1、论著临床研究基金项目：国家自然科学基金（）第一作者简介：陈首，硕士，主治医生，研究方向：脊柱骨病外科。通信作者简介：彭小忠，硕士，主任医师，研究方向：脊柱手术的微创治疗。基因 和 位点单核苷酸多态性与女性强直性脊柱炎易感性的关系陈 首 武振国 罗 雪 罗瀚文 韦界卯 彭小忠（柳州市工人医院 广西医科大学第四附属医院 脊柱外科，影像医学科，关节外科，广西柳州市）【摘要】目的 探讨人类白细胞抗原（）基因 和 位点单核苷酸多态性与女性强直性脊柱炎（）易感性的相关性。方法 选取 例女性 患者（病例组）及 例体检正常女性（对照组）。比较两组研究对象的一般资料，以及 基因 和 位点基因型和等位基因分布频率
2、。使用 回归模型分析上述基因位点基因型和等位基因与女性 易感性的相关性。结果 病例组 家族史比例及 阳性比例均高于对照组（均 ），而两组吸烟史比例、饮酒史比例差异均无统计学意义（均 ）。基因 位点的等位基因 增加女性的 发病风险（，），相比于基因型，位点的基因型 增加女性的 发病风险（，）；基因 位点的等位基因和基因型与女性的 发病风险无关（均 ）。结论 基因 位点单核苷酸多态性与女性 易感性相关，位点的等位基因、基因型 可能会增加女性 的发病风险。【关键词】强直性脊柱炎；人类白细胞抗原 基因；单核苷酸多态性；易感性；女性【中图分类号】【文献标识码】【文章编号】（）：，（，）【】（）（）（）（
3、）（），（）（，），（，）；，（广西医学 年 月第 卷第 期 ），【】，强直性脊柱炎（，）是一种自身免疫性血清学阴性脊柱关节炎，好发于男性，以累及中轴脊柱微动关节为特点，常伴有脊柱关节炎以外的表现。欧洲高加索白种人的 发病率约为 。我国 综合患病率为，汉族人群的 患病率为 ，男女性患者比例为 。国外研究显示，大约 的 患者的发病年龄为 岁，男女性患者比例为 ，且男性 患者的疾病程度重于女性，与男性 患者相比，女性 患者的发病年龄较晚，诊断和治疗容易被忽视。的易感性在很大程度上取决于遗传因素，有研究证实，的遗传易感性超过。人类的主要组织相容性复合体（，）区域内的基因，特别是人类白细胞抗原（，）类
4、分子，是免疫调节中必不可少的因子。被认为是 发病的重要风险基因，以上的 患者 呈阳性，而中国健康人群中 阳性率为 。研究表明，阳性占欧洲后裔人群 发病遗传风险因素的 。这提示在 阳性个体中 是否发病还受到其他基因的影响。越来越多的证据表明，其他 和非 基因在 易感性中也发挥重要作用。但是 在性别上发病率的巨大差异原因尚不清楚。本研究筛选 了 基 因 的 位 点 和 位点，选择长期在广西柳州地区居住的女性作为研究对象，探讨 基因单核苷酸多态性与女性 易感性的关系。资料和方法 临床资料 选择 年 月至 年 月在广西医科大学第四附属医院诊治的 例女性 患者作为病例组。纳入标准：（）发病年龄 岁；（）
5、符合国际脊柱关节炎协会制定的脊柱关节炎分类标准 和 年中华医学会风湿免疫学分会强直性脊柱炎诊断及治疗指南中的相关标准；（）民族为壮族，在柳州地区生活 年以上。排除标准：（）类风湿因子阳性患者；（）其他原因所致骶髂关节炎患者；（）合并其他免疫性疾病及免疫缺陷疾病患者；（）合并肿瘤等严重器质性疾病患者。另选取同期在该院体检的 例健康女性作为对照组。纳入标准：（）体检结果判定为健康；（）血常规、反应蛋白、红细胞沉降率等指标均正常；（）同意进行类风湿因子、和 检测；（）民族为壮族，在柳州地区生活 年以上；（）个人或者家族无脊柱关节病史；（）与各研究对象间无血缘关系。排除标准：（）类风湿因子阳性者；（）
6、存在腰痛、骶髂部疼痛者。所有研究对象均对本研究知情同意，本研究经广西医科大学第四附属医院医学伦理委员会批准。单核苷酸多态性位点的选择 在 数据库（：）下载关于 基因在中国北京汉族人群中的单核苷酸多态性（，）基因分型数据，载入 平 台（：），参数选择最小等位基因频率（，）、相关系数。选择 基因（，）上的 个标签，分别是 基因非翻译区的 位点和内含子区的 位点。基因分型的检测 提取血液标本：于病例组首次入院时、对照组体检当日，抽取其空腹外周静脉血 ，放入 无菌抗凝试管，置于 超低温冰箱中保存备用。基因组 的提取：按照基因组 提取试剂盒 天根生化科技（北京）有限公司，批号：操作说明抽提、纯化外周血，
7、经紫外分光光度计检测纯度，在 则表明纯度较高，可用于后续的基因分型实验，在行基因分型前，将 产物保存在 冰箱内以防降解。扩增和基因分型：使用 天根生化科技（北京）有限公司，批号：试剂盒，引物由 公司设计并合成，和 位点的引物序列见 ，表。反应体系包括 热启动酶 、反应缓冲液 、上下游 引物（浓度为 ）各 、（浓度 ）。反应条件为 ；、，扩增 个循环；。使用 型基因分析仪生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序。表 基因分型的 位点和 反应引物 位点等位基因基因位置引物序列（）扩增片段长度（）：上游：下游：上游：下游：统计学分析 采用 软件进行统计学分析。计量资料以（）表示，组间比较采用两独立样
