1、第九章 G-兼性厌氧杆菌本章细菌(xjn)含有3个科及2个关系未确定的属 肠杆菌科 弧菌科 巴氏杆菌科,第一页，共五十三页。,第一节 肠杆菌科（有28个属）共同特征：1G中等大小杆菌，运动者周身鞭毛，无芽胞，无荚膜（个别(gbi)有），非抗酸染色。2需氧兼性厌氧，普通培养基上生长好。3糖发酵产酸（+）或产酸产气。4接触酶阳性（志贺氏菌除外）。5硝酸盐还原试验阳性（欧文氏菌除外）6在含0.5%胆盐的培养基上生长。,第二页，共五十三页。,一、埃希氏菌属 本属有5个种：大肠埃希氏菌，蟑螂菌，费格森菌，赫曼氏菌，伤口菌。其中最重要的是大肠菌，俗称大肠杆菌。（一）形态及染色特征 G中等(zhngdng)
2、大小杆菌，八根鞭毛，能运动，无芽胞，无荚膜但常有微荚膜。,第三页，共五十三页。,（二）培养特性1普通培养基上：生长良好，37 24h 形成圆形，光滑，隆起，湿润，半透明灰白色菌落。2普通肉汤：均匀浑浊，管底有粘性沉淀，管壁有菌环。3麦康凯琼脂：红色菌落（沙门氏菌无色）原理(yunl)，麦康凯平板含有乳糖有胆盐，分解乳糖的细菌产酸使指示剂变红，胆盐有利于肠杆菌科细菌生长，对其它菌有抑制作用。,第四页，共五十三页。,大肠杆菌微菌落(jnlu)照片,第五页，共五十三页。,大肠杆菌革兰氏染色照片大肠杆菌平板(pngbn)菌落照片,第六页，共五十三页。,4伊红美蓝琼脂：黑色带金属闪光的菌落(jnlu)（
3、沙门氏菌无色）。原理：伊红，美兰均为指示剂，又能抑G+生长，含有乳糖。大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷，染上红色，再与美兰结合形成紫黑色菌落，不分解乳糖不着色，伊红美蓝不结合，故沙门氏菌无色。5远藤氏琼脂：带金属光泽的红色菌落。,第七页，共五十三页。,6SS琼脂（沙门氏菌志贺氏菌分离培养基）：红色小菌落。7三糖铁（TSI）：斜面黄色，底部黄色，不产生H2S。原理：三糖铁含葡萄糖、乳糖，蔗糖。其中乳糖、蔗糖含量为G的10倍，大肠杆菌三种糖均发酵(f jio)产酸，足以使底部和斜面变黄。沙门氏菌不发酵(f jio)乳糖和蔗糖，只发酵(f jio)G产酸，斜面部分先变黄，但产酸量少且接触空气又受到
4、氧化，另外分解含氮物质产碱，所以斜面又变为红色，而下端的酸不被氧化，一直呈黄色。,第八页，共五十三页。,（三）生化特征G 乳 麦 蔗 靛基质实验：+（I）；MR（甲基红试验）+（M）VP（乙酰甲基醇）（Vi）；柠檬酸基利用试验（C）I M Vi C+硝酸盐还原试验+、H2S、尿素分解(fnji)三糖铁：斜面黄色/底部黄色，不产生H2S。,第九页，共五十三页。,（四）抗原构造及血清型：大肠杆菌抗原主要有O抗原（菌体抗原，有173种），K抗原（被膜或荚膜抗原，有80种），H抗原（鞭毛抗原，有56种）。1O抗原：存在于细胞壁中，由脂多糖（LPS）中的特异性多糖侧链组成，O抗原是S型菌的一种耐热菌体抗
5、原，121 2h不破坏(phui)其抗原性，当S型菌丢失特异性多糖侧链时，即变为R型菌，O抗原也随之丢失。,第十页，共五十三页。,2K抗原：位于菌体表面的荚膜或被膜中，在80种K抗原中，除K88，K99是两种蛋白质抗原外，其余均为多糖。具有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫“O不凝集性”。因为K抗原可抑制活细菌在相应抗O血清中的凝集反应，这样可作为判定大肠杆菌是否具有K抗原的一个标准(biozhn)。据耐热性不同，K抗原又分为：L、A、B 三型。,第十一页，共五十三页。,L型K抗原：对热敏感100 1h破坏其抗原性，并失去与相应抗体的结合力和凝集(nngj)性，位于被膜中，偶见于荚膜中
