1、2023 年 2 月第 30 卷第 2 期1 338 例男性无精症或少精症患者 Y染色体微缺失分析于海洋1，杨静静2，曾昭书3*（1郑州大学第三附属医院 检验科，河南 郑州450052；2郑州大学第三附属医院 生殖中心，河南 郑州450052；3郑州大学 基础医学院，河南 郑州450001）【摘要】目的 探讨男性无精症或少精症患者的Y染色体微缺失情况。方法1 338例男性不育患者按照精液常规检查结果分为无精症组、严重少精症组、少精症组，选取同期320例健康男性为正常对照组，应用荧光定量PCR技术进行AZF区微缺失分析。结果 无精症组和严重少精症组的Y染色体微缺失发生率均显著高于正常对照组（P
2、005）。在入组的研究对象中，AZFc位点缺失在男性不育中占比最高，为49。在118例Y染色体微缺失患者中，共有25例染色体核型异常，其中以47,XXY核型占比最高，为85。结论Y染色体微缺失检测是男性少精症或无精症等的首选临床检测项目，对男性不育的诊断有重要的指导价值。【关键词】无精症；少精症；Y染色体微缺失；不育中图分类号：R698+.2文献标识码：Adoi:10.3969/j.issn.1674-4659.2023.02.0283Analysis of Y Chromosome Microdeletions in 1 338 Male Patients with Azoospermia
3、or Oligozoospermia/YU Haiyang1,YANG Jingjing2,ZENG Zhaoshu3*(1Clinical Laboratory,the Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China;2Reproductive Center,the Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China;3Basic Medical Col-lege,Zhengzhou Universit
4、y,Zhengzhou 450001,China;*Corresponding author:ZENG Zhaoshu,E-mail:)AbstractObjective Toexplore the Y chromosome microdeletion in male patientswith azoospermia oroligozoospermia.Methods Atotal of 1 338 male patients with infertile were divided into azoospermia group,severe oligozoospermia group and
5、oligozoospermia groupaccording to the results of semen routine examination,and 320 healthy men were selected as normal control group.AZF zone microdeletionanalysis was performed by fluorescence quantitative PCR.Results The incidence of Y chromosome microdeletion in normal control groupwas lower than
6、 that in azoospermia group and severe oligozoospermia group(P 0.05).Among the subjects enrolled,the AZFc locus deletionaccounted for the highest proportion(4.9%)of male infertility.Among 118 patients with Y chromosome microdeletion,25 cases hadchromosomal karyotypeabnormalities,ofwhich 47,XXY karyot
7、ype accounted forthe highestproportion(8.5%).Conclusions Y chromosomemicrodeletion detection is the preferred clinical detection project for male oligospermia or azoospermia,which has important guiding valuefor the diagnosis of male infertility.Key wordsAzoospermia;Oligozoospermia;Y chromosome micro
8、deletion;Infertility据报道1，全球范围内的育龄夫妻中10 15患有不育，其中因男性原因导致不育的占比约为50。男性不育的病因较多，如染色体异常、Y染色体微缺失、生殖系统炎症以及内分泌疾病等，其中Y染色体无精子因子（AZF）微缺失是导致男性不育的第二大因素2。AZF是影响精子生成的重要基因，不同区域（AZFa、AZFb、AZFc）的缺失有着不同的临床结局。本研究以无精症或少精症患者为研究对象，通过实时荧光定量PCR方法检测AZF，探讨男性无精症或少精症患者的Y染色体微缺失情况，为男性不育患者的诊疗提供依据。1资料与方法11一般资料回顾性选取2017年1月至2022年6月在郑州