8、本 检验；计数资料以例数（百分比）表示，组间比较采用 检验；采用多重 回归模型分析 基因的 位点和 位点的等位基因和基因型与女性 易感性的相关性。采用 软件对 个 位点进行单倍体的构建和连锁不平衡（，）分析，以标准化连锁不平衡系数 和相关系数 来定义 方块，当 时使用 软件的可信区间法定义 方块。基因位点排除标准：缺失率 ，平衡检验 ，基因型缺失率 。以 表示差异有统计学意义。结 果 两组研究对象一般资料的比较 病例组的年龄低于对照组，家族史比例及 阳性比例均高于对照组（均 ），而两组吸烟史比例、饮酒史比例比较，差异均无统计学意义（均 ）。见表。表 两组研究对象一般资料的比较变量病例组（）对照
9、组（）值 值年龄（，岁）家族史（）有 无（）（）（）阳性（）是 否（）（）（）吸烟史（）无 有（）（）（）（）饮酒史（）无 有（）（）（）（）注：吸烟定义为每天至少吸 支以上且持续 年；饮酒定义为每周饮酒 次或者 次以上且每次不少于 ，或者一次饮用其他酒类（啤酒、黄酒、果酒等）超过 。基因的 位点和 位点基因型和等位基因与 易感性的相关性 位点的等位基因 增加女性的 发病风险（，）；相比于基因型，位点的基因型 增加女性的 发病风险（，）。而 位点的等位基因和基因型与女性的 发病风险无关（），见表。采用 软件对 个 位点进行单倍体的构建和 分析，结果显示，基因的 位点和 位点的基因型不能构建单倍
10、体 方块。广西医学 年 月第 卷第 期表 基因的 位点和 位点等位基因及基因型与 易感性的相关性 位点病例组（）对照组（）值（）值值（）值等位基因 （）（）（）（）（，）加性模型 （）（）（）（）（，）（，）等位基因 （）（）（）（）（，）加性模型 （）（）（）（）（，）（，）注：病例组例数为 例（例因检测数据无效而剔除）。值和 值为未进行校正的数值，值和 值为校正年龄、家族史和阳性后的数值。讨 论 是一种病因不明的脊柱关节病，晚期 可引起脊柱畸形和强直。基因是位于 的 基因家族成员，基因与 发病密切相关。研究表明，在东南亚人群中，存在多种与 发病有关的 风险等位基因，包括、和 等，以及保护性
11、等位基因，如、。有学者根据基因组特征将 位点进行分组，组成 集，基因的 集 中 只 有 个 位 点（、）和 个 子集（、）。根据此分类，本研究选择的基因位点归属于 基因 集，故本研究具有较强的可信度。既往有研究表明，基因 位点多态性与台湾地区成年人高脂血症痛风的发生密切相关。一项荟萃分析结果显示，基因的 位点多态性是欧洲人群巨核细胞生成和血小板形成的决定性遗传因素。等报告了 例青春期 患者并发复发性巨噬细胞活化综合征的病例，其原因可能是机体不适当的免疫反应促使巨噬细胞吞噬血细胞。等亦报告 例与 相关的原发性血小板增多症。以上研究表明，基因位点多态性与高脂血症痛风发作、巨核细胞生成和血小板形成有
12、关，而 基因位点突变是否会引起免疫反应，激活 患者单核巨噬细胞系统，还有待进一步研究。作为第三代遗传标志物，已广泛应用于疾病高危群体的筛查、疾病相关基因的鉴定、药物的设计和测试、生物学的基础研究等方面。从临床研究角度看，发病人群以青年男性多见，女性 发病年龄较晚，很多女性 患者常被漏诊而延误治疗。因此，本研究选择广西柳州地区女性人群为研究对象，探索 基因 位点和 位点与 的遗传易感性。结果显示，基因的 位点在等位基因和基因型水平上都与女性罹患 显著相关（），而 位点的等位基因和基因型与女性罹患 无关（）。本研究还采用 软件对 个 位点进行单倍体的构建和 分析，结果显示 ，说明 基因的 位点和
13、位点的基因型不存在基因连锁关系。以上结果提示 基因中 位点的等位基因和基因型变异可能导致女性人群的 易感性，这或可为进一步探索 基因 位点的 与女性 发病机制、的诊断和治疗提供前瞻性基础研究方向。综上所述，基因 位点 与女性 易感性相关，位点的等位基因、基因型 可能会增加女性 的发病风险。然而本研究存在一定局限性：首先，本研究的研究对象均来源于同一医院，存在选择偏倚。其次，本研究仅选取长期居住于广西柳州地区的女性作为研究对象，且样本量相对较小。再者，本研究仅选取两个基因位点作为研究对象。今后还应进行多中心、大样本、多个 位点的研究，以明确 基因 与女性 易感性的关系。参 考 文 献 ，：，：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：中华医学会风湿病学分会 强直性脊柱炎诊断及治疗指南 中华风湿病学杂志，（）：，：韩瑞刚，冯 凯，刘保池，等 单核苷酸多态性数据的卡方及 回归分析在 统计软件中的实现总装备部医学学报，（）：，（）：，：，（）：，（），（）：，（）：，（）：，（）：赵 静，周 韧 单核苷酸多态性及其数据库的应用国际病理科学与临床杂志，（）：（收稿日期：修回日期：）广西医学 年 月第 卷第 期
