1、2023年第51卷第4期（总第389期）HPLC-MS/MS 测定新疆驼乳粉中氯酸盐与高氯酸盐含量的不确定度评定韩瑨烜1，罗芸2，王传兴1，孙蕾1（1.新疆维吾尔自治区产品质量监督检验研究院，乌鲁木齐 830011；2.中华人民共和国乌鲁木齐地窝堡机场海关，乌鲁木齐 830011）摘要：通过对不确定度来源进行分析，构建了不确定度评定数学模型，并对影响不确定度的各个因素进行考察，计算各个分量的标准不确定度以及扩展不确定度，最终得出不确定度结果。当乳粉中氯酸盐含量为 10.1 g/kg 时，其扩展不确定度为 2.1 g/kg（k=2）；高氯酸盐含量为 20.1 g/kg 时，其扩展不确定度为 4.
2、2 g/kg（k=2）。测定结果的不确定度最主要来源于标准溶液的配制以及样品溶液的制备过程。本研究可为实验室对高效液相色谱-串联质谱法测定驼乳粉中氯酸盐与高氯酸盐的过程和结果进行有效质量控制提供参考。关键词：高效液相色谱-质谱/质谱；驼乳粉；氯酸盐；高氯酸盐；不确定度中图分类号：TS252.7文献标识码：A文章编号：1001-2230(2023)04-0052-07doi:10.19827/j.issn1001-2230.2023.04.009Evaluation of uncertainty in determination of chlchlorite and perchlorate in
3、infant formula by HPLC-MS/MSHAN Jinxuan1，LUO Yun2，WANG Chuanxing1，SUN Lei1(1.Xinjiang Uygur Autonomous Region product quality supervision and Inspection Institute，Urumqi 830011,China；2.Urumqi diwobao Airport Customs of the peoples Republic of China，Urumqi 830011,China)Abstract：Evaluating the uncerta
4、inty of chlorate and perchlorate determination in infant formula by High-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(HPLC-MS/MS).By the uncertainty source analysis,the mathematical model of assessment of uncertainty is established,and inspect the factors affecting uncertainty and calc
5、ulating the standard uncertainty of individual components.Finally,the expansion uncertainty isobtained.When the content of chlorate in the milk powder is 10.1 g/kg,its expansion uncertainty is 2.1 g/kg(k=2);the content of the perchlorate is 20.1 g/kg,its expansion uncertainty It was 4.2 g/kg(k=2).sh
6、owed that the uncertainty of the measurement results are primarily derivedfrom the preparation of standard solutions and the preparation process of the sample solution.This study can provide a reference for the laboratory tocarry out effective quality control of the process and results of the determ
7、ination of chlorate and perchlorate in infant formula by high performanceliquid chromatography-tandem mass spectrometry.Key words：HPLC-MS/MS；infant formula；chlorate；perchlorate；uncertainty收稿日期：2022-01-17基金项目：国家重点研发计划项目（2019YFC1606105）。作者简介：韩瑨烜（1990-），男，硕士，高级工程师，研究方向食品安全检测。通讯作者：孙蕾0引言高氯酸盐（Perchlorate）
8、是一类新型持久性环境污染物1，在烟花爆竹燃料中大量存在，残留在环境中的高氯酸盐可通过空气、水源等途径进入乳制品生产环境2。氯酸盐（Chlorate）作为生产环节用消毒剂在杀菌过程中的副产物很有可能在乳制品中存在残留3-5。残留在乳制品中的这两种物质进入人体可能会阻碍甲状腺吸收碘，且氯酸盐还能破坏红血球从而影响血液运输氧气的功能6-8。驼奶（Camel milk）被誉为“沙漠白金”，其营养成分接近母乳。新疆骆驼存栏量居全国前列，具有较好的驼奶产业基础，但新疆驼奶加工产业由于起步较晚，工艺还不成熟，生产过程也缺少相关标准规范，加之我国尚未制定驼乳粉中氯酸盐和高氯酸盐的限量标准，因此驼乳制品中氯酸盐
