1、导意义。参考文献曾心怡，陈树和，石振拓，等.灯盏花素提取工艺影响因素研究.湖北中医杂志，（）：.葛月宾，尚莹莹，黄琳，等.灯盏花素提取纯化工艺及其片剂的制备.中南民族大学学报（自然科学版），（）：.王国栋，张立庆，李振兴，等.灯盏花素提取技术及其质量控制研究进展.特产研究，（）：.楼云雁，石森林，葛卫红，等.正交试验法优选灯盏花素的提取工艺.浙江中医杂志，（）：.胡倩，戴霖霖，王玲，等.灯盏花素的提取与分离工艺优化研究.化学与生物工程，（）：.田帅华，李钦.灯盏细辛中野黄芩苷提取纯化工艺研究.中成药，（）：.李莉，周卫涛，李峰.正交试验法优选黄芩茎叶中野黄芩苷提取工艺研究.世界最新医学信息文摘
2、，（）：.李雨芹，宋春江.奥扎格雷钠联合灯盏花素注射液治疗急性脑梗死的 分析.中医药导报，（）：.朱新星，申圣春.辨证用灯盏花素治疗急性脑梗死 例临床观察.中医药导报，：.董丽，孙士波，孙曙光.灯盏花乙素抗氧化应激机制在防治心脑血管疾病中的研究进展.昆明医科大学学报，（）：.朱君荣，李云曼，方伟蓉.灯盏乙素对 细胞拟缺血性损伤的保护作用研究.中国药房，（）：.刘畅.灯盏花乙素对脑缺血神经元的保护作用及机制研究.昆明：昆明医科大学硕士学位论文，.葛文秀，罗云，谢学恒，等.灯盏花乙素药理作用机制研究进展.中国实验方剂学杂志，（）：.孟令成，张瑜.灯盏花素对不稳定型心绞痛患者血清 及 的影响.中医药
3、导报，：.李梦娇，原阳，孙文社，等.基于代谢组学的灯盏花素抗阿霉素心脏毒性作用机制研究.中草药，（）：.赵君，张允岭，支英杰，等.灯盏花素注射剂治疗急性脑梗死有效性和安全性的随机对照试验系统评价和 分析.中医杂志，（）：.，.，（）：.朱邦胜，孙洪胜，蔡明.黄芩茎叶中野黄芩苷的提取工艺研究.中医药临床杂志，（）：.，.（）（）（）.，（）：.陈莉，屠康，王海，等.采用响应曲面法对采后红富士苹果热处理条件的优化.农业工程学报，（）：.徐媛，王鲁峰，徐晓云，等.响应曲面法优化红葡萄柚番茄红素的提取工艺.食品科学，（）：.程水明，曾霞，周国钰，等.响应面法优化红肉火龙果果皮中花青素提取工艺.广东石油
4、化工学院学报，（）：.克立硼罗软膏体外释放特性研究梁 逸，赵雅兰，马雪儿，韩冰晶，盛 平，张 梁，张春凤（中国药科大学中药学院，南京）摘要：目的 建立克立硼罗含量测定方法及软膏体外释放方法，为克立硼罗软膏一致性评价提供参考依据。方法 采用 法测定克立硼罗含量，以改良 扩散池法研究软膏体外释放特性，以优选的接收介质、人工膜、上药量和转速等条件对市售及自研克立硼罗软膏进行体外释放特性比较。结果 接收介质选择 .磷酸盐丙三醇（），人工膜选择.混合纤维素膜，上药量选择 ，转速选择 ，建立体外释放方法，计算得市售与自研软膏释放速率分别为（.）和（.）（），两者释药行为符合 模型。结论 含量测定方法专属性
5、强，精密度良好，适用于克立硼罗含量测定，市售与自研克立硼罗软膏的释放速率接近，体外释放特性可视为等效。关键词：克立硼罗软膏；体外释放；高效液相色谱法；扩散池法中图分类号：.文献标识码：文章编号：（）作者简介：梁 逸，女（）。学历：在读硕士研究生。主要从事制剂研究。通讯作者：张春凤，女（）。职称：教授，博士生导师。研究方向：中药新药创制研究。，（，）：海峡药学 年 第 卷 第 期 ，.（），.（），.，.（.）（.）（），.：；特应性皮炎（，），也被称为特应性湿疹或遗传过敏性皮炎，已成为临床上严重影响病人生活质量的慢性炎症皮肤病之一。经研究表明，非甾体磷酸二酯酶（）是一种环磷酸腺苷（）特异性磷酸
6、二酯酶，是促炎细胞因子产生的关键细胞内酶，在各种免疫细胞中表达，参与多种自身免疫性疾病的发病机制，是 的治疗新靶点之一。克立硼罗（），作为一种小分子的非激素类药物，是第一个被 批准用于治疗轻度至中度 的 抑制剂，可以有效渗透皮肤屏障，实现局部给药。同时，由于其软膏在保证患者舒适度的同时，具有可以长期应用以及可应用于特殊部位的优势，是目前 患者的首选疗法，打破了外用非激素抗炎领域没有新产品的现状，具有划时代意义。克立硼罗软膏原研制剂疗效显著，但其高昂的价格给病患带来不小的经济负担。鉴于其专利即将到期，许多企业开始进行仿制药研究，以期降低药物费用支出并提高药物的普及性。体外释放特性研究是外用半固体
