1、2023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023调查报告调查报告肉鸡生产链沙门氏菌污染情况调查与分析肉鸡生产链沙门氏菌污染情况调查与分析王玉燕，任士飞，张林吉，陈永亮，孙朋（徐州生物工程职业技术学院，江苏徐州221006）摘要：为了解肉鸡生产链各环节沙门氏菌污染情况，试验从江苏某产业链型农牧食品企业的养殖场、屠宰场、运输车辆、专营店采集样品540份，进行沙门氏菌分离鉴定、血清型及毒力基因检测。结果显示：该肉鸡生产链沙门氏菌检出率为7.22%（39/540），生产链各环节沙门氏菌污染程度依次为：养殖环节屠宰环节销售环节运输环节；共检出6种血清型，其中印第安纳沙
2、门氏菌和肠炎沙门氏菌为优势血清型，屠宰环节沙门氏菌血清型最丰富；沙门氏菌8个毒力基因在39个分离株均有检出，毒力岛基因mogA（SPI-1）、sopB（SPI-2）、araA（SPI-5）的携带率高于肠毒素基因stn、毒力质粒基因spvD、spvR、spvA及菌毛基因agfA。结果表明该肉鸡生产链各环节均存在沙门氏菌污染，其中养殖环节污染最严重，提示养殖场应重视对肉鸡和饲料中沙门氏菌的监测，屠宰环节和销售环节应加强对环境的消毒，以避免交叉污染。关键词：沙门氏菌；肉鸡；血清型；毒力基因中图分类号：S855.1；S831.4文献标识码：A文章编号：1004-6364（2023）02-77-06收稿
3、日期：2022-06-12；修回日期：2022-07-21基金项目：江苏高等学校自然科学研究项目（20KJB230009）；徐州市科技局项目（KC21297）；徐州市推动科技创新专项资金项目（KC20050）作者简介：王玉燕（1987-），女，硕士，讲师，主要从事动物性食品卫生检验研究，E-mail：doi：10.16372/j.issn.1004-6364.2023.02.013Investigation and Analysis of Salmonella Contamination inBroiler Production ChainWANG Yuyan,REN Shifei,ZHANG
4、 Linji,CHEN Yongliang,SUN Peng（Xuzhou Vocational College of Bioengineering,Xuzhou,Jiangsu 221006）Abstract：To explore the contamination of Salmonella in production chain of broilers,540 samples were collected from thefarms,slaughter houses,transport vehicles and franchised stores subordinate to an in
5、dustrial chain type agricultural and animalhusbandry food enterprise in Jiangsu province.The samples were used for islation and identification of Salmonella,and detectionof serotype and virulence genes of the isolates.The results showed that the detection rate of Salmonella in the broiler production
6、chain was 7.22%(39/540).The severity of Salmonella pollution in each link of the broiler production chain was as follows:breeding linkslaughter linksales linktransportation link;Six serotypes were detected in Salmonella isolates,and Salmonella Indianaand Salmonella Enteritidis were the dominant sero
7、types,and the most abundant serotypes were found in slaughter link;Eight virulence genes were detected in 39 isolate of Salmonella.The carrying rates of virulence island genes mogA(SPI-1),sopB(SPI-2)and araA(SPI-5)were higher than those of enterotoxin gene stn,virulence plasmid genes spvD,spvR,spvA
8、and fimbriae gene agfA.The overall results suggested that there was Salmonella pollution in all links of broiler production chain,and the pollution inthe breeding link was the most serious,which should be monitored in broiler and feed in the breeding link,and environment disinfection should be stren
