1、中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY AND CYTOCHEMISTRY第 31 卷第 6 期2022 年 12 月Vol.31.No.6December.2022收稿日期2022-06-05 修回日期2022-12-08基金项目2020 年河南省医药科技公关共建项目（LHJG20200931）作者简介马永，男（1982 年），回族，主治医师*通讯作者(To whom correspondence should be addressed)：决明子蒽醌苷通过 Nrf2/ARE 信号通路抑制冠心病大鼠心肌损伤马永1，赵
2、斌2，王明岗3，金爱莲4*（1商丘市第一人民医院全科医学科，商丘 476000；2商丘市第一人民医院检验科，商丘 476000；3商丘市第一人民医院心内科，商丘 476000；4商丘市第一人民医院心脏重症监护室，商丘 47600）摘要目的 从核因子 E2 相关因子 2（nuclear factor-E2-related factor 2，Nrf2）/抗氧化反应元件（antioxidant response element,ARE）信号通路角度，探究决明子蒽醌苷（anthraquinone glycoside from cassia,AQGC）对冠心病大鼠的心肌保护机制。方法 脂肪乳灌胃+注射维
3、生素 D3+注射垂体后叶素建立大鼠冠心病模型，随机分为模型组、AQGC 组、Nrf2 抑制剂组、AQGC+Nrf2 抑制剂组、缺氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1,HIF-1）抑制剂组，每组 10 只，另取 10 只手术组大鼠。超声心动图检测大鼠心功能；HE 及 TUNEL 法检测心肌病理损伤及凋亡状况；ELISA 法检测血清总胆固醇、心肌组织活性氧簇（ROS）、丙二醛（MDA）水平；免疫组织化学法检测 Nrf2 阳性表达；Western blot 法检测 Nrf2 及下游炎症、氧化应激、凋亡相关蛋白表达。结果 与正常对照组相比，模型组大鼠心肌组织炎症浸润、细
4、胞肥大、胞核变形等病理损伤严重，心功能下降、心肌组织细胞凋亡、氧化应激及炎症反应加重，Nrf2 下游抗氧化反应减弱、HIF-1/E1B 相互作用蛋白3（BNIP3）介导的促凋亡途径激活。抑制 Nrf2 活性，可进一步促进冠心病大鼠心肌组织炎症、氧化应激及凋亡反应，加重心肌组织损伤，进一步导致心功能下降。抑制 HIF-1 活性或 AQGC 干预治疗，均可促进 Nrf2 介导的抗炎、抗氧化应激及抗凋亡反应激活，缓解冠心病大鼠心肌损伤，改善心功能。AQGC 与 Nrf2 抑制剂联合应用后，AQGC 促进 Nrf2 活化、改善冠心病大鼠心肌组织损伤的作用被明显削弱。结论 AQGC 可通过促进 Nrf2
5、 活化，发挥抗炎、抗氧化应激及抗凋亡作用，来改善冠心病大鼠心肌损伤症状。关键词决明子蒽醌苷；冠心病；核因子 E2 相关因子 2；抗氧化反应元件中图分类号R541.1 文献标识码A DOI：10.16705/ki.1004-1850.2022.06.005Anthraquinone glycoside from cassia inhibits myocardial injury of the rats with coronary heart disease through Nrf2/ARE signal pathwayMa Yong1*,Zhao Bin2,Wang Minggang3,Jin
6、Ailian4*(1Department of General Medicine,Shangqiu First Peoples Hospital,Shangqiu 476000,China;2Department of laboratory,Shangqiu First Peoples Hospital,Shangqiu 476000,China;3Department of Cardiology,Shangqiu First Peoples Hospital,Shangqiu 476000,China;4Cardiovascular Care Unit(CCU),Shangqiu First
7、 Peoples Hospital,Shangqiu 476000,China)AbstractObjective From the aspect of nuclear factor E2-related factor 2(Nrf2)/antioxidant response element(ARE)sig-naling pathway,to explore the myocardial protective mechanism of anthraquinone glycoside from cassia(AQGC)on coronary heart disease rats.Methods
8、Gavage of fat emulsion+injection of Vitamin D3+injection of pituitrin was used to establish a rat model of coronary heart disease,and the model was randomly divided into model group,AQGC group,Nrf2 inhibitor group,AQGC+Nrf2 inhibitor group,hypoxia inducible factor-1(HIF-1)inhibitor group,with 10 rat
