1、呼吸道病原体检测(jin c),陆欢平,第一页，共六十一页。,呼吸道感染(gnrn),呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统分为(fn wi)上呼吸道感染和下呼吸道感染,第二页，共六十一页。,上呼吸道(shnghxdo)感染,常见(chn jin)急性上呼吸道感染，指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见(chn jin)的一种传染病常见病因为病毒，少数由细菌引起。患者不分年龄、性别、职业和地区。不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症,第三页，共六十一页。,下呼吸道感染(gnrn),包括急性气管/支气管炎、慢性支气管炎、肺炎(fiyn)、支气管扩张等由病毒、
2、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素,第四页，共六十一页。,呼吸道病原体,常见的呼吸道病原体主要有病毒(bngd)、细菌、支原体、衣原体和立克次体等据统计，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起一种病原体可引起多种临床症状，同一临床表现可由多种病原体引起,第五页，共六十一页。,呼吸道病原体,细菌：细菌引起呼吸道感染的机会比病毒少。一旦感染，症状(zhngzhung)多较严重，定位比较明显，如扁桃体炎、中耳炎、鼻窦炎等。由细菌引起的儿童肺炎往往是流感嗜血杆菌、肺炎链球菌或金黄色葡萄球菌,第六页，共六
3、十一页。,呼吸道病原体,病毒(bngd)，包括鼻病毒(bngd)、冠病毒(bngd)、呼吸道合胞病毒(bngd)、流感病毒(bngd)、副流感病毒(bngd)、腺病毒(bngd)等,第七页，共六十一页。,呼吸道病原体,支原体、衣原体感染(gnrn)导致的呼吸道感染(gnrn)与其它病原体感染(gnrn)的早期临床表现类似。可能在2-3天后咳嗽的症状会表现比较突出。在小于30岁的年轻人中，肺炎支原体是最重要的下呼吸道病原体,第八页，共六十一页。,非典型呼吸道病原体,是指除肺炎(fiyn)链球菌以外的病原体，包括嗜肺军团菌(LP)、肺炎(fiyn)支原体(MP)、肺炎(fiyn)衣原体(CP)、Q
4、热立克次体(贝纳柯克斯体)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒(IFV)和副流感病毒(PIV)等,第九页，共六十一页。,非典型呼吸道病原体,这些病原体变异快，传播广，由于不易形成长期(chngq)免疫力而难以预防和控制,流感病毒(bngd)副流感病毒(bngd)病毒(bngd)呼吸道合胞病毒 腺病毒,第十页，共六十一页。,呼吸道病原体检测(jin c),现有的主要方法：病毒(bngd)分离培养抗原检测抗体检测分子生物学方法等,第十一页，共六十一页。,检测(jin c)方法的比较,第十二页，共六十一页。,抗体、抗原(kngyun)检测的比较,第十三页，共六十一页。,IgMIgG
5、,第十四页，共六十一页。,机体产生IgM一般需要一周左右的时间，而有免疫缺陷或免疫系统不健全的个体(gt)如儿童，特别是3岁以下的小孩，其产生抗体往往需要更久，且抗体产生的水平也较低若检测的是IgG，则不能很好地区分既往感染和急性感染,第十五页，共六十一页。,因此，抗原检测(jin c)的方法对婴幼儿和儿童的呼吸道感染的病因诊断、鉴别诊断和临床用药指导比抗体法更有优势检测抗体IgM比IgG更有临床意义,第十六页，共六十一页。,采样(ci yn),抗原检测拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻腔伸入。伸入距离为从耳垂部到鼻尖长度的一半，一般针对两周岁以下儿童，伸入距离约为拭子绒毛头的长度两倍拭
6、子伸入后要轻轻捻动拭子转3圈。取样后在一小时之内洗脱(x tu)到生理盐水中，12小时内送检,第十七页，共六十一页。,抗原(kngyun)检测采样,第十八页，共六十一页。,采样(ci yn),抗体(kngt)检测,第十九页，共六十一页。,采样对结果影响较大(jio d)非典型感染多为干咳，无痰/少痰阳性率低（标本问题，病毒颗粒小）抗原在体内存在时间短,抗原(kngyun)检测的劣势,第二十页，共六十一页。,九项呼吸道感染(gnrn)病原体IgM抗体检测,第二十一页，共六十一页。,检测(jin c)原理,间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原(kngyun)发生的反
