 万例，占沙门菌病例数的 6%1。由于爬行动物有巨大的药用和食用价值，人们容易从未经过安全审查的药用型和食用型爬行动物上感染沙门菌，其中美国爬行动物引发沙门菌病以亚种a 多见，由美国的响尾蛇携带的奥雷宁堡与亚利桑那亚种竞争宿主、非法加工成保健品被消费的疾病新传播途径值得预警，然而 FDA未对响尾蛇胶囊进行安全性或有效性审查2。随着文娱生活的丰富化，人们与观赏型爬行类宠物的密切接触也会增加感染沙门菌感染的风险，如走私入境的小乌龟和养殖的短吻鳄携带的波摩那型沙门菌曾导致美国的非伤寒沙门菌感染，而鳄鱼(肉)食用和(皮)出口贸易，提示职业暴露与防护人和动物感染风险3。英国研究者
4、对 1 445 株沙门菌使用全基因组测序方法4，证明了在家里接收稿日期:2022 10 20基金项目:广西壮族自治区市场监督管理局科技计划项目(NoGXSJKJ2022 11)。作者简介:顾桂敏(1985 )，本科，研究方向为沙门菌检验，E-mail:343041650 qq com。*通讯作者。E-mail:wmlml163 com;xxb72 sina com。触爬行动物的接触中在统计学上有显著的流行病学联系。2019 年在上海首次成功溯源了因幼儿接触宠物龟感染波摩那沙门菌5。广西 2008 2012年各类爬行动物的沙门菌监测数据表明:沙门菌阳性检出率33 2%，共检出 28 种血清型6，
5、其中 13种与人源血清型一致。因此，进行对广西爬行动物沙门菌的监测，摸清人感染与爬行动物相关沙门菌分布规律，可为相关监管部门加强防控措施提供依据。1材料与方法1 1样品来源2018 年 1 月 2022 年 7 月采集的爬行动物肛拭子、尿拭子、外表涂抹物、爬行动物生存环境水样，其来源包括广西的农贸市场、花鸟市场、龟鳖市场、养殖场、家庭养殖宠物，种类包含龟、鳖、大壁虎。1 2试剂与仪器1 2 1试剂胰蛋白胨大豆肉汤(trypticase soybroth，TSB)(北京陆桥技术股份有限公司、无锡市赛微生物技术有限公司)，Cary Blair 氏运送培养基(Cary Blair Transport
6、 Medium)(北京陆桥技术股份有限公司)，沙门显色+XLD 双拼双拼选择培养皿(安科生物制品(上海)有限公司)，TSB 海绵涂抹棒(安科生物制品(上海)有限公司)，罗伯特增菌液(appaport Vassiliadis broth，V)(北京陆桥技术股份有限公司、安科生物制品(上海)有限公司)、亚硒酸盐煌绿增菌液(selenite brilliant greenbroth，SBG)(上海科玛嘉微生物技术有限公司、安科生物制品(上海)有限公司)，沙门菌显色平板(CHOM agar Salmonella，CAS)(上海欣中生物工程有限公司、无锡市赛微生物技术有限公司)、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐平板
7、(xylose lysine deoxy-cholate，XLD)(美国 BD 公司、无锡市赛微生物技术有限公司，沙门菌诱导软琼脂(安科生物制品73广西畜牧兽医2023 年 Vol 39(1)(上海)有限公司)和肠道菌筛选双糖管(无锡市赛微生物技术有限公司)，沙门菌分型血清(丹麦 SSI诊断公司)，法国梅里埃细菌鉴定卡革兰氏阴性细菌鉴定卡(GN)(法国生物梅里埃公司)均在有效期内使用。1 2 2仪器法国生物梅里埃 VITEK 2 Compact(法国生物梅里埃公司)1 3实验方法1 3 1肛拭子、尿拭子拭子+9 mL SBG，36培养 24 h，接种 XLD 和 CAS，36培养 24 h，观
8、察菌落特征。挑取选择性平板挑取 2 个及以上的疑似典型菌落，完成肠道菌筛选双糖管初筛试验，初筛符合者进行系统生化鉴定，符合沙门菌属者鉴定血清型。1 3 2水水样 45 mL+10 倍浓缩 TSB 5 mL，混匀后 36培养 24 h，取 1 mL TSB 加入 SBG，另吸取0 1 mL TSB 加入 V 中。SBG 置于36、V 置于 42，从 2 种选择性增菌液各取 10 L 接种XLD 和 CAS，36培养 24 h，观察菌落特征。挑取选择性平板挑取 2 个及以上的疑似典型菌落，完成肠道菌筛选双糖管初筛试验，初筛符合者进行系统生化鉴定，符合沙门菌属者鉴定血清型。13 3涂抹物TSB 海绵
9、涂抹棒涂抹爬行动物表面，36培养 24 h，取 1 mL TSB 加入 SBG，另吸取0 1 mL TSB 加入 V 中。SBG 置于36、V 置于42，从2 种选择性增菌液各取10L 接种 XLD 和CAS，36 培养 24 h，观察菌落特征。选用选择性平板挑取 2 个及以上的疑似典型菌落，完成肠道菌筛选双糖管初筛试验，初筛符合者进行系统生化鉴定，符合沙门菌属者鉴定血清型。1 4统计分析本研究采用 EXCEL2007、SPSS26 0 软件对数据进行整理和分析，计数资料差异比较采用 2检验，以 P 0 05 为差异有统计学意义。2结果2 1检测结果2018 年 2022 年采集于广西的农贸市