9、和高氯酸盐残留的风险性较大9。不确定度是指表征被测量值所处的量值范围，主要是用于评价测定结果准确程度的量化指标，测量不确定度的评定可以体现检测结果的可靠性，是食品检测中质量控制的重要内容10。本文依据 CNAS-GL06：2019 化学分析中不确定度的评估指南、JJF52Vol.51，No.4 2023(total 389)表 1 氯酸盐和高氯酸盐主要质谱参数化合物母离子(m/z)子离子(m/z)锥孔电压/V碰撞能量/eV氯酸根83.0，85.067.0*，69.05116高氯酸根99.0，101.083.0*，85.05117氯酸根内标89715116高氯酸根内标107895117注：*为定
10、量离子。1059.1-2012 测量不确定度评定与表示 等标准评定驼乳粉中氯酸盐与高氯酸盐测定的不确定度，为该项目检测过程中质量评价以及关键点控制提供参考11。1材料与方法1.1 材料与仪器氯酸盐(9942 g/mL 99.8%批号：1086464-1），o2si 公司；同位素内标氯酸盐-18O3(1982 g/mL 98%批号：054），EURL-SRM 公司；高氯酸盐(9944 g/mL99.90%批号：N2-CLOX670211），Inorganic 公司；同位素内标高氯酸盐-18O4(103 0.1 g/mL98%批号：S18096-01),IsoSciences 公司；甲醇(色谱纯)
11、,德国Merck 公司；实验用水为自制超纯水。高效液相 色 谱-质 谱 联 用 仪(XEVO TQ-SMICRO),美国 WATERS 公司；万分之一电子天平(CPA324S),德国赛多利斯股份有限公司；十万分之一电子天平(AX205),梅特勒-托利多仪器有限公司；高速冷冻离心机(Hettich 380R)；多管涡旋混匀仪,深圳逗点生物技术有限公司；型超声波清洗机(SB-800DT),宁波新芝生物科技股份有限公司；纯水仪(Milli-Q),美国 Millipore 公司；可调微量移液器（101000 L),艾本德中国有限公司；所有玻璃量器均为A 级。驼乳粉样品：实验室内部质控样品。1.2 方法
12、1.2.1 样品制备（1）提取。称取驼乳粉 2.0 g，置于 50 mL 离心管中，加入混合同位素内标工作液 150 L，再用 10 mL单标线吸量管(A 级)加入 10.0 mL 1%甲酸-甲醇溶液，涡旋振荡 5 min，10 000 r/min 常温离心 10 min，取上清液待净化。（2）净化。吸取约 3.0 mL 上清液，过 PRiME HLB固相萃取柱，收集流出液过 0.22 m 有机滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。1.2.2 加标样品制备准确称取 6 份空白乳粉样品(阴性样品)，每份用移液器加入 100 L 混合标准中间液，加标样品的处理步骤按 1.2.1 样品制备的步骤进行。1
13、.2.3 液相色谱条件色谱柱：Torus DEA（2.1 mm100 mm，1.7 m）；柱温：35；流动相 A：0.1%-甲酸水；流动相 B：甲醇；流速 0.45 mL/min；进样量：1 L；液相色谱洗脱程序：00.2 min，80%B；0.21 min，80%95%B；110 min，95%B；1010.1 min，95%80%B；10.115 min，80%B。1.2.4 质谱条件电喷雾(ESI)离子源；负离子扫描模式；多反应监测（MRM）；喷雾电压：3 000 V；去溶剂温度：500；气帘气压力：240 kPa；雾化器压力：350 kPa，见表 1。2测量数学模型2.1 数学模型的建
14、立将混合标准系列工作溶液放入高效液相色谱-质谱联用仪进行分析测试。以配制的工作溶液浓度（g/L）为横坐标，以工作液峰面积与其内标峰面积之比（响应值）为纵坐标，绘制标准工作曲线。计算公式为：X=cVf/m式中：X 为试样中待测组分的含量，g/kg；c 为从标准曲线上测得试液中待测组分的质量浓度，g/L；m 为试样质量，g；V 为试样提取液总体积，mL；f 为样品制备过程中的稀释倍数。2.2 不确定度来源分析不确定度来源分析如下。Inspection Methods测定方法532023年第51卷第4期（总第389期）表 2 样品重复性测定结果（n=6）样品序号称样量/m氯酸盐含量 X/（gkg-1
15、）高氯酸盐含量 X/（gkg-1）12.012 510.121 420.124 521.991 510.087 620.114 732.001 510.089 820.201 442.001 210.074 819.998 752.032 510.265 420.014 862.002 110.111 520.221 0平均值X-2.007 010.12520.113标准偏差 S0.014 20.070 80.092 03结果与分析3.1 分量计算3.1.1 样品测量重复性引入的相对不确定度 ur（X-样）按照样品处理方法，平行称取质控样品 6 份，样品重复性测量结果见表 2。根据公式 ur（
16、X-样）=SX-n，假设为均匀分布(k=3)；则：ur（X-样 氯酸盐）=0.070 810.125 16=0.002 85；ur（X-样 高氯酸盐）=0.092 020.1253=0.001 86。3.1.2 样品溶液制备引入的相对不确定度3.1.2.1 样品称量引入的相对不确定度 ur（W样）称取驼乳粉 2 g，天平校准证书说明天平最大允许误差 M=0.000 5 g，实际称量待测样品质量的平均值为 m=2.007 0 g，假设为均匀分布（k=3），则：u（W样）=0.000 53=0.000 288 g，ur（W样）=u（W样）m=0.000 2882.007=0.000 143。3.1.2.2 样品定容引入的相对不确定度 ur（V样）本实验定容溶剂由 10 mL 单标线吸量管（A 级）加入，样品定容引入的不确定度主要由器具的容量允许差 u（V容）及实验室温度波动 u（V温）引入。经查 JJG196-2006 常用玻璃量器，10 mL 单标线吸量管的容量允许差 M=0.020 mL，假设为均匀分布（k=3），则：u（V容）=0.0203=0.011 5 mL。取样时实验室温度 2
