1、医学理论与实践2023年第36卷第8期Vol.36，No.8，Apr2023J Med Theor PracSLP-2 和 ELK1 在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义*黑龙江省卫生健康委科研课题(20210101040041)。通信作者:郭梦凡高飞1，2郭梦凡2丁成龙2田爽1，2李舟21佳木斯大学，黑龙江省佳木斯市154002;2佳木斯大学附属第一医院摘要目的:目的:探讨 SLP-2 和 ELK1 在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及临床意义。方法:方法:选取 60 例 PTC 组织作为实验组，60 例癌旁组织作为对照组，应用免疫组织化学方法检测两组 SLP-2 和 ELK1 的表达率，并结
2、合临床病理特征进行相关性分析。结果:结果:SLP-2 和 ELK1 在癌组织中阳性表达率均高于癌旁组织;Spearman 相关性检验显示二者蛋白表达在 PTC 癌组织中呈正相关;二者表达均与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移及浸润程度等临床病理特征相关。结论:结论:SLP-2 和 ELK1 可能与甲状腺乳头状癌的发生、发展相关，可为甲状腺乳头状癌的诊断及治疗提供新依据及方向。关键词甲状腺乳头状癌SLP-2ELK1免疫组化临床病理特征中图分类号:736.1文献标识码:Adoi:10.19381/j.issn.1001-7585.2023.08.003Expression and Clinical S
3、ignificance of SLP-2 and ELK1 in Thyroid Papillary CarcinomaGAO Fei#，GUO Mengfan，DING Chenglong，et al.#Jiamusi University，Jiamusi City，Heilongjiang Province154002ABSTACT Objective:To investigate the expression and clinical significance of SLP-2 and ELK1 in thyroid papillary carci-noma(PTC)Methods:60
4、 cases of PTC tissues were selected as the experimental group and 60 cases of adjacent tissues asthe control group The expression rates of SLP-2 and ELK1 in the two groups were detected by immunohistochemical method，and the correlation analysis was carried out bases on clinocopathological characteri
5、stics esults:The positive expression ratesof SLP-2 and ELK1 in caner tissues were higher than those in adjacent tissues Spearman correlation test showed that two pro-teins were positively correlated in PTC cancer tissues Both expression were correlated with clinicopathologic features such astumor si
6、ze，clinical stage，lymph node metastasis and degree of invasion Conclusion:SLP-2 and ELK1 may be related to theoccurrence and development of thyroid papillary carcinoma，which can provide a new basis and direction for the diagnosis andtreatment of thyroid papillary carcinomaKEY WODSThyroid papillary c
7、arcinomaSLP-2ELK1ImmunohistochemistryClinicopathologic features甲状腺癌(Thyroid cancer，TC)作为内分泌系统肿瘤中最常见的恶性肿瘤，其中甲状腺乳头状癌(Pa-pillary thyroid carcinoma，PTC)是最常见的组织学类型，约占 85%。通过近年来的筛查及统计发现，PTC的发病率逐年攀升，随着现代医疗技术水平和人们保健意识的提高，尽管许多患者在病灶微小时期就已发现，经一系列治疗后预后较好，但仍有一些患者出现淋巴结转移、远处转移、治疗效果不佳及碘治疗的抵抗等情况，导致患者预后不佳1。因此探究 PTC 的
8、致病因素及致病机理，寻找新的诊断标志物，为 PTC 的诊断及治疗提供有效依据尤为重要。SLP-2 是较新的肿瘤相关因子，最初被认为是一种细胞质内蛋白或细胞质膜蛋白2，后被发现其也存在于线粒体内膜及 T 细胞细胞膜中3-4。在多种肿瘤中过表达，影响肿瘤的增殖、凋亡、迁移等过程。有研究表明 SLP-2 表达上调与患者生存期呈负相关，可作为评估患者预后的独立指标5-6。Ets 家族是细胞内最大的调控家族之一，家族大多数成员在人类重要的生理、病理过程中发挥调控作用7，ELK1 是 Ets 家族中重要成员之一，被发现在多种肿瘤中高表达，通过参与细胞的增殖、分化和凋亡，促进肿瘤发生及发展8-9。同时也被证
9、明可作为前列腺癌疾病复发的独立预测指标10。尽管二者在多种肿瘤中已有研究，但二者在甲状腺乳头状癌中研究较少。本实验通过检测 PTC 癌组织及其癌旁组织中 SLP-2 和 ELK1 的表达情况，分析二者与 PTC患者临床病理特征之间的关系，为 PTC 的临床诊断及治疗提供新的理论依据。1资料与方法1 1临床资料收集佳木斯大学附属第一医院2019 年 1 月2021 年 12 月术后经病理切片诊断为PTC 的病例，收集石蜡包埋组织 60 例。将癌组织设为实验组，癌旁组织设为对照组。对所有病例均进行临床病理信息收集。且患者无家族肿瘤病史、既往肿瘤病史，术前均未进行放疗或化疗。1 2主要试剂一抗 SL