7、应。样本中存在的特异性抗体和抗原(kngyun)反应，未与抗原(kngyun)结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。在下一步骤中，抗原(kngyun)-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应，用免疫荧光显微镜观察结果,第二十二页，共六十一页。,试剂盒组成(z chn),第二十三页，共六十一页。,实验(shyn)步骤1,样本的稀释：血清标本(biobn)与PBS按1:1比例稀释稀释后的血清加入吸附剂中，彻底混匀。处理后的血清要离心10-15分钟除去沉淀，以防干扰检测,第二十四页，共六十一页。,实验(shyn)步骤2,第二十五页，共六十一页。,结果(ji gu)判断,第二十六页，共六十一页。,阴性(y
8、nxng)结果荧光图谱,军团菌、肺炎(fiyn)衣原体和立克次体无荧光；支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色,第二十七页，共六十一页。,阳性(yngxng)结果荧光图谱,腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞(xbo)的细胞(xbo)核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞(xbo)外围呈现苹果绿色荧光,第二十八页，共六十一页。,第二十九页，共六十一页。,嗜肺军团菌,阴性(ynxng)：荧光弱、少、不规则,第三十页，共六十一页。,嗜肺军团菌,阳性：荧光密
9、集(mj)，且亮度较好，杆状形态,第三十一页，共六十一页。,肺炎(fiyn)支原体,阴性：红色细胞周围无或少量(sholing)荧光，亮度弱,第三十二页，共六十一页。,肺炎(fiyn)支原体,阳性：荧光占视野50%以上，亮度好，形态(xngti)为明显的细胞膜或胞浆,第三十三页，共六十一页。,Q热立克次体(l k c t),阴性(ynxng)：荧光弱、少、不规则,第三十四页，共六十一页。,Q热立克次体(l k c t),阳性：荧光(ynggung)亮度强且数量多，形态典型,第三十五页，共六十一页。,肺炎(fiyn)衣原体,阴性(ynxng)：荧光弱、少,第三十六页，共六十一页。,肺炎(fiyn
10、)衣原体,阳性：荧光(ynggung)密集，且亮度较好,第三十七页，共六十一页。,腺病毒,阴性(ynxng)：荧光弱、少,第三十八页，共六十一页。,腺病毒,阳性：荧光亮度强且数量(shling)多，平均每个视野的阳性细胞3-5个,第三十九页，共六十一页。,呼吸道合胞病毒(bngd),阴性(ynxng)：荧光弱、少,第四十页，共六十一页。,呼吸道合胞病毒(bngd),阳性：荧光亮度(lingd)强且数量多，平均每个视野的阳性细胞3-5个,第四十一页，共六十一页。,甲型流感病毒,阴性(ynxng)：荧光弱、少,第四十二页，共六十一页。,甲型流感病毒,阳性：荧光(ynggung)亮度强且数量多，平均
11、每个视野的阳性细胞3-5个,第四十三页，共六十一页。,乙型流感病毒,阴性(ynxng)：荧光弱、少,第四十四页，共六十一页。,乙型流感病毒,阳性：荧光(ynggung)亮度强且数量多，平均每个视野的阳性细胞3-5个,第四十五页，共六十一页。,副流感病毒,阴性(ynxng)：荧光弱、少,第四十六页，共六十一页。,副流感病毒,阳性：荧光(ynggung)亮度强且数量多，平均每个视野的阳性细胞3-5个,第四十七页，共六十一页。,方法(fngf)的局限性,抗体水平无显著上升时不能排除感染的可能性单一样本抗体检测结果不能帮助作出近期感染的诊断。应采集双份样本（急性期和康复(kngf)期）同时检测来观察血
12、清转化或抗体水平的明显升高,第四十八页，共六十一页。,方法(fngf)的局限性,对患有自身免疫性疾病病人的血清，用IFA检测时，支原体、腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒，会在细胞上发生(fshng)非特异性反应，这些血清不能用此方法评价质控孔用于检测这种现象,第四十九页，共六十一页。,方法(fngf)的局限性,在嗜肺军团菌和Q热立克次体中，有时血清会含有与卵抗原反应的抗体(kngt)，所以使用卵黄囊固定抗原会出现非特异性荧光。当出现这种情况时，该血清就不能用IFA进行分析了,第五十页，共六十一页。,临床(ln chun)实际效果图,第五十一页，共六十一页。,第五十二页，共六十一页。
13、,九联检,第五十三页，共六十一页。,第五十四页，共六十一页。,第五十五页，共六十一页。,第五十六页，共六十一页。,第五十七页，共六十一页。,第五十八页，共六十一页。,思考题,质控孔的作用(zuyng)是什么？,第五十九页，共六十一页。,谢谢(xi xie)！,第六十页，共六十一页。,内容(nirng)总结,呼吸道病原体检测。分为上呼吸道感染和下呼吸道感染。细菌：细菌引起呼吸道感染的机会比病毒少。由细菌引起的儿童肺炎往往是流感嗜血杆菌、肺炎链球菌或金黄色葡萄球菌。将包被有不同基质的生物薄片固定在一个反应区中，可同时检测多种抗不同病原体的抗体。若检测的是IgG，则不能很好地区(dq)分既往感染和急性感染。拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻腔伸入。拭子伸入后要轻轻捻动拭子转3圈。样本的稀释：血清标本与PBS按1:1比例稀释,第六十一页，共六十一页。,
