1、 接收日期：2022-08-27 接受日期：2022-09-27 基金项目：全国中药资源普查项目(财社201939 号、财社201766 号)；中医药公益性行业科研专项(201407002)*通信作者。E-mail: 反相液相色谱法测定闽产千斤拔染料木苷及反相液相色谱法测定闽产千斤拔染料木苷及 染料木素含量染料木素含量 江思思，颜宝玲，张 淼，黄泽豪，刘小芬*(福建中医药大学药学院，福建 福州 350122)摘 要：通过反相液相色谱法建立闽产千斤拔药材染料木苷及染料木素含量的测定方法，进一步完善千斤拔药材质量评价体系。色谱条件为 Atlantis T3 色谱柱(250 mm 4.6 mm，5
2、m)，流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速 1.2 mLmin1，柱温 35，检测波长260 nm，进样量 10 L。结果表明，闽产 20 批千斤拔药材中染料木苷含量在00.119 mgg1之间，平均含量为0.018 mgg1；染料木素含量在0.0650.17 mgg1之间，平均含量为0.115 mgg1；两成分总含量在0.0390.281 mgg1之间，平均总含量为 0.133 mgg1。福建不同产地、不同基原及来源千斤拔中染料木苷和染料木素总量没有明显差异，表明闽产千斤拔药材质量较稳定。该方法快速、可靠，对千斤拔药材的质量控制具有一定的应用价值。关键词：千斤拔；大叶千斤拔；染料
3、木苷；染料木素；反相液相色谱法；福建 Doi:10.3969/j.issn.1009-7791.2022.06.003 中图分类号：R931.6 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2022)06-0434-07 Determination of Genistin and Genistein in Flemingiae Radix from Fujian Province by RP-HPLC JIANG Si-si,YAN Bao-ling,ZHANG Miao,HUANG Ze-hao,LIU Xiao-fen*(College of Pharmacy,Fujian Univer
4、sity of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou 350122,Fujian China)Abstract:A method for the determination of genistin and genistein content in flemingiae radix from Fujian was established.The methods were as followed:Atlantis T3 column(250 mm 4.6 mm,5 m),mobile phase was acetonitrile-0.2%phosphoric ac
5、id aqueous solution,gradient elution,flow rate 1.2 mLmin1,column temperature 35,detection wavelength 260 nm,injection volume 10 L.The results showed that the contents of genistin in 20 batches of flemingiae radix from Fujian were 00.119 mgg1,and the average content was 0.018 mgg1;the contents of gen
6、istein were 0.0650.17 mgg1,the average content was 0.115 mgg1;the total amounts of the two components were 0.0390.281mgg1,and the average content was 0.133 mgg1.There was no significant difference in the total amounts of genistin and genistein in flemingiae radix from different producing areas,origi
7、ns and sources in Fujian Province,which indicated that the quality level of the medicinal material was stable.The method was fast and reliable,and had certain reference value for the quality control of flemingiae radix medicinal materials.Key words:Flemingia prostrata;Flemingia macrophylla;genistin;
8、genistein;RP-HPLC;Fujian 中药材千斤拔别名一条根、竹结豆、钻地风、山豆根等，具有祛风除湿、消肿解毒等功效，在福建全省各地多有分布，以沿海较多1。福建省中药饮片炮制规范(2012 年版)中收载千斤拔为豆科植物 千 斤 拔(Flemingia prostrata)和 大 叶 千 斤 拔(Flemingia macrophylla)的干燥根2。其现行质量标 2022,51(6):434440.Subtropical Plant Science 第 6 期 江思思等：反相液相色谱法测定闽产千斤拔染料木苷及染料木素含量 435准仅有性状、显微、薄层色谱鉴别等，缺少含量测定等分析内