7、制剂质量研究的关键项目之一，也是药品质量一致性评价的重要组成部分。因此，本文围绕克立硼罗软膏体外释放特性研究展开，。研究软膏等半固体制剂体外释放特性的实验装置包括扩散池、流池及动态浸没池，而 扩散池（实验装置见图）操作简便且重现性较好。本文采用 扩散池法优选克立硼罗软膏体外释放试验适宜的接收介质、人工膜、上药量及转速，建立具有区分力的体外释放方法，为克立硼罗软膏一致性评价提供依据，并根据 体外释放指导原则对市售软膏和自研软膏进行体外释放试验，研究比较两制剂的体外释放特性。材料与方法.药品、试剂与仪器 型透皮扩散试验仪（上海锴凯科技贸易有限公司）；型高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司，检测器）；
8、型万分之一电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。克立硼罗对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号：）；市售克立硼罗原研制剂（，批号：）；甲醇（色谱级，江苏汉邦科技有限公司，批号：）；其余试剂均为分析级。.混合纤维素膜（上海市新亚净化器件厂）；.有机尼龙膜（上海市新亚净化器件厂）；.聚四氟乙烯膜（新星）；.聚醚砜膜（新星）。图 改良型 扩散池释放试验装置示意图.研究方法.色谱条件：色谱柱为 键合硅胶柱（.，）；流动相为甲醇水（）；流速.；柱温 ；检测波长 ；进样量 ；运行时间为 。.扩散池条件：释放接触面积为.，接收池体积为 ；接收介质经脱气处理，现配现用，以人工膜恰好与液面接触为好；药物尽量
9、涂抹均匀；温度为（.）；磁力搅拌器不断搅拌接收介质；取样时间点为、；取样 次 ，同时补充等量同温度空白接收介质。.溶液的制备.对照品溶液的配制：精密称取克立硼罗对照品，加甲醇溶解制备得到质量浓度为.的对照品溶液，并进行倍半稀释，得到质量浓度为.、.、.、.、.、.的系列对照品溶液。.供试品溶液的配制：精密称取克立硼罗原料药，加 .甲醇溶解制备得到质量浓度为.的供试品溶液。.空白基质溶液的配制：精密称取空白基质，加甲醇溶解得到空白基质溶液。结果.专属性试验 取克立硼罗对照品溶液、原料药供试品溶液以及空白基质甲醇溶液，有机系.微孔滤膜过滤，按“.”项下条件进行液相分析，记录色谱图，结果见图，表明空
10、白基质对克立硼罗的测定无影响。图 高效液相色谱图：空白基质；：对照品；：原料药.线性关系考察试验取不同质量浓度的系列对照品溶液，有机系.微孔滤膜过滤，按“.”项下条件进行液相分析。以对照品峰面积为纵坐标（），质量浓度为横坐标（），绘制标准曲线，计算并得到克立硼罗线性回归方程为：.，相关系数 .，结果表明克立硼罗在.浓度范围内线性良好。.精密度考察试验 取同一供试品溶液，按“.”项下条件连续进样 次进行液相分析，为.，结果表明仪器精密度良好。.稳定性考察试验同一份供试品溶液，常温下静置，分别在、时间点测定，值为.，结果表明在实验室条件下供试品溶液在 内具有良好的稳定性。.加样回收率考察试验取已知
11、克立硼罗含量的供试品溶液 份，分别准确加入克立硼罗对照品溶液（.），按“.”项下条件进行液相测定，计算回收率。组克立硼罗加样回收率平均值为.，值为.，结果表明所建方法准确度良好。.体外释放方法的建立.接收介质的选择：分别用含不同助溶剂（乙醇、丙二醇、丙三醇）的生理盐水、.磷酸缓冲盐、.磷酸缓冲盐、.磷酸缓冲盐溶液配制克立硼罗原料药的饱和溶液，置于 水浴恒温振荡器中振荡 ，测定峰面积并进行比较。结果见表，克立硼罗在 .磷酸盐丙三醇（）接收介质中的峰面积最大，为了满足漏槽条件（药物在接收介质中的溶解度为药量的 倍），药物在接收介质中的溶解度应尽可能大，故选择其作为后续实验的接收介质。表 不同接收介
