1、Journal of Forensic Medicine,February 2023,Vol.39,No.1LC-MS/MS法测定血液中卡马西平及其代谢物崔海燕1，2，吕晨曦1，3，师燕华1，原妮2，梁嘉豪1，安全2，郭中元1，贠克明11.山西医科大学法医学院，山西 晋中 030600；2.中国辐射防护研究院，山西 太原 030006；3.上海市公安局长宁分局，上海 200336摘要：目的 建立 LC-MS/MS法测定血液样品中卡马西平及其代谢物 10，11-二氢-10，11-环氧卡马西平和 10，11-二氢-10-羟基卡马西平的方法。方法 以 1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐离子液体为萃取剂
2、处理血液样品，通过超声辅助萃取，采用ZORBAX Eclipse Plus C18，95色谱柱分离，流动相A为含0.1%甲酸、10 mmol/L乙酸铵的水溶液，流动相B为混合有机溶剂（V乙腈 V甲醇=2 3），梯度洗脱，流速1.00 mL/min，采用电喷雾离子源、正离子模式，多反应监测模式进行检测。结果 血液样品中卡马西平及其代谢物 10，11-二氢-10，11-环氧卡马西平和10，11-二氢-10-羟基卡马西平在相应范围内线性关系良好，相关系数（r）均大于0.995 6，检出限分别为 3.00、0.40 和 1.30 ng/mL，定量限分别为 8.00、1.00 和 5.00 ng/mL，
3、提取回收率为76.00%106.44%，日内和日间精密度均小于 16%。采用本方法从死亡案件的血液样品中检出卡马西平和主要代谢产物 10，11-二氢-10，11-环氧卡马西平成分，质量浓度分别为 2.71 g/mL和 252.14 ng/mL。结论本方法灵敏度高、选择性好，适用于血液样品中卡马西平及其代谢物的检测，可应用于卡马西平相关的法医学鉴定。关键词：法医毒物分析；液相色谱-串联质谱法；卡马西平；代谢物；10，11-二氢-10，11-环氧卡马西平；10，11-二氢-10-羟基卡马西平中图分类号：DF795.1 文献标志码：A doi：10.12116/j.issn.1004-5619.20
4、21.310901文章编号：1004-5619（2023）01-0034-06Detection of Carbamazepine and Its Metabolites in Blood Samples by LC-MS/MSCUI Hai-yan1,2,L Chen-xi1,3,SHI Yan-hua1,YUAN Ni2,LIANG Jia-hao1,AN Quan2,GUO Zhong-yuan1,YUN Ke-ming11.School of Forensic Medicine,Shanxi Medical University,Jinzhong 030600,Shanxi Provi
5、nce,China;2.China Institute for Radiation Protection,Taiyuan 030006,China;3.Changning Branch of Shanghai Public Security Bureau,Shanghai 200336,ChinaAbstract：Objective To establish a method for the detection of carbamazepine and its metabolites 10,11-dihydro-10,11-epoxycarbamazepine and 10,11-dihydr
6、o-10-hydroxycarbamazepine in blood samples by liquid chromatography-tandem mass spectrometry（LC-MS/MS）.Methods The blood samples were treated with 1-butyl-3-methylimidazolium hexafluorophosphate as an extraction solvent.The samples were extracted by ultrasound-assisted extraction and separated by ZO
7、RBAX Eclipse Plus C18，95 column.The mobile phase A aqueous solution containing 0.1%formic acid and 10 mmol/L ammonium acetate,and mobile phase B mixed organic solvent containing acetonitrile/methanol（VacetonitrileVmethanol=2 3）were used for gradient elution at the flow rate of 1.00 mL/min.An electro
8、spray ion source in positive mode was used for detection in the multiple reaction monitoring.Results The linearities of carbamazepine and its metabolites 10,11-dihydro-10,11-epoxycarbamazepine and 10,11-dihydro-10-hydroxycarbamazepine in 论著 基金项目：国家自然科学基金重点资助项目（82130056）；国家自然科学基金青年基金资助项目（81601647）；国家