9、gthened to avoid cross-contamination in slaughter and sales links.Key words：Salmonella;broiler;serotype;virulence gene-772023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023调查报告调查报告沙门氏菌（Salmonella）是一类可经多种传播途径感染人和动物的革兰氏阴性兼性胞内菌，也是导致中国大陆微生物性致病因子引起的食源性疾病事件中的主要致病菌1。沙门氏菌污染以肉类食品为主，是导致全世界人类胃肠炎的主要食源性途径之一2。鸡肉在生产、加工和销售过
10、程中极易受到沙门氏菌的污染3-4。因此，加强禽源食品生产链中沙门氏菌的监测和防控，对提高食品安全、加强公共卫生安全具有重要意义5。本研究以江苏某全产业链型农牧食品企业为研究对象，从养殖、屠宰、运输和销售4个环节采集样品，分析肉鸡生产过程中各环节沙门氏菌污染情况，为降低鸡肉中沙门氏菌的污染、减少食源性沙门氏菌病的发生提供参考。1材料与方法1.1主要试剂缓冲蛋白胨水（BPW）、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、沙门氏菌显色培养基、沙门氏菌生化鉴定条等购自青岛海博生物技术有限公司；沙门氏菌属诊断血清购自宁波天润生物药业有限公司；DL1000 DNA Maker、2Taq
11、Master Mix购自宝生物工程（大连）有限公司；质控菌大肠杆菌ATCC 25922由徐州市动物疫病工程技术研究中心提供；细菌基因组提取试剂盒购自北京天根生化科技有限公司。1.2样品采集及处理2020年10月2021年9月，对江苏某全产业链型农牧食品企业的肉鸡养殖场、屠宰场、运输车辆、专营店采集样品（见表1）。肉鸡养殖场养殖品种均为白羽肉鸡，地面平养至7周，直接送到屠宰场进行屠宰加工，加工后的产品通过冷链运输至专营店进行销售。样品的采样、包装、标记、保存和运输按 NY/T 32272018 屠宰企业畜禽及其产品抽样操作规范6要求操作。表1样品采集信息采样时间2020年1012月2021年13
12、月2021年46月2021年79月合计采样环节养殖环节屠宰环节运输环节销售环节养殖环节屠宰环节运输环节销售环节养殖环节屠宰环节运输环节销售环节养殖环节屠宰环节运输环节销售环节样品种类健康肉鸡（4周龄以上）泄殖腔拭子、饲料、饮水屠宰各环节（脱毛后、去内脏后、分割后）胴体拭子、屠宰环境样品（刀具和操作台拭子、烫毛水、地面拭子）车厢壁、鸡肉产品拭子专营店胴体、刀具案板拭子健康肉鸡（4周龄以上）泄殖腔拭子、饲料、饮水屠宰各环节（脱毛后、去内脏后、分割后）胴体拭子、屠宰环境样品（刀具和操作台拭子、烫毛水、地面拭子）车厢壁、鸡肉产品拭子专营店胴体、刀具案板拭子健康肉鸡（4周龄以上）泄殖腔拭子、饲料、饮水屠
13、宰各环节（脱毛后、去内脏后、分割后）胴体拭子、屠宰环境样品（刀具和操作台拭子、烫毛水、地面拭子）车厢壁、鸡肉产品拭子专营店胴体、刀具案板拭子健康肉鸡（4周龄以上）泄殖腔拭子、饲料、饮水屠宰各环节（脱毛后、去内脏后、分割后）胴体拭子、屠宰环境样品（刀具和操作台拭子、烫毛水、地面拭子）车厢壁、鸡肉产品拭子专营店胴体、刀具案板拭子采样数量/份258015152580151525801515258015155401.3沙门氏菌分离鉴定参照 GB 4789.42016 食品微生物学检验沙门氏菌检验7进行沙门氏菌分离鉴定。拭子样品、水样直接置于含有5 mL无菌BPW的离心管中，37 预增菌12 h。饲料样
14、品取25 g置于含有225 mL无菌BPW的均质袋中，匀质后37 预增菌12 h。吸取1 mL预增菌液，分别接种于TTB和SC中增菌培养24 h。挑取增菌液接种于沙门氏菌属显色培养基，37 培养24 h。挑取可疑菌落划线接种到营养琼脂平板上，36 培养12 h，按照沙门氏菌生化鉴定条说明书进行生化鉴定，同时设立阴性对照。采用30%甘油将鉴定的分离株于-80 保存。1.4血清型学检测按照沙门氏菌属诊断血清（60种）试剂盒说明书对沙门氏菌分离株进行AF多价血清型进行鉴定。1.5毒力基因检测参考文献8-14设计沙门氏菌的毒力质粒基因spvA、spvD、spvR及毒力岛基因mogA（SPI-1）、so
15、pB-782023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023（SPI-）、araA（SPI-），肠毒素基因stn，菌毛基因agfA的引物（见表2），引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。采用细菌基因组提取试剂盒提取沙门氏菌分离株的DNA，用于沙门氏菌毒力基因检测。PCR反应体系20 L：2Taq PCRMasterMix 10 L，ddH2O 8 L，上、下 游 引 物（20 mol/L）各0.5 L，DNA模板1 L。PCR反应程序：95 5 min；94 30 s，52/66.5/55/59/54 退火30 s，72 1 min，进行30个循环；72
16、 10 min（见表2）。PCR产物采用1.5%琼脂糖凝胶电泳进行检测。表2沙门氏菌毒力基因引物基因mogA（SPI-1）sopB（SPI-）araA（SPI-）spvAspvDspvRstnagfA位置染色体毒力岛染色体毒力岛染色体毒力岛毒力质粒毒力质粒毒力质粒肠毒素菌毛引物序列（53）ATTGGCTTAGTTTCTATCTCCGCCTTCCAGCGTTTCTTTGACGGACCGGCCAGCAACAAAACAAGAAGAAGTAGTGATGCCCGTTATGCGTGAGTGTATTAATGGAAGGCGTTGAATCTGGAGCTGCTTTGGTCCTCAACGCTAACTGTCGGGCAAAGGGACAATGGCACGAACCTCCCCTGATGATGAGAAGTACAGTGGGATTAGACAGCAGGAAATCGGACCTACGGTAACATCGCCAGCCCTTGGAAGCAGCGCCTGTAAAATCGCTGACTCAGGTGCTGTTGAGTGTTGTTGCCAAAACCAACCTTGTTGCCAAAACCAACCT产物大小/bp41922017043231647340