10、P-2 多克隆抗体购自 Ab-cam 公司，ELK1 多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司;免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生9621J Med Theor PracVol.36，No.8，Apr20232023年第36卷第8期医学理论与实践物技术有限公司。1 3免疫组织化学方法检测标本用 10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，常规制片。切片脱蜡、水化处理，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，3%过氧化氢溶液阻断内源性过氧化物酶，高温高压修复 2 5min，山羊血清封闭，滴加一抗，恒温箱 37 2h，恢复室温，PBS 冲洗，滴加二抗室温孵育20min，PBS 冲洗，滴加二苯基联苯胺(DAB)显色，冲洗后
11、苏木染色，封片，光学显微镜下观察。1 4判读标准结果由两名中级及以上职称的病理医师双盲法阅片，计数差 10%以上重新计数，在200 倍镜视野下观察肿瘤细胞，以出现黄色或棕黄色颗粒为阳性表达。阳性细胞表达百分比评分:0分为5%、5%1 分25%、25%2 分50%、50%3 分75%、4 分 75%;染色强度评分:0 分(无着色或着色不清)、1 分(浅黄色)、2 分(棕黄色)、3 分(深褐色)。按阳性细胞表达百分比和染色强度评分的乘积即染色指数(SI)为最终结果的判定标准，SI 2 为阴性表达，SI2 为阳性表达11。1 5统计学方法二者免疫组化结果阳性表达率与患者临床病理特征之间的关系比较采用
12、 2检验及 Fisher 精确检验。二者阳性表达结果的相关性分析采用 Spearman 相关。以 P 0 05 表示差异有统计学意义。2结果2 1SLP-2 和 ELK1 在甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中的表达情况SLP-2 蛋白主要定位于细胞质，ELK1 蛋白定位于细胞核和细胞质(见图 1)。且二者在甲状腺乳头状癌中阳性表达率 78 3%(47/60)和 76 7%(46/60)均高于癌旁组织 13 3%(8/60)和 18 3%(11/60)，差异有统计学意义(2=51 055，P 0 05 和 2=40 936，P 0 05)。图 1SLP-2 和 ELK1 在 PTC 石蜡组织中的免疫
13、组化染色a、b.SLP-2 在 PTC 癌组织中阳性表达c.SLP-2 在癌旁组织中阴性表达d、e.ELK1 在 PTC 癌组织中阳性表达f.ELK1 在癌旁组织中阴性表达。400 倍2 2SLP-2 蛋白和 ELK1 蛋白在甲状腺乳头状癌中表达的相关性Spearman 相关性检验显示，SLP-2 蛋白和 ELK1 蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达呈正相关(r=0 284，P 0 05)。2 3SLP-2 蛋白和 ELK1 蛋白与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征的关系SLP-2 蛋白和 ELK1 蛋白阳性表达均与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移和浸润程度相关(均 P 0 05)，SLP-2 蛋白阳性表
14、达还与年龄相关(P 0 05)，而 ELK1 蛋白阳性表达与年龄无关(P 0.05)。SLP-2 蛋白和 ELK1 蛋白阳性表达均与性别、多发癌灶无关(P 0.05)。见表 1。表 1SLP-2 和 ELK1 与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征的相关性病理特征nSLP-2+2PELK1+2P性别男20155019607441640 1860756女403283010年龄55 岁20128594100221372 283019555 岁40355337肿瘤大小2cm3120117215000720115 29300212cm29272263临床分期+3524114716003023125 6330
15、018+25232232淋巴结转移是30273481200282735 9630015否3020101911浸润程度包膜内3221116525001121114 6730031包膜及外侧28262253多发癌灶是32239168501942570 0820775否282442173讨论大量研究表明，在 PTC 的发生发展中基因突变有多种，并且多种信号通路参与其中12-13，因此在PTC 的治疗方案选择和预后等方面存在很多不确定性，因此本实验通过研究 PTC 最常见的基因突变及相关通路，寻找新的生物标志物，为 PTC 的诊断及治疗提供新的思路及方向。丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAP
16、K)通路，特别是主通路 MAPK/EK 通路，参与多种肿瘤的发生发展14，也是 PTC 最常见的致癌机制。该信号通路主要存在于细胞膜受体与细胞核之间，主要功能是将细胞外信号转导到细胞内。而0721医学理论与实践2023年第36卷第8期Vol.36，No.8，Apr2023J Med Theor PracPTC 常见的 BAF、as、ALK 基因突变以及 ET/PTC 基因重排均可导致 MAPK 通路激活。PTC 中最常见的是 BAF 点突变，主要是密码子 600 位的缬氨酸变为谷氨酸(V600E)，其编码产物可直接激活MAPK/EK 通路，使 MEK1/2 和 EK1/2 及其下游因子逐级磷酸化，使甲状腺滤泡上皮细胞向甲状腺癌细胞增殖、转化，并通过作用于细胞外基质的相关因子 加 速 恶 化 和 转 移15。且 已 有 相 研 究 证 明BAFV600E 突变的存在与 PTC 患者较高的死亡率存在明显相关性16。SLP-2(Stomatin like protein-2)是 Stomatin 基因超家族的一员，基因定位于人类 9 号染色体的短臂上，与其他家族成员相比缺少共有的 N-端疏水