9、博士后基金面上资助项目（2019M651086）；山西省应用基础研究面上青年资助项目（201901D211332）；山西省教育厅高校科技创新资助项目（2020L0191）作者简介：崔海燕（1985），女，博士，副教授，主要从事天然药毒物的法医毒物动力学和代谢组学研究；E-mail：通信作者：贠克明，男，教授，博士，主要从事法医毒物动力学研究；E-mail：通信作者：安全，男，研究员，博士，主要从事毒物毒理学研究；E-mail：通信作者：郭中元，男，教授，博士，主要从事研究毒药物代谢组学研究；E-mail：引用格式：崔海燕，吕晨曦，师燕华，等.LC-MS/MS法测定血液中卡马西平及其代谢物J.法
10、医学杂志，2023，39（1）：34-39.To cite：CUI H Y，L C X，SHI Y H，et al.Detection of carbamazepine and its metabolites in blood samples by LC-MS/MSJ.Fayixue Zazhi，2023，39（1）：34-39.blood samples were good within the corresponding range,with correlation coefficients（r）greater than 0.995 6.The limits of detection we
11、re 3.00，0.40 and 1.30 ng/mL，respectively.The limit of quantitation were 8.00，1.00 and 5.00 ng/mL，respectively.The extraction recoveries ranged from 76.00%to 106.44%.The relative standard deviations of the intra-day and inter-day precisions were less than 16%.Carbamazepine and its main metabolite 10,
12、11-dihydro-10,11-epoxycarbamazepine were detected in blood samples of death cases with a mass concentration of 2.71 g/mL and 252.14 ng/mL，respectively.Conclusion This method has high sensitivity and good selectivity，which is suitable for the detection of carbamazepine and its metabolites in blood sa
13、mples，and can be used for carbamazepine-related forensic identifications.Keywords：forensic toxicological analysis;LC-MS/MS;carbamazepine;metabolites;10,11-dihydro-10,11-epoxycarbamazepine;10,11-dihydro-10-hydroxycarbamazepine卡马西平（carbamazepine，CBZ）作为一种非常有效的广谱抗癫痫药，已被广泛使用 30多年1。同时，CBZ作为一种抗惊厥药物，也被用于三叉神
14、经痛的治疗2。但 CBZ有效治疗范围较窄，其有效治疗药物浓度为 4.0012.00 g/mL，不良反应发生率较高，服用CBZ后可引起头晕、头痛、乏力、复视、昏迷等不良反应，CBZ的中毒血质量浓度为 10.00 g/mL，致死血质量浓度为 20.00 g/mL，过量服用可造成昏迷、意外事故的发生甚至死亡。因此，CBZ的血药浓度监测不仅对临床治疗评价十分必要3，同时血液中 CBZ及其代谢物的含量是判断 CBZ中毒相关案件中服药过量或死亡的重要评判依据。因此，有必要建立血液中CBZ及其主要代谢物LC-MS/MS检测方法。CBZ的体内代谢主要在肝中进行，主要代谢途径是 通 过 细 胞 色 素 P450
15、 3A4 酶（cytochrome P450 3A4，CYP3A4）和细胞色素 P450 2C8 酶（cytochrome P450 2C8，CYP2C8）氧化为 10，11-二氢-10，11-环氧CBZ（10，11-dihydro-10，11-epoxycarbamazepine，CBZ-EP）4，极少氧化为 10，11-二氢-10-羟基 CBZ（10，11-dihydro-10-hydroxycarbamazepine，CBZ-10OH）5。其中 CBZ-EP已被证明具有与 CBZ类似的抗癫痫特性，并可能引起神经毒性作用，可能与CBZ的用药不良反应相关6-7。目前，临床上测定 CBZ 浓度
16、的方法主要是免疫分析法，但该法的测定结果常受到代谢物和结构相似药物的干扰，且无法测定 CBZ 代谢物的浓度8。有关CBZ中毒的法医毒物检测方法主要是LC-MS/MS，但多是对 CBZ 原体的检测，对代谢物的检测没有涉及9-10。有对水体中CBZ原体和主要代谢物的LC-MS/MS检测报道11。在实际中毒及死亡案例中，如需推断给药时间或死亡时间时，仅仅检测原体是无法有效解决问题的。因此，本研究拟采用超声辅助离子液体-分散液液微萃取结合LC-MS/MS建立血液中CBZ及其2种代谢产物CBZ-EP和CBZ-10OH的检测方法，并应用于 1例实际案例中，旨在为 CBZ 临床治疗药物浓度监测以及与 CBZ中毒相关案件的法医学鉴定提供实验数据。1材料与方法1.1 主要仪器与试剂1260-6460液相色谱-三重四极杆串联质谱仪（美国Agilent公司），ET3301全自动氮吹浓缩仪（中国欧陆科仪有限公司），Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司），VORTEX-GENIE 2 旋涡混合器（美国 Scientific Industries公司），Research单道移液器（德国Eppend
