1、脂肪性肝病DOI:10 3969/j issn1001 5256 2023 03 012代谢相关脂肪性肝病患儿外周血黏膜相关恒定 T 淋巴细胞的频率、表型及功能改变姜涛，欧阳文献，谭艳芳，康桢，李双杰湖南省儿童医院 肝病中心，长沙 410007通信作者:李双杰，lesjie62 vip sina com(OCID:0000 0002 3792 6793)摘要:目的探讨代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)患儿外周血黏膜相关恒定 T(MAIT)淋巴细胞的变化及其临床意义。方法选取 2022 年 3 月2022 年 5 月在湖南省儿童医院就诊的 18 例 MAFLD 患儿(MAFLD 组)及同期 20
2、例正常对照儿童(对照组)，采集外周血，流式细胞仪检测 MAIT 淋巴细胞(CD3+CD161+TCV7 2+细胞)及其不同 MAIT 淋巴细胞亚型(CD4+CD8MAIT 淋巴细胞、CD4CD8MAIT 淋巴细胞、CD4CD8+MAIT 淋巴细胞和 CD4+CD8+MAIT 淋巴细胞)比例，表达 PD 1、CD69、穿孔素、CD107、CXC3、CXC6 和 CC6 的 MAIT 淋巴细胞比例，分析 MAIT 淋巴细胞频率与肝脏炎症、脂肪含量和纤维化程度的相关性。符合正态分布的计量资料两组间比较采用 t 检验;非正态分布计量资料两组间比较采用 Mann Whitney U 检验;相关性分析采用
3、 Spearman 相关分析法。结果与对照组相比，MAFLD 组中外周血 MAIT 淋巴细胞比例及表达 PD 1、CD69、CD107、CXC3、CXC6 和 CC6 的 MAIT 淋巴细胞比例均明显升高(P 值均 0 05);MAIT 淋巴细胞亚型中 CD4+CD8MAIT 淋巴细胞、CD4+CD8+MAIT 淋巴细胞所占MAIT 淋巴细胞比例明显升高(P 值均 0001)，CD4CD8+MAIT 淋巴细胞所占 MAIT 淋巴细胞比例降低(P 0 001);CD4+CD8+MAIT 淋巴细胞(r=0474，P=0047)和 CD107 阳性 MAIT 淋巴细胞比例(r=0 550，P=0 0
4、18)与 ALT呈负相关。结论外周血 MAIT 淋巴细胞向肝脏趋化聚集，在儿童 MAFLD 肝脏炎症中发挥保护作用。关键词:黏膜相关恒定 T 细胞;代谢相关脂肪性肝病;儿童基金项目:湖南省卫生计生委科研课题(20200695)Changes in the frequency，phenotype，and function of mucosal associated invariant T lymphocytes in periph-eral blood of children with metabolic associated fatty liver diseaseJIANG Tao，OUYAN
5、G Wenxian，TAN Yanfang，KANG Zhen，LI Shuangjie(Department of Hepatopathy Center，Hunan Chil-dren s Hospital，Changsha 410007，China)Corresponding author:LI Shuangjie，lesjie62 vip sina com(OCID:0000 0002 3792 6793)Abstract:ObjectiveTo investigate the change in mucosal associated invariant T(MAIT)lymphocyt
6、es in peripheral bloodof children with metabolic associated fatty liver disease(MAFLD)and its clinical significance MethodsA total of 18 chil-dren with MAFLD who attended Hunan Children s Hospital from March to May，2022，were enrolled as MAFLD group，and20 normal children who attended the hospital dur
7、ing the same period of time were enrolled as control group Peripheral bloodsamples were collected，and flow cytometry was used to measure the percentages of MAIT lymphocytes(CD3+CDl61+TCV7 2+cells)，different MAIT lymphocyte subsets(CD4+CD8MAIT cells，CD4CD8MAIT lymphocytes，CD4CD8+MAIT lymphocytes，and
8、CD4+CD8+MAIT lymphocytes)，and MAIT lymphocytes expressing PD 1，CD69，perforin，CD107，CXC3，CXC6，and CC6 The correlation of MAIT lymphocyte frequency with liver inflammation，fat content，and fibrosis degree was analyzed The t test was used for comparison of normally distributed continuous data between tw