9、大学第三附属医院就诊的1 338例男性不育患者为研究对象，按照精液常规检查结果分为三组，即：无精症组（n 720），年龄22 58岁，平均年龄（3115 520）岁；严重少精症组（n 395），年龄22 60岁，平均年龄（3123 557）岁；少精症组（n 223），年龄22 51岁，平均年龄（3093 557）岁。选取同期320例健康男性为正常对照组，年龄22 56岁，平均年龄（3178 544）岁。四组研究对象的一般资料比较，差异无统计学意义（P 005）。12入选标准纳入标准：均进行精液常规检查；符合WHO第5版 人类精液检查与处理实验室手册3中的相关标准；均来自河南地区；对检测项目知情
10、同意，且配合度良好。排除标准：因内分泌紊乱、生殖系统炎症、精索静脉曲张等因素导致的无精症；生理性不育的患者；因其他病理因素导致不育的患者。13方法131精液常规检查 根据本院检验科 精液采集指南 采集精液，按照 人类精液检查与处理实验室手册 中的标准进行常规精液分析，检测结果参考以下标准进行判定：每次射精精子总数39 106mL，精子向前运动百分率32，低于15 106mL为少精，低于5 106mL为严重少精。收稿日期：20221010作者简介：于海洋（1986），男，河南省原阳县人，本科学历，主管检验师，研究方向：单基因遗传病相关。*通讯作者：曾昭书（1973），男，河南信阳人，博士研究生学
11、历，教授，研究方向：法医物证相关；Email：zzszzueducn。论著（调查统计）2832023 年 2 月第 30 卷第 2 期132 Y染色体微缺失采集研究对象外周静脉血2 3 mL，EDTAK2抗凝。DNA的提取按照QIAamp血液DNA纯化Mini试剂盒说明书进行，并置于20 的条件下保存待测，检测试剂盒由上海投景生命科技股份有限公司生产。共检测AZFa、AZFb、AZFc三 个 区 域 的6个 序 列：sY84、sY86、sY127、sY134、sY254、sY255。同时，设置男性性别决定基因（SRY）和编码锌指蛋白基因（ZFY）两个内对照基因。PCR扩增反应条件为：第一阶段5
12、0，2 min；第二阶段95，5 min；第三阶段95，15 s，60，30 s，72，30 s，进行38个循环；第四阶段72，5 min。收集第三阶段60 的FAMVICROXCy5信号，并在FAM通道结果显示为典型S型扩增曲线且CT32时，进行结果判读。14统计学方法 使用SPSS 220统计软件处理数据。计量资料以x s表示，采用t检验；计数资料以n（）表示，采用2检验或秩和检验。P 005为差异具有统计学意义。2结果21四组研究对象的Y染色体微缺失情况比较无精症组和严重少精症组的Y染色体微缺失发生率均显著高于正常对照组，差异有统计学意义（2 30629、35932，均P 0001）。在
13、入组的研究对象中，AZFc位点缺失81例（49），AZFab位点缺失15例（09），AZFa位点缺失11例（07），AZFabc位点缺失6例（04），AZFb位点缺失5例（03），其中AZFc位点缺失在男性不育中占比最高，为49。见表1。表1四组研究对象Y染色体微缺失情况比较 n（）22 Y染色体微缺失患者的染色体核型分析在118例Y染色体 微 缺 失 患 者 中，共 有25例 染 色 体 核 型 异 常，发 生 率 为212，其中以47,XXY核型的占比最高，为85（10118），其 次 为46,XY(大Y)、46,XY(小Y)、46,XY,1qh，分 别 为33、25、25。见表2。表2
14、Y染色体微缺失患者的染色体核型分析3讨论近年来，随着新兴男性学科和遗传学的快速发展，男性无精症或少精症逐渐受到了临床医学的重视。有研究4显示，普通人群Y染色体微缺失的发生率为14 000，但在不育男性群体中的发生率会明显升高，已成为了导致男性不育的第二大因素。目前已经知道Y染色体微缺失是男性不育的主要诱因，但其具体缺失机制尚未达成统一共识。AZFa、AZFb、AZFc是AZF的3个独立区域，AZFa区域缺失会导致精子形成受阻；AZFb区域缺失则会通过阻断精子发育，使其停止在减数分裂前中期，造成精子生成障碍；AZFc缺失则会影响睾丸生精过程57。本研究结果显示，在入组的研究对象中，共有118例患
15、者发生Y染色体微缺失，发生率为71，低于洛阳地区的1012，但与广东清远（61）、贵州（713）、新疆（6）等地的缺失率8相近，表明AZF基因的缺失率存在地域性差异。AZFc位 点 缺 失81例（49），AZFab位 点 缺 失15例（09），AZFa位点缺失11例（07），提示AZFc位点缺失是Y染色体微缺失的主要类型。另外，无精症组和严重少精症组的Y染色体微缺失发生率均显著高于正常对照组（P 005），表明Y染色体微缺失与男性无精症或少精症密切相关。通常而言，染色体核型异常可导致无精症，但染色体核型异常与Y染色体微缺失之间是否存在联系尚无报道明确阐述。本研究结果显示，在118例Y染色体微缺
16、失患者中，共有25例染色体核型异常，发生率为212，这提示对于无精症或少精症患者，应当同时进行遗传学分析和Y染色体微缺失检测。综上所述，AZF基因在男性的精子生成过程中有着主导作用，不同区域的缺失会导致精液数量、活力的异常，进而影响生育。Y染色体微缺失检测是男性少精症或无精症等的首选临床检测项目，对男性不育的诊断有重要的指导价值。参考文献1马科,周燕,董弘,等.男性无精症或少精症患者细胞遗传学及Y染色体微缺失分析J.包头医学院学报,2020,36(3):12-13,25.2刘雅峰,高勇,钟依平,等.广州地区无精子症和严重少精子症者Y染色体微缺失的筛查分析J.中国优生与遗传杂志,2016,24(8):27-286.3陈振文,谷龙杰.精液分析标准化和精液质量评估WHO人类精液检查与处理实验室手册(第5版)出版J.中国计划生育学杂志,2012,20(1):58-62.4刘晓红,闫丽盈,李蓉,乔杰.Y染色体微缺失与辅助生殖技术关系的研究进展J.生殖与避孕,2013,33(1):42-47,62.5汪萍,宛传丹,胡卫华,等.Y染色体AZFc区域DAZ基因拷贝类型与生精障碍相关性研究J.中华男科学