6、。A型K抗原：耐100 1h，但121 2.5h破坏其抗原性和O不凝集 性，但保留与相应抗体结合能力。位于荚膜中，抗A血清可使具有相应A抗原的菌体出现荚膜肿胀现象。B型K抗原：100 1h 破坏其抗原性与相应抗体的凝集性，但保留其与相应抗体结合力。,第十二页，共五十三页。,3H抗原：不耐热，是一种蛋白质，抗原性好，80破坏其抗 原性，每一个有动力的细菌仅含一种H抗原，且无两相变异，无鞭毛细菌无H抗原。根据大肠杆菌抗原的鉴定(jindng)，可用OKH排列表示其血清型即大肠杆菌抗原结构式：O8K23（L）H19表示该菌具有O抗原8，L型K抗原23，H抗原为19。,第十三页，共五十三页。,（五）致
7、病性 大多数是在正常条件下不致病的共栖菌，但特定条件下，如移位侵入肠外组织或器官(qgun)可致肠杆菌病；但也有极少数是病原性大肠杆菌。,第十四页，共五十三页。,据毒力因子与发病机制不同可分五类：（1）产肠毒素大肠杆菌（ETEC）：引起人和幼畜腹泻（黄痢）。（2）产类志贺毒素大肠杆菌（SLTEC）：引起猪水肿病，犊牛出血性肠炎。（3）肠致病性大肠杆菌（EPEC）：兔腹泻，猪腹泻。（4）败血性(xuxng)大肠杆菌（SEPEC）：猪，犊牛败血症，鸡的大肠杆菌败血症，气肠炎，脑膜炎，肠炎，肉芽肿。（5）尿道致病性大肠杆菌（UPEC）：犬、猪的尿道感染。,第十五页，共五十三页。,（一）产肠毒素大肠杆
8、菌：由粘附表性菌毛和肠毒素两类毒力因子构成，具致病力与二者密切相关，缺一不可。1粘附素性菌毛：又叫粘附素或定居因子，其对应的抗原叫粘附素抗原或定居因子抗原。已发现的粘附素有F4（K88）、F5（K99）、F6（987P），F41，F42，F17。它不是导致宿主腹泻的直接致病因子，但是构成ETEC感染的重要毒力因子。ETEC必须首先粘附于宿主的小肠上皮细胞，才能避免肠蠕动和肠液分泌的清除作用，并得以在肠内定居和繁殖，进而发挥致病作用。2 在体内(t ni)或体外生长时产生并分泌到细胞外的一种蛋白质毒素，根据对热的耐受性不同分为：,第十六页，共五十三页。,不耐热肠毒素（LT）：65 30min灭活
9、，有抗原性。作用于小 肠和兔回肠引起肠液积蓄，引起水样腹泻。耐热肠毒素（ST）：100 30min不灭活，无抗原性。又可分为：STa：来源猪，牛ST：对人和猪、牛、羊均有肠毒性。ST b：来源于人ST：仅在猪源ETEC中产生。ETEC的致病机理：通过口腔进入宿主的小肠(xiochng)，以其菌毛粘附素黏附于肠粘膜上，以抵御肠蠕动和流动肠液的冲刷作用，从而定居于肠内，大量繁殖。此时大量产生并释放肠毒素，对其靶细胞产生毒性作用。导致肠绒毛细胞吸收功能降低，造成在肠管内水和电解质大量积蓄，引起水样腹泻和迅速脱水。,第十七页，共五十三页。,（二）产类志贺毒素大肠杆菌（SLTEC）又称产Vero细胞毒素
10、大肠杆菌，系一类在体内或体外生长可产生(chnshng)类志贺毒素的病原性大肠杆菌。可致猪的水肿，以头部，肠素膜和胃壁浆液性水肿为特征，常伴有共济失调，麻痹或惊厥等神经症状，发病率低但致死率高，有两类毒力因子：1粘附性菌毛：F18，它有助于细菌在猪肠粘膜上皮细胞定居和繁殖。,第十八页，共五十三页。,2致水肿病2型类志贺毒素（SLT-2e）：是蛋白质性细菌毒素，用粗制的或纯化的SLT-2e静脉或腹腔注射适龄仔猪，可复制出水肿病，SLT-2e是致该病发生的主要毒素因子。SLTEC的致病机理：以F18菌毛粘附于小肠上皮细胞，定居和繁殖的细菌在肠内产生SLT-2e并被吸收，造成细胞死亡和组织病变。另外
11、，SLT-2e也是一种(y zhn)血管毒素，可引起血管内皮组织损伤，改变血管的通透性，导致猪出现水肿和典型的神经症状。神经症状是由脑水肿所致并非毒素对神经细胞直接作用。,第十九页，共五十三页。,（六）微生物诊断1取材：肠系膜淋巴结，心，肝，脾，涂片染色镜检：G中等大小杆菌。2分离培养：接种麦康凯平板和血平板划线分离，挑取麦康凯上的红色菌落或血平板上呈溶血的菌落（仔猪黄痢与水肿病菌株）进行以下生化实验。3三糖铁：斜面黄色/底部黄色，有气体产生。4接种普通肉汤：2436h 均匀混浊，底部有粘稠(zhn chu)沉淀，液面有菌环。5生化试验：G 蔗 麦 乳 IMViC+-6动物致病性试验：24h