9、o265临床肝胆病杂志第39 卷第3 期2023 年3 月J Clin Hepatol，Vol39 No3，Mar2023groups，and the Mann Whitney U test was used for comparison of non normally distributed continuous data between twogroups The Spearman correlation analysis was used for correlation analysis esultsCompared with the control group，theMAFLD gro
10、up had significant increases in the percentage of MAIT lymphocytes in peripheral blood，the percentages of MAITcells expressing PD 1，CD69，CD107，CXC3，CXC6 and CC6，and the percentages of CD4+CD8MAIT cells andCD4+CD8+MAIT lymphocytes among MAIT cell subsets(all P 0.05)，as well as a significant reduction
11、 in the percentageof CD4CD8+MAIT cells among MAIT cell subsets(P 0.001)The percentages of CD4+CD8+MAIT lymphocytes andCD107 positive MAIT lymphocytes were negatively correlated with alanine aminotransferase(r=0 474 and 0 550，P=0 047 and 0 018)ConclusionThe migration of peripheral blood MAIT lymphocy
12、tes to the liver plays a protective roleagainst liver inflammation in children with MAFLDKey words:Mucosal Associated Invariant T Cells;Metabolic associated Fatty Liver Disease;Childesearch funding:Scientific esearch Project of Health and Family Planning Commission of Hunan Province(20200695)非酒精性脂肪性
13、肝病(NAFLD)是一种常见的慢性肝病，包括非酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相关肝纤维化和肝硬化1，部分患者甚至进展为肝癌，现在被称为代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease，MAFLD)2 3，随着肥胖发病率逐年增高和低龄化趋势，NAFLD 成为儿童慢性肝病的常见原因4，肝硬化的三大主要原因之一。目前 MAFLD 的发病机制仍不清楚，临床上亦缺乏有效的药物治疗，因此 MAFLD 发病机制的研究是当前的热点。黏膜相关恒定 T(mucosal associated invariant T，MAIT)淋巴细胞是一类新的天
14、然免疫 T 淋巴细胞，是最丰富的 TC+T 淋巴细胞，以 1 类主要组织相容性复合体相关分子和不依赖 M1 的方式快速激活MAIT 淋巴细胞5，发挥生物学功能，释放多种细胞因子，如 IFN、TNF、IL 17 和溶细胞产物穿孔素及颗粒素分泌并脱颗粒(将 CD107a 暴露于细胞表面)等杀伤性细胞因子6，迅速诱导细胞溶解和靶细胞的死亡。国外相关报道7 9 显示 MAIT 淋巴细胞在成人MAFLD 发病中起到减少肝脏炎症及促肝纤维化作用，但在儿童 MAFLD 发病中作用的研究甚少。本研究通过分析 MAFLD 儿童外周血 MAIT 淋巴细胞的变化及其与临床指标的相关性，探讨 MAIT 淋巴细胞在儿童
15、 MAFLD 发生发展中的作用。1资料与方法1 1研究对象收集 2022 年 3 月2022 年 5 月在本院肝病中心诊治的 18 例 MAFLD 患儿(MAFLD 组)的外周血标本，根据年龄匹配的 20 例正常儿童作为对照(对照组)，其外周血标本采集于本院健康管理中心。1 2纳入标准MAFLD 组纳入标准:脂肪肝合并超重/肥胖、2 型糖尿病和代谢功能障碍中至少一项特征 1 2。同时排除合并甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病毒感染，自身免疫性肝病，人类免疫缺陷病毒等病毒感染。对照组纳入标准:肝功能正常，无慢性疾病，近期无感染史等。1 3方法人外周血免疫细胞的制备:留取 MAFLD组和对照组儿童外周血
16、3 mL，将 PBS 加入 3 mL 新鲜全血中，吸取稀释后的外周血缓慢加到 lymphoprep 表面。全血在400 g 室温下离心20 min，收集第二层外周血免疫细胞并转入含有 PBS 的离心管中，离心机800 g 室温下离心 10 min。离心结束后去上清，再加入 10 mL PBS，离心机 400 g 室温下离心 5 min，清洗外周血免疫细胞以彻底去除残留的 lymphoprep。应用流式细胞仪检测 MAIT 细胞，根据标准方案使用以下抗体:CD183(CXC3)、CD279(PD 1)，CD186(CXC6)、CD3、TCV7.2、CD8、CD69、CD161、CD107a、CD196(CC6)、CD4 和穿孔素抗体进行染色，上流式细胞仪(三激光八色流式细胞分析仪，型号:FacsCantoll，产 地:美 国)进行分析。外周 血 中MAIT 细胞定义为 CD3+CD161+TCV7 2+细胞。收集 MAFLD 组和对照组儿童血常规及肝功能结果，使用瞬时弹性成像检测 MAFLD 组患儿的肝纤维化和脂肪含量，儿童 MAFLD 肝纤维化最佳临界值为6 65 kPa10，区分有无