9、s in each group,and another 10 rats were used as the sham operation group.Echocardiography was used to detect rat heart function;HE and TUNEL methods were used to detect myocardi-al pathological damage and apoptosis;ELISA method was used to detect the serum total cholesterol,myocardial tissue reacti
10、ve oxygen species(ROS)and malondialdehyde(MDA)levels;immunohistochemical method was used to detect the positive expression of Nrf2;Western Blot method was used to detect the expression of Nrf2 and downstream inflammation,oxidative stress,and apoptosis related proteins.Results Compared with the norma
11、l control group,the rats in the model group had severe pathological damage such as inflam-中国组织化学与细胞化学杂志566第 31 卷冠心病是威胁人类生命健康的主要疾病之一。冠心病病情加重可导致心肌梗死、脑卒中等不良心血管事件的发生1。目前研究发现，炎症、氧化应激及心肌细胞凋亡与冠心病发生发展关系密切2。核因子E2相关因子2（nuclear factor-E2-related factor 2，Nrf2）激活后可进入细胞核，与抗氧化元件（anti-oxidant response element，ARE）
12、结合，影响缺氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1,HIF-1）及抗氧化、抗炎相关因子表达，来参与细胞应激性损伤及凋亡过程，而有望成为冠心病治疗的新靶点3,4。决 明 子 蒽 醌 苷（anthraquinone glycoside from cassia,AQGC）是决明子中的主要有效成分。近来临床报道发现，其对非酒精性脂肪肝病5、高血压及心肌损伤6患者有较好的疗效，由此提示AQGC也可能是缓解冠心病进一步发生发展的潜在药物。本研究建立大鼠冠心病模型，对此进行探究验证，以期为AQGC 的临床推广及应用，奠定实验及理论基础。材料及方法1 材料SD 大鼠 70 只，雄
13、性，健康，清洁级，体重200 220 g，购自安徽丰原药业股份有限公司，批号：SYXK（皖）2020-003。所有大鼠于本院动物房中饲养。本研究经本院动物伦理委员会批准同意，批号为 IACUC-01（20201017）。AQGC（批号：20200211004，陕西元朗生物工程有限公司）；脂肪乳（货号：rc1020，上海热创生物技术有限公司）；维生素 D3（货号：30056387，深圳海思安生物技术有限公司）；垂体后叶素（货号：TJ8199，杭州肽佳生物科技有限公司）；Nrf2 抑制剂-全反式维甲酸（ATRA）（货号：302-79-4，上海联硕生物科技有限公司）；缺氧诱导因子（hypoxia i
14、nducible factor,HIF-1）抑制剂-2-甲氧雌二醇（2ME2）（货号：T2220，南京赛泓瑞生物科技有限公司）；HE及 TUNEL 染色试剂盒（货号：SY2022，YT2205，北京伊塔生物科技有限公司）；总胆固醇 ELISA 试剂盒（货号：YS04424B，上海雅吉生物科技有限公司）、活性氧簇（ROS）ELISA 试剂盒（货号：R32034，上海圻明生物科技有限公司）、丙二醛（MDA）ELISA 试剂盒（货号：lisa385，上海广锐生物科技有限公司）；兔源 Nrf2（货号：ab31163）、谷胱甘肽 S-转移酶（GST）（货号：ab138491）、超氧化歧化酶 2（SOD2
15、）（货号：ab68155）、内脂素（visfatin）（货号：ab236873）、肿瘤坏死因子-（TNF-）（货号：ab109322）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）（货号：ab181095）、白细胞介素-18（IL-18）（货号：ab191860）、HIF-1（货号：ab179483）、E1B 相互作用蛋白 3（BNIP3）（货号：ab109362）、半胱天冬酶-1（Caspase-1）（ab179515）抗体和辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）标记的山羊抗兔 IgG 二抗（货号：ab6721）均购自英国 Abcam 公司。2 大鼠冠心病模型建立及分组
16、处理参照文献7方法，取大鼠每日腹腔注射60万单位/kg的维生素D3+灌胃10 mL/kg的脂肪乳，连续12 周，建立大鼠冠心病模型，造模结束前 3 d，每日腹腔注射 30 万单位/kg 垂体后叶素，共 3 次后，用心电图检测 PR 段基线 J 点位移，以 J 点变化幅度超过 0.1 mV，视为造模成功，共造模成功 50 只（10 只未成功），随机分为模型组、AQGC 组、Nrf2 抑制剂组、AQGC+Nrf2 抑制剂组和缺氧诱导因子（HIF-1）抑制剂组，每组 10 只；另取 10 只健康大鼠，mation infiltration,cell hypertrophy,and nuclear deformation,the decreased heart function,the apoptosis of myocardial tissue cells,increased oxidative stress and inflammation,the Nrf2 downstream antioxidant response was weakened,and the pro-apoptotic
