1、22现代检验医学杂志第 38 卷第 1 期2023 年 1 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.1,Jan.2023结直肠癌患者血清外泌体与组织中 KRAS，BRAF，NRAS和 PIK3CA 基因突变检测及临床意义的比较靳杨1，姜利琼2，房烨1，曾燕兰1，何毅1，边革元1(1.中国人民解放军联勤保障部队第九二医院重症医学科,昆明 650032；2.云南省阜外心血管病医院健康管理中心，昆明 650102)摘要：目的检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者血清外泌体 KRAS，BRAF，NRAS 和 PIK3CA 相关基因位点的突变，分析其与癌组织基因突变的一
2、致性及其可能的影响因素。方法2019 年 2 月 2021 年 1 月中国人民解放军联勤保障部队第九二医院 100 例结直肠癌患者作为研究对象。提取患者血清外泌体，并用蛋白免疫印迹（Western blot，WB）法检测外泌体标志物 CD63 和 TSG101 的蛋白表达；聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）检测血清外泌体及手术切除的癌组织中 KRAS，BRAF，NRAS 和 PIK3CA 基因突变情况，Kappa 一致性检验分析血清外泌体突变与组织突变的一致性，Logistic 单因素回归分析影响一致性的因素。结果癌症基因组图谱（the cancer
3、genome atlas，TCGA）数据显示，KRAS，BRAF，NRAS和PIK3CA的结直肠癌突变率分别为35%96%，5%15%，5%30%和 18%36%，且 KRAS 和 BRAF 的突变与结直肠癌患者的低存活率有关。血清外泌体中 KRAS，BRAF，NRAS 和PIK3CA 的突变率分别为 94.00%，11.00%，17.00%和 35.00%；结直肠癌组织 KRAS，BRAF，NRAS 和 PIK3CA 的突变率分别为 34.00%，5.00%，6.00%和 16.00%；血清外泌体中 KRAS，BRAF，NRAS 和 PIK3CA 的突变率均高于组织，差异有统计学意义（2=1
4、01.027 256.250，均 P 0.05）。血清外泌体与组织中 KRAS 突变的一致率为 40.00%（Kappa值=0.064，P0.05），BRAF 突变的一致率为 99.00%（Kappa 值=0.599，P0.05），NRAS 突变的一致率为 89.00%（Kappa 值=0.475，P0.05），KRAS 突变的一致率为 81.00%（Kappa 值=0.523，P0.05）。ECOG 评分、转移、临床分期是影响外泌体和组织 KRAS，BRAF，NRAS 和 PIK3CA 的突变检测一致性的因素。结论结直肠癌患者血清外泌体 KRAS，BRAF，NRAS 和 PIK3CA 的突变
5、率高于组织，二者 BRAF，NRAS 和 PIK3CA 的一致性中等，为外泌体的基因检测指导临床靶向治疗提供参考。关键词：结直肠癌；血清外泌体；基因突变中图分类号：R735.3；R730.43文献标识码：A文章编号:1671-7414（2023）01-022-05doi:10.3969/j.issn.1671-7414.2023.01.005Comparison of KRAS,BRAF,NRAS and PIK3CA Gene Mutations in Serum Exosomes and Tissues of Patients with Colorectal Cancer and Thei
6、r Clinical SignificanceJIN Yang1，JIANG Li-qiong2，FANG Ye1，ZENG Yan-lan1，HE Yi1，BIAN Ge-yuan1（1.Department of Critical Care Medicine,No.920 Hospital,Joint Logistics Support Force of the Chinese Peoples Liberation Army,Kunming 650032,China；2.Health Management Center,Fuwai Cardiovascular Hospital of Yu
7、nnan Province,Kunming 650102,China）Abstract:ObjectiveTo detect the mutations loci in exosomes related gene of KRAS,BRAF,NRAS and PIK3CA in patients with colorectal cancer(CRC),and analyze the consistency with cancer tissue gene mutations and its possible influencing factors.MethodsFrom February 2019
8、 to January 2021,100 patients with colorectal cancer in the No.920 Hospital of the Joint Logistics Support Force of the Chinese Peoples Liberation Army were selected as the research object.The serum exosomes of patients were extracted,and the protein expressions of exosomes markers CD63 and TSG101 w