12、质的克立硼罗饱和溶液峰面积接收介质助溶剂克立硼罗饱和溶液峰面积乙醇丙二醇 丙三醇氯化钠.磷酸盐.磷酸盐.磷酸盐.人工膜的选择：采用改良型 扩散池法，分别将不同的人工膜以马蹄夹固定于接收池和给药池之间，扩散池条件设置均同“.”项下。接收取样液过.有机微孔滤膜，按“.”项下条件进行液相分析，计算克立硼罗累积释放量，以累计释放率对时间作图。结果见图，聚四氟乙烯膜对软膏中的克立硼罗释放具有明显阻滞性，而混合纤维素膜、有机尼龙膜、聚醚砜膜对克立硼罗的释放影响差别不大。图 不同人工膜条件下克立硼罗的累积释放曲线综合考虑材料的易得性与经济性，初步选择.混合纤维素膜进行惰性考察，将人工膜浸没在 浓度为总上药量
13、的接收介质中，制备 份；作为对照，相同的接收介质不浸泡人工膜，制备 份，于（.）水浴下放置，分别测定并记录，结果见表。浸没人工膜溶液平均浓度相对于对照溶液平均浓度的回收率为.，在（）范围内，即.混合纤维素膜惰性符合要求，故选择其作为后续实验的人工膜。表 人工膜惰性考察结果（）组别峰面积浓度（）（）对照溶液.浸没膜溶液.上药量的选择：保持其他释放条件一致，分别于人工膜上涂抹药物量 、，不同时间点接收取样液过.有机微孔滤膜，按“.”项下条件进行液相分析，计算相关释放参数，结果见下表。综合考虑最终累积释放率与释放速率，选择上药量 进行后续实验。海峡药学 年 第 卷 第 期表 不同上药量体外释放相关参
14、数（，）上药量（）相关系数 最终释放量（）最终释放率（）释放速率（）.转速的选择：保持其他释放条件一致，分别设置磁力搅拌器的转速为 、，不同时间点接收取样液过.有机微孔滤膜，按“.”项下条件进行液相分析，计算相关释放参数，结果见下表。综合考虑最终累积释放率与释放速率，选择转速 进行后续实验。表 不同转速体外释放相关参数（，）转速（）相关系数 最终释放量（）最终释放率（）释放速率（）.体外释放方法验证取高、中、低（含量分别为，）规格克立硼罗软膏进行体外释放实验，设定上述优选实验条件，不同规格制剂体外释放特性见下表。中规格制剂释放速率低于高规格制剂，两者 置信区间比率为.；中规格制剂释放速率高于低
15、规格制剂，两者置信区间比率为.；在 规定的 .范围外，说明所建立的体外释放方法灵敏度良好，选择性符合要求，具有区分力。表 不同规格克立硼罗软膏体外释放相关参数（，）药物含量相关系数 累积释放量（）累积释放率（）释放速率（）低（）.中（）.高（）.表 不同来源克立硼罗软膏线性拟合结果（，）类别拟合方程相关系数释放速率（）市售软膏.自研软膏.图 不同来源克立硼罗软膏累积释放量随时间平方根变化特性曲线（）.克立硼罗软膏体外释放特性研究采用.混合纤维素膜组装扩散池，取自制和市售的克立硼罗软膏 分别均匀涂抹于给药池一侧，并于接收池中加入经脱气处理的 .磷酸盐异丙醇（），转速设置为，按“.”项下条件进行体
16、外释放实验，按“.”项下条件进行液相分析，计算克立硼罗累积释放量，以累积释放量对时间平方根作图，线性拟合得到释放速率。结果见下表 及图，市售软膏和自制软膏线性回归相关系数均接近，符合 药物释放模型，且两者释放速率比值的 置信区间在 一致性规定的 .范围内，二者体外释放特性可视为等效。结论本文首先建立了克立硼罗高效液相色谱含量测定方法，流动相为甲醇水（），方法简便，有利于后续体外释放方法建立工作的开展。体外释放方法是能够表示局部外用制剂特性的标准方法之一，本研究以 .磷酸盐丙三醇（）为接收介质，.混合纤维素膜为人工膜，在 内取样 次，选择上药量为，磁力搅拌器转速为，建立了克立硼罗软膏体外释放方法，并对市售及自研克立硼罗软膏的体外释放行为进行了考察。结果显示两者释放速率接近，释放过程符合 释药模型，且符合 一致性规定，即自研软膏的体外释放特性可视为与市售软膏等效，为克立硼罗软膏的进一步开发奠定基础。参考文献 ，.，（）：，.，（）：，.：.，（）：，.，（）：，.：.，（）：，.：.，（）：，.，（）（）.，（）：罗婷婷，庾莉菊，宁保明，等.外用半固体制剂质量研究与体外评价技术进展.药物分
