1、第十四章 免疫(miny)细胞的分离及其表面标志检测技术,第一页，共三十二页。,第二页，共三十二页。,免疫细胞(xbo)的分离,外周血单个核细胞(xbo)分离 淋巴细胞的分离 T细胞和B细胞的分离 T细胞亚群的分离,第三页，共三十二页。,外周血单个核细胞(xbo)分离,外周血单个核细胞（peripheral mononuclear cells,PMNC）包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。Ficoll分离液法主要(zhyo)用于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。,第四页，共三十二页。,细胞(xbo)分选和基本原理,不同细胞密度不同不同细胞表面(biomin)
2、生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同,第五页，共三十二页。,不同(b tn)细胞密度不同(b tn),人的红细胞密度(md)为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为1.076-1.090,第六页，共三十二页。,不同(b tn)细胞密度不同(b tn),第七页，共三十二页。,用1.0770.001的分层液可将细胞(xbo)分离,第八页，共三十二页。,密度梯度离心(lxn)(Ficoll)离心(lxn),第九页，共三十二页。,淋巴细胞分离(fnl),（去单核细胞）,贴壁粘附(zhn f)法 吸附柱过滤法 磁铁吸引法 Percoll 分离液法（连续密度梯度离心
3、）,第十页，共三十二页。,E花环沉降(chnjing)法 尼龙毛柱分离法,T细胞(xbo)和B细胞(xbo)的分离,T细胞(xbo)亚群的分离,亲和板结合分离法 磁性微球分离法 荧光激活细胞分离仪分离法,第十一页，共三十二页。,细胞表面(biomin)分化抗原（CD抗原）,适用于T、B细胞的分离(fnl)已知CD抗原细胞亚群的分离未知CD抗原细胞亚群的分离（阴性分选）,第十二页，共三十二页。,第十三页，共三十二页。,磁珠大小可以(ky)选择,第十四页，共三十二页。,大小免疫磁珠分离(fnl)细胞的特点比较,第十五页，共三十二页。,第十六页，共三十二页。,第十七页，共三十二页。,免疫(miny)
4、磁珠法细胞分选过程,第十八页，共三十二页。,免疫磁珠细胞分选装置,第十九页，共三十二页。,全自动细胞(xbo)分选系统,第二十页，共三十二页。,荧光(ynggung)激活细胞分离仪分离法,第二十一页，共三十二页。,流式细胞分析仪,第二十二页，共三十二页。,淋巴细胞标志(biozh)及亚群分类,常用(chn yn)于鉴定和检测淋巴细胞表面标志是簇分化抗原（Cluster of differentiation，CD）。,第二十三页，共三十二页。,T细胞表面(biomin)标志及其亚群,CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞(xbo)（help T cell,Th）CD3+CD4-CD8+细胞毒性T细
5、胞（cytotoxic T cell,Tc or CTL）CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cell,Tr or Treg）,第二十四页，共三十二页。,B细胞表面(biomin)标志,SmIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体，部分CD分子(fnz)是B细胞的重要表面标志，其中以SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标。CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和B2细胞，B1细胞为CD19和CD5双阳性，而B2细胞仅为CD19阳性，B2细胞为通常所指的B细胞。,第二十五页，共三十二页。,NK细胞(xbo)表面标志,人类NK细胞表面(biomin)标志主要以C
6、D16、CD56来认定，临床上将CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为NK细胞。,第二十六页，共三十二页。,T细胞(xbo)及NK细胞(xbo),第二十七页，共三十二页。,抗原(kngyun)提呈类细胞,第二十八页，共三十二页。,免疫细胞(xbo)表面标志的检测,抗体致敏细胞(xbo)花环法 免疫细胞化学法 免疫荧光法 流式细胞分析法,第二十九页，共三十二页。,淋巴细胞表面标志(biozh)检测的临床意义,淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功能的重要(zhngyo)指标。对CD4+和CD8+T细胞的测定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反应的监测。,第三十页，共三十二页。,临床(ln chun)常见疾病中的T 淋巴细胞的变化,第三十一页，共三十二页。,内容(nirng)总结,第十四章。T细胞和B细胞的分离。不同细胞密度不同。不同细胞表面生物学特性不同。不同细胞表面分化抗原不同。密度梯度离心(Ficoll)离心。对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养。常用于鉴定(jindng)和检测淋巴细胞表面标志是簇分化抗原（Cluster of differentiation，CD）。CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞。CD4+CD25+调节性T细胞。T细胞及NK细胞。淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功能的重要指标,第三十二页，共三十二页。,
