1、养禽与禽病防治2022 年第 10 期畜牧养殖场环境空气中醛酮类化合物测定方法的改进张红波，葛福玲，蒋晓霞，吕晓昊*（山东省威海生态环境监测中心，山东威海264200）摘要：本文建立了畜牧养殖场环境空气中醛酮类化合物测定方法。使用填充了 2,4-二硝基苯肼（DNPH）的采样管采集养殖场环境空气样品，发生衍生化反应，流动相由乙腈和水改为甲醇和水，使用高效液相色谱仪的紫外检测器进行检测。结果表明，各化合物在 0 2.0 g/mL 内与其对应的峰面积呈线性关系，相关系数均 0.999；方法检出限为 0.28 1.69 g/m3；加标回收率在 96.4%102%之间。结果显示，与 HJ 683-201
2、4 测定方法相比，该方法可较好地分离丙烯醛和丙酮的两个波峰。方法改变后，检出限、精密度和准确度能够满足方法要求。该方法为畜禽养殖场环境空气中 13 种醛酮类化合物的测定方法提供了有力支撑。关键词：畜牧养殖场醛酮类化合物甲醇高效液相色谱近年来，随着人们生活水平的不断提高，畜牧业发展水平和集约化程度也在不断提高，但随之带来的畜牧养殖场粪便环境污染问题也越来越突出，进而限制了养殖业的可持续发展1,2。畜牧养殖中产生的粪便、废弃物中有害物质的残留已成为农业污染中不可忽视的污染源3。畜牧养殖场环境污染中，空气污染是最主要的污染形式之一，动物摄入饲料后，经过新陈代谢作用，产生氨气、硫化氢、吲哚和甲醛等其他
3、醛酮类化合物后进入大气，不仅对人造成一定的毒害作用，同时还影响畜禽的生长，降低动物的生长性能1,4。因此开展畜牧养殖场环境空气中醛酮类污染物的监测具有重要的意义。国家现行的环境空气中醛酮类化合物的测定标准是 HJgeons(Columba livia)J.Comp Med,2019,69(3):179-183.33 池雪林,陈珍珍,曾显成,等.鸽痘病毒的分离鉴定及病理组织学观察 J.中国兽医学报,2018,38(11):2078-2083.34 孙炎戊,王占新,曾凡桂,等.鸽痘病毒的分离鉴定及 4b 基因序列分析 J.中国兽医科学,2020,50(11):1389-1395.35 苗艳,朱庆贺
4、,兰世捷,等.鸽疱疹病毒和鸽痘病毒双重 PCR 检测方法的建立及初步应用J.中国家禽,2022,44(05):121-124.36 Raghav R,Samour J.Inclusion Body Her-pesvirus Hepatitis in Captive Falcons in the MiddleEast:A Review of Clinical and Pathologic FindingsJ.J Avian Med Surg,2019,33(1):1-6.37 吴旭锦,朱小甫,熊忙利,等.鸽疱疹病毒XY2019 株的分离鉴定与 UL30 基因序列分析J.陕西农业科学,2020,6
5、6(07):71-72.38 赵宝华.我国肉鸽疾病的发生现状J.中国家禽,2010,32(23):43-44.39 孙炎戊,张媛,翁亚彪,等.鸽痘对鸽产业发展的影响及防控对策J.养禽与禽病防治,2021(01):40-43.40 张艳红,郭志文.饲养鸽常见疫病及防治J.畜牧兽医科技信息,2016(11):122-123.41 王开,张加力,温伟.升麻葛根汤配合西药治疗肉鸽痘病 J.中国兽医杂志,2013,49(03):78-79.责任编辑：曹伟胜中图分类号：S851.4 文献标志码：A 文章编号：1008-3847（2022）10-0007-057-养禽与禽病防治2022 年第 10 期时间（
6、min）流动相流速（mL/min）甲醇（%）水（%）00.455050150.457030200.457525300.457525350.458515430.458515480.45505055停止表 1梯度洗脱程序68320145。本研究对该方法进行了优化和验证，并对验证结果进行了分析。1实验方法1.1仪器与试剂高效液相色谱仪（LC-20AT）；13 种醛酮类-2,4-二 硝 基 苯 腙 衍 生 物 标 准 使 用 液（10g/mL）；C18 色谱柱（4.60 mm250 mm，粒径为 5.0m）；DNPH 采样管；甲醇（液相色谱纯）；试验用水均为超纯水。1.2实验步骤1.2.1样品的采集和
7、运输参考 HJ 68320146，采样流量为 1.0L/min，采样时间为 50 min，采气体积 50 L。采样完成后将采样管两端关口封闭，低温保存和运输。1.2.2色谱条件流动相：甲醇/水，梯度洗脱程序见表 1；检测波长：360 nm；进样量：20 L。1.2.3校准曲线的绘制分别量取 100 L、200 L、500 L、1 000L 和 2 000 L 的醛酮类-2，4-二硝基苯腙衍生物标准使用液于 10 mL 容量瓶中，使用乙腈定容，混匀，配置成质量浓度分别为0.1g/mL、0.2 g/mL、0.2 g/mL、1.0 g/mL和 2.0 g/mL 的标准系列。通过自动进样器量取 20