9、容。现代药学研究表明，黄酮类化合物是千斤拔的主要化学成分，染料木苷和染料木素是其大豆异黄酮类中 2 种含量较高的主要成分35。因此，本文以闽产千斤拔作为试材，建立其染料木苷及染料木素含量测定的方法，对福建不同产地的千斤拔药材 20 批样品进行测定，为其质量控制标准提供依据。1 材料与方法 1.1 材料 千斤拔药材采自福建各地，共 20 批次，经福建中医药大学药学院刘小芬副教授鉴定，S1S16 为千斤拔的根，S17S20 为大叶千斤拔的根(表 1)。标本保存于福建中医药大学药学院标本室。不同产地千斤拔阴干，粉碎，过四号筛，备用。表 1 闽产千斤拔样品信息 Table 1 Sample infor
10、mation of flemingiae radix produced in Fujian 批次 基原 采样时间(年-月-日)产地 S1 千斤拔 2021-7-16 福州平潭 S2 千斤拔 2021-7-17 福州平潭 S3 千斤拔 2021-7-19 福州平潭 S4 千斤拔 2021-10-31 福州平潭 S5 千斤拔 2022-5-10 福州长乐 S6 千斤拔 2022-6-25 福州长乐 S7 千斤拔 2022-6-25 福州长乐 S8 千斤拔 2015-8-5 漳州东山 S9 千斤拔 2015-8-11 漳州东山 S10 千斤拔 2015-8-13 漳州东山 S11 千斤拔 2022-
11、4-8 漳州南靖 S12 千斤拔 2022-3-28 漳州华安 S13 千斤拔 2022-3-28 莆田秀屿 S14 千斤拔 2022-3-27 龙岩武平 S15 千斤拔 2022-7-19 龙岩武平 S16 千斤拔 2022-3-27 三明尤溪 S17 大叶千斤拔 2022-4-13 泉州南安 S18 大叶千斤拔 2021-10-10 龙岩上杭 S19 大叶千斤拔 2022-4-14 龙岩上杭 S20 大叶千斤拔 2022-7-19 龙岩武平 注：千斤拔 Flemingia prostrata，大叶千斤拔 F.macrophylla。1.2 仪器与试剂 Waters-e2695-2998 高
12、效液相色谱仪(美国沃特世公司)；BSA224S 万分之一电子天平赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；XS105 微量天平(梅特勒托利多集团)；KQ-500DE 数控超声波清洗器(昆明市超声仪器有限公司)；TDL-40B 低速离心机(上海安亭科学仪器厂)；Milli-Q Direct 8 超纯水机(Millipore 公司)；DFY-C-500 快速开盖万能高速粉碎机(大德中药机械有限公司)。染料木苷对照品(上海源叶生物，HPLC 级，含量98%，批号：A29J10L94211)；染料木素对照品(上海源叶生物，HPLC 级，含量98%，批号：H30A9Z69019)；乙腈(HPLC 级，德国默克有
13、限公司)；磷酸(HPLC 级，上海麦克林)；Milli-Q Direct 8 超纯水系统处理的去离子水。1.3 方法 1.3.1 混合对照品溶液制备混合对照品溶液制备 取染料木苷和染料木素对照品各 5.0 mg，用无水甲醇制成 0.2 mgmL1对照品储备溶液。取对照品储备溶液各1 mL，用无水甲醇定容至10 mL容量瓶，制成 0.02 mgmL1染料木苷和染料木素混合对照品溶液。1.3.2 供试品溶液制备供试品溶液制备 根据相关文献6确定甲醇浓度、料液比、提取时间为因素，各因素设 3 水平，设计 L9(33)正交试验(表 2)。取不同基原千斤拔(S16、S18)进行正交试验，得出最佳提取工艺
14、，按最佳提取工艺试验验证3 次，RSD 均小于 3%，表明该工艺稳定可行。表 2 千斤拔提取工艺正交试验因素及其水平 Table 2 Factors and levels of orthogonal test 因素 水平甲醇浓度/%(A)料液比/gmL1(B)提取时间/min(C)1 60 1:25 30 2 80 1:50 45 3 100 1:100 60 称取千斤拔粉末 0.5 g，按正交试验最佳工艺提取，用离心机 4000 rmin1离心 10 min，取上清液过0.45 m 微孔滤膜，即得供试品溶液。第 51 卷 4361.3.3 色谱条件色谱条件 采用 Atlantis T3 高效
15、液相色谱柱(250 mm 4.6 mm，5 m)，流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱(时间梯度：01050601101 20 min；浓度梯度：5%15%40%60%100%5%A)，流速 1.2 mLmin1，柱温 35，进样量 10 L，采用 DAD 检测器进行全波长扫描(210800 nm)。1.4 方法学考察 1.4.1 线性关系考察线性关系考察 取对照品母液配制成 0、0.002、0.004、0.006、0.008、0.01、0.012 mgmL1标准溶液，分别取 10 L进样测定。以对照品质量浓度为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，绘制标准曲线。染料木苷和染料
16、木素的回归方程分别为 y=41889839x-4134(R2=0.9991)、y=67377321x-9208(R2=0.9992)，两成分均在 00.012 mgmL1浓度下线性关系良好。1.4.2 精密度试验精密度试验 取 1.3.1 项下混合对照品溶液连续进样 6 次，染料木苷和染料木素峰面积的 RSD 分别为 0.07%和0.2%，表明仪器精密度良好。1.4.3 重复性试验重复性试验 称取同一千斤拔样品(S16)6 份，按 1.3.2 项下方法平行制备供试品溶液，进样测得染料木苷和染料木素的RSD分别为1.24%和2.76%，表明该方法重复性良好。1.4.4 稳定性试验稳定性试验 取同一供试品溶液(样品 S16)，分别于 0、2、4、8、16、24 h 进样测定峰面积，染料木苷和染料木素峰面积的 RSD 分别为 2.17%和 1.15%，表明供试品溶液在 24 h 内稳定性良好。1.4.5 加样回收试验加样回收试验 称取已测两成分含量的千斤拔样品(S16)0.5 g 共6份，精密加入等量染料木苷和染料木素对照品，按1.3.2项下方法平行制备供试溶液，进样测定，染料木苷和染料木素