12、肉汤培养小白鼠腹腔0.2-0.4ml，2448h小鼠死亡。,第二十页，共五十三页。,7对ETEC各种粘附性抗原鉴定(jindng)：应先将待检菌在粘附素专用培养基上培养。培养物用已知的各种粘附素单因子血清或克隆抗体作玻板凝集，或用免疫荧光，ELISA等作其它血清学方法鉴定，也可用MRH及其抑制试验MRHI以及体外肠上皮细胞吸附与吸附抑制试验加以鉴定。,第二十一页，共五十三页。,8对ETEC肠毒素的检测：LT检测方法有 Y1小鼠肾上腺细胞或中国仓鼠卵巢细胞（CHO）培养法，平板免疫溶血试验(shyn)，夹心红细胞免疫试验(shyn)，夹心ELISA，兔回肠结扎试验，兔皮肤蓝斑试验法。ST检测方法
13、有乳鼠胃内投服试验GM1-ELISA。9对SLT-2e检测：用该毒素的粗提或纯化物作Vero细胞毒性试验和小鼠神经毒性试验，并以STI-2e血清或单抗作中和试验鉴定之。,第二十二页，共五十三页。,（七）防治1以抗粘附毒素(d s)免疫为基础的含单价或多价菌毛抗原的灭活菌苗或亚单位苗。2以抗肠毒素免疫为主的类毒素苗或LI-B亚单位苗。3表达一种或两种粘附素的基因工程苗 K88 K99双价基因工程苗。,第二十三页，共五十三页。,二、沙门氏菌属 沙门氏菌属是肠杆菌科一个大属，有2500多个血清型，寄生(jshng)于人及动物肠道，引起各种疾病。（一）形态染色特征 G中等大小杆菌，除鸡白痢和鸡伤寒沙门
14、氏菌外，都有鞭毛，能运动，无芽胞，无荚膜。,第二十四页，共五十三页。,（二）培养特性麦康凯平板：无色菌落，伊红美蓝琼脂：无色（大肠杆菌(d chn n jn)黑色带金属光泽）运腾氏：无色（大肠杆菌为红色带金属闪光菌落）。（三）生化特性：三糖铁斜面：斜面红色/底部黄色（若有H2S产生，底部为黑色）5生化试验：G 蔗 麦 乳 IMViC-+-+,第二十五页，共五十三页。,（四）抗原及变异具有O，H，K和菌毛4种抗原。O和H抗原是其主要抗原，构成血清型鉴定的物质基础。1O抗原：细胞壁表面的耐热多糖抗原，100 2.5h不被破坏，一个菌体可有几种(j zhn)O抗原，以小写阿拉伯数字表示。将具有共同O
15、抗原的各个血清型菌归入一群，以大写英文字母表示，如A（含有共同O2抗原），B（O4），C1C4，D1D3HZ共计51个O群，包括58种O抗原。,第二十六页，共五十三页。,2H抗原(kngyun)：蛋白质性质的鞭毛抗原(kngyun)，有63种。H抗原可分为第1相和第2相两种。第1相H抗原用小写英文字母表示，特异性高故称特异相；第2相抗原用阿拉伯数字表示，为许多沙门氏菌所共有故称非特特异相。多数沙门氏菌有第1和第2两相H抗原称为双相菌，常发生位相变异。例如将一个双相菌在平板上划线在所得菌落中，有的有第1相H抗原，有的有第2相H抗原。若任意挑取1个菌落，在培养基上多次传代，其后代又可出现部分是第1
16、相而另一部分是第2相的菌落，这种两个相的H抗原可以交相产生的现象称为位相变异。在鉴别对只能检出1个相，而测不出另一个相。,第二十七页，共五十三页。,3K抗原：被膜抗原，与毒力有关，又称Vi抗原，60 1h破坏其凝集性和免疫原性。有K抗原的菌株不能相应的抗O血清凝集。在多次传代后K抗原会丢失。用已知的沙门氏菌O和H单因子血清作玻板凝集试验，确定一个沙门氏血清型或抗原，对有K抗原的还须用K抗血清鉴定之。如鼠伤寒沙门氏菌血清型为：1，4，5，12i1，2表示该菌有O抗原：1,4,5,12 四种(s zhn)；第1相H抗原为I，若转变为第2相H抗原，则是1，2；括号中抗原表示该抗源可能无。,第二十八页，共五十三页。,（五）致病性1是一种人畜共患病，最常侵害幼、青年动物使之发生败血症，胃肠炎及其他组织局部炎症。成年动物为散发性或局限性，发生败血症的怀孕母畜可表现流产(li chn)。主要传播途径为消化道。据其对宿主的嗜好不同分3种类型有广泛嗜性沙门氏菌：能引起人和各种动物的沙门氏菌病，如 鼠伤寒和肠炎沙门氏菌。专嗜性沙门氏菌：只对人或某种动物产生特定的疾病，如鸡白 痢和鸡伤寒沙门氏菌仅使鸡和炎鸡