8、L 标准系列，由低浓度到高浓度依次注入高效液相色谱仪中，按照仪器参考条件进行测定，以浓度为横坐标，对应衍生物的峰面积为纵坐标建立标准曲线。2结果与讨论2.1醛酮类腙衍生物色谱图经高效液相色谱分离，SPD-20A 检测器检测后发现，HJ 683-2014 规定的流动相（乙腈/水）不能将丙烯醛和丙酮两个峰分开，而本方法使用不同梯度的甲醇/水作为流动相，改进后的高效液相色谱条件可有效将上述 2 种物质分离，使用本方法得到的 13 种醛酮类腙衍生物色谱图如图 1 所示。2.2线性范围与相关系数结果显示，13 种醛酮类化合物采用甲醇/水作为流动相，进行高效色谱测定分析后，各化合物在 0 2.0 g/mL
9、 内与其对应的峰面积呈线性关系，相关系数均 0.999，可以满足定量分析的要求（表 2）。由表 2 可知，当采样体积为0.05 m3时，本方法测定的 13 种醛酮类化合物的检出限均小于 HJ 6832014 方法规定的检出限，满足该方法的测定要求。2.3精密度和准确度分别制备 10 g/m3和 60g/m3的空白醛酮类化合物加标样品（质量浓度以醛酮计）各 68-养禽与禽病防治2022 年第 10 期化合物线性回归方程相关系数检出限（g/m3）方法检出限（g/m3）甲醛y=185 725x-142.8920.99990.120.28乙醛y=241 162x-1 010.720.99990.110
10、.43丙烯醛y=278 012x+45.28590.99990.140.47丙酮y=240 273x+206.1290.99990.200.47丙醛y=239 789x-1 205.910.99990.180.71丁烯醛y=242 140 x-258.1900.99990.080.76甲基丙烯醛y=288 573x-128.2110.99990.100.67丁酮y=229 014x-457.0130.99990.170.67正丁醛y=209 056x+42.77010.99990.090.74苯甲醛y=212 700 x-855.9890.99990.121.37戊醛y=211 595x-1
11、221.370.99990.150.91间甲基苯甲醛y=203 742x-734.7600.99990.091.69己醛y=2205 260 x-784.7710.99990.121.41图 113 种醛酮类腙衍生色谱图表 213 种醛酮类化合物线性参数和检出限9-养禽与禽病防治2022 年第 10 期化合物名称加标质量浓度（g/m3）相对标准偏差（%）七家验证单位最大标准偏差（%）甲醛10.02.05.860.00.52.8乙醛10.00.86.960.00.23.5丙烯醛10.00.46.160.00.52.8丙酮10.00.66.160.00.42.8丙醛10.00.77.260.00.
12、83.1丁烯醛10.01.25.860.00.72.9甲基丙烯醛10.01.67.060.00.92.8丁酮10.03.28.760.00.83.3正丁醛10.01.814.360.00.93.0苯甲醛10.02.78.160.00.33.6戊醛10.00.98.860.00.16.3间甲基苯甲醛10.02.36.960.00.44.3己醛10.01.48.760.00.53.5表 3方法精密度测定结果个，分别进行测定，结果显示，测定结果相对标准偏差均小于 HJ 683-2014 编制说明中的 7 家验证单位最大标准偏差，所以本测定方法的精密度能够满足方法要求，详情见表 3。当采样体积按 0.
13、05 m3记时，于空白采样管中分别加入 0.50 g 醛酮类标准样品（质量浓度以醛酮计），按照样品分析步骤进行测定，计算方法准确度，结果显示，本方法测定结果均在10-养禽与禽病防治2022 年第 10 期HJ 683-2014 编制说明中 7 家验证单位的加标回收率之间，即在 96.4%102%之间，所以本测定方法的准确度能够满足方法要求（表 4）。3结论本研究通过 DNPH 采样管采集畜牧养殖场环境空气样品，以甲醇/水为流动相，使用改进的 HJ 683-2014 检测方法中高效液相色谱条件测定了 13 种醛酮类化合物的含量。本方法精密度和准确度好，各目标物分离效果较好，为畜牧养殖场环境空气中
14、醛酮类化合物的同时测定提供了技术与数据支持。参考文献1 陈琼.畜禽养殖场环境污染的现状与治理办法J.资源节约与环保,2021(03):88-89.2 张海玉.农村畜禽养殖环境污染现状分析及治理对策探讨J.畜禽业,2021,32(09):82+84.3 丁树谦.畜禽养殖环境污染及其治理的基本途径J.畜牧与饲料科学,2011,32(01):65-67.4 栗丰.浅析我国传统养殖技术环境污染问题J.南方农业,2021,15(27):210-211.5陈志强,李洪武,谢丽娜,等.高效液相色谱法测定环境空气中醛、酮类化合物的方法验证及分析J.辽宁化工,2020,49(08):1029-1031+1034.6 中华人民共和国环境保护部:HJ 683-2014环境空气 醛、酮类化合物的测定 高效液相色谱法S 2014.责任编辑：翁亚彪化合物名称加标回收率（%）七家验证单位加标回收率（%）甲醛99.21004.0乙醛96.499.94.6丙烯醛99.398.84.7丙酮98.898.84.7丙醛10198.67.9丁烯醛98.698.611.5甲基丙烯醛100100.11.5丁酮10110110.5正丁醛97.910110.0苯甲醛10198.69.2戊醛10210111.0间甲基苯甲醛10299.14.6己醛10210011.5表 4方法准确度测定结果11-