10、场、花鸟市场、养殖场、家庭养殖宠物的各种样品，种类包含龟、鳖、大壁虎共 282 份，见表 1。2 2分离菌血清型60 株沙门菌共有 31 种血清型，其中 3 株为不可分型，前 2 位沙门菌血清型依次为奥雷宁堡、汤卜逊，见表 2。表 1三类爬行动物沙门菌的分离检测结果分类阳性阴性合计龟53a164a217鳖6a，b23a，b29大壁虎1b35b36合计60222282注:不同字母上标表示差异显著(P 005)表 2三类爬行动物沙门菌血清型的分布情况分类龟鳖大壁虎合计Salmonella b 38:l，v:z531001Salmonella b 48:i:z351001Salmonella b 6
11、1:l，v:z350202C2 C3 群1001I 群1001O61 群1001奥雷宁堡6006奥兹马森3003波摩那2103肠炎1001非丁伏斯1012科特布斯1001科瓦利斯1001劳拉1001利奇菲尔德2002罗森1001迈阿密1001蒙得维的亚1001姆班达卡1001慕尼黑2002纽波特1001浦那1001圣保罗0101圣地亚哥2002鼠伤寒4004鼠伤寒(H2 )2002斯坦利4004汤卜逊3205旺兹沃思1001维尔肖1001胥伐成格隆1001乙副爪哇变异型1001印第安纳1001长湾尼2002阴性1642335222总计21729362822 3龟样品来源及其分离结果根据龟的来源
12、，分为中国本地产的龟和外来入侵物种的龟的分离情况，见表 3。表 3不同龟种来源沙门菌分离情况龟来源阳性阴性本地35a182a外来17b200b其他1c216c合计53598注:不同字母上标表示差异极显著(P 001)83广西畜牧兽医2023 年 Vol 39(1)2 4样品龟来源及其分离株血清型本地龟与外来入侵物种龟分离株血清型的分布情况，见表 4。表 4不同来源龟分离株血清型的分布情况血清型外来龟本地龟其他龟Salmonella b 38:l，v:z53010Salmonella b 48:i:z35010Salmonella b 61:l，v:z35000C2 C3 群100I 群010O
13、61 群010奥雷宁堡600奥兹马森210波摩那110肠炎100非丁伏斯100科特布斯100科瓦利斯100劳拉010利奇菲尔德110罗森001迈阿密010蒙得维的亚100姆班达卡100慕尼黑110纽波特100浦那100圣保罗000圣地亚哥110鼠伤寒310鼠伤寒(H2 )110斯坦利310汤卜逊300旺兹沃思010维尔肖100胥伐成格隆100乙副爪哇变异型100印第安纳100长湾尼020总计351713讨论与结论最新公布的沙门菌血清型共 2 6597 种，沙门菌通常在爬行和哺乳类动物的肠道中留存，再通过粪便污染水源土壤使其通过外环境的生态循环，广泛分布在大自然中8。因此，应加强爬行动物沙门菌生
14、态学监测，预防与沙门菌相关的疾病暴发。为了满足众人对观赏爬宠的需求，市面上许多品种均为外来物种，经近 5 年的时间调研、采样，发现花鸟市场上的宠物龟大部分为外来物种，常见的巴西红耳龟是市面上的宠儿，尤其是陆龟的种龟，基本上以进口为主9。在 2020 年 7 月 3 日，农业农村部网站发布农业农村部、海关总署第 256 号公告，发布经修订的中华人民共和国进境动物检疫疫病名录 中，未表明爬行动物进境需进行沙门菌检疫，因此，外来物种的爬行动物携带沙门菌有输入性的风险。然而，欧盟委员会表示，爬行动物肉携带沙门菌是威胁人类健康的潜在因素，并于2020 年 2 月 17 日发布(EU)2020/2056
15、号条例，制定爬行动物肉产品中沙门菌标准，对法规(EC)No2 073/2005 附件 I 的修改增加了爬行动物投放市场的沙门氏菌检出标准10，因此，加强爬行动物沙门菌的监测，需要引进高于国标的方法、技术，否则国外的技术壁垒会导致我们处于技术劣势，进而给企业经济和国家经济带来严重的损失。世界动物保护协会在北京发布野生动物异域宠物全球贸易报告称:目前已有超过 500 种鸟类及500 种爬行动物在全球交易，其中非法贸易额高达200 亿美元。异宠贸易背后的种种，以及饲养异宠如爬虫等携带的病原体给饲养者带来的风险都值得警惕，异宠贸易带来生态及安全隐患如常见的巴西红耳龟就被列为全球最危险的入侵物种之一11
16、。红耳龟其多种致病性血清型沙门氏菌携带率高，可通过水生生态系统传播，威胁人类的健康12。近年来，中国海关及其相关执法部门针对走私濒危野生动植物的行为加大了打击力度，其中2018 年 5 月，广东查获了绿鬣蜥 628 只、豹纹陆龟30 只;2019 年 9 月 21 日东兴海关缉私分局捣毁一个鳄鱼走私窝点，现场查获暹罗鳄活体 806 条13。这使得我国外来爬行动物有携带沙门菌输入性的风险得到一定的控制。通过调研发现爬行动物沙门氏菌检出全部阴性的饲养方法是饲料+益生菌。而投喂生料的龟能检出沙门氏菌，每一年的沙门氏菌的血清型都不一样，在龟体内定殖的菌会由于喂养的生料的带菌情况不一样而不同。有研究发现用含有枯草芽孢杆菌的(UD 1 022)这种益生菌的水灌溉生菜，可以让鼠伤寒沙门菌在生菜叶片内的含量大大减少14。因此，国内需要与时俱进制定更先进、更全面的沙门菌检测技术来加强爬行动物沙门菌的监测。建议国内监管部门需尽快制定相关法律法规，如禁止蛇鳄龟和红耳龟的进口，从源头上降低入侵概93广西畜牧兽医2023 年 Vol 39(1)率15。参照美国食品药品监督管理局禁止小乌龟的商业流通16，加强已有