9、ere detected by Western blot(WB).Detection of KRAS,BRAF,NRAS and PIK3CA gene mutations in serum exosomes and surgically resected cancer tissues by polymerase chain reaction(PCR).Kappa consistency test was used to analyze the consistency between serum exosome mutations and tissue mutations.Logistic u
10、nivariate regression was used to analyze the factors affecting the consistency.Results基金项目：联勤保障部队第九二医院院内科技计划外泌体 DNA 检测指导大肠癌患者个体化治疗的可行性研究，课题编号：2019YGC01。作者简介：靳杨（1987-），女，博士，主治医师，研究方向：肿瘤精准医疗及危重症救治，E-mail:。通讯作者：边革元（1966-），男，本科，主任医师，研究方向：肿瘤危重症救治，E-mail:。23现代检验医学杂志第 38 卷第 1 期2023 年 1 月J Mod Lab Med,Vol.3
11、8,No.1,Jan.2023The cancer genome atlas(TCGA)data showed that the mutation rates of KRAS,BRAF,NRAS and PIK3CA were 35%96%，5%15%，5%30%and 18%36%，respectively,and the mutations of KRAS and BRAF were related to the low survival rate of colorectal cancer patients.The mutation rates of KRAS,BRAF,NRAS and
12、PIK3CA in serum exosomes were 94.00%,11.00%,17.00%and 35.00%respectively.The mutation rates of KRAS,BRAF,NRAS and PIK3CA in tissues were 34.00%,5.00%,6.00%and 16.00%respectively.The results of tissue gene testing were provided by the clinical pathology laboratory，the mutation rates of KRAS,BRAF,NRAS
13、 and PIK3CA in serum exosomes were higher than those in tissues,and the differences were statistically significant(2=101.027 256.250，all P 0.05),BRAF mutation was 99.00%(Kappa value=0.599,P0.05),NRAS mutation was 89.00%(Kappa value=0.475,P0.05),and KRAS mutation was 81.00%(Kappa value=0.523,P0.05).T
14、he consistency of ECOG score,metastasis and staging of patients is high.ConclusionThe mutation rates of serum exosomes KRAS,BRAF,NRAS and PIK3CA in colorectal cancer patients were higher than those in tissues,and the consistency of BRAF,NRAS and PIK3CA was moderate,which may provide a reference for
15、exosomes gene detection to guide clinical targeted therapy.Keywords:colorectal cancer；serum exosomes；gene mutation结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是消化系统最常见的恶性肿瘤，占所有癌症死亡患者的 10%，约 25%的患者在临床确诊时已至晚期，失去了手术的最佳时机1-2。如何针对个体制定靶向药的用药方案，成为延长患者存活时间的关键问题。目前，组织病理学检测是癌症诊断、治疗的金标准，也是患者个体化治疗的前提。由于组织学检测的局限性，临床上迫切需要新的替代检测方法3
16、-4。KRAS，BRAF，NRAS 和 PIK3CA 基因的突变预示着表皮生长因子靶向药的脱靶，失去治疗效果5-8。血清外泌体具有取材方便、丰富、稳定、不受时间限制、易保存等优点，已被研究证实结直肠癌组织KRAS，BRAF，NRAS 和 PIK3CA 基因突变具有临床诊断、预后价值9。但结直肠癌患者血清外泌体KRAS，BRAF，NRAS 和 PIK3CA 基因突变是否可替代组织学检测及影响血清外泌体基因突变的因素均需深入探究。1材料与方法1.1研究对象收集 2019 年 2 月 2021 年 1 月中国人民解放军联勤保障部队第九二医院接收的 100 例结直肠癌患者作为研究对象。纳入本次实验的 100 例患者情况：男性 55 例，女性 45 例，平均年龄 56 岁。美国东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group，ECOG)评分显示，其中 0 分患者 17 例，1 分患者 77 例，2 分患者 4 例，3 分以上患者 2 例。未发生转移患者 30 例，发生转移患者 70 例；其中 I IIA 患者 13 例，IIBC 期患者 19 例，IIIAC
