1、BCA法测定蛋白(dnbi)浓度,主讲人：周芳亮,第一页，共十二页。,【原理】：碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色(yns)的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。,第二页，共十二页。,【主要特点】1.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。2.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。3.快速：45分钟内完成测定。4.准确灵敏,线性范围广。5.经济实用：在微孔板中进行测定，可大大(d d)节约样品和试剂用量。,第三页，共十二页。,【实验(shyn)器材与试剂】,1器材:分光(fn un)光度计、恒温水浴锅。2.试剂
2、:BCA试剂盒；待测样品。,第四页，共十二页。,【操作步骤】1.配制BCA工作液:根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制适量BCA工作液，充分(chngfn)混匀。2.稀释标准品：用生理盐水稀释蛋白标准品BSA。,第五页，共十二页。,200,第六页，共十二页。,蛋白(dnbi)液稀释,第七页，共十二页。,第八页，共十二页。,5、按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品（原液，1：10,1:100稀释液）各150 l分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。6、向每个试管中各加入3 ml BCA工作液，充分混匀，37水浴中孵育
3、(f y)30分钟，将各管冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。7、用分光光度计在562 nm处，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。8、绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。,第九页，共十二页。,【注意事项】：1.标本的充分混匀。2.要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白样品均需做复孔,每次均应做标准曲线。3.使用水浴箱温育时，应注意防止因水份(shu fn)蒸发影响检测结果。,第十页，共十二页。,第十一页，共十二页。,内容(nirng)总结,BCA法测定蛋白浓度。4.准确灵敏,线性范围广。1.配制BCA工作液:根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀。2.稀释标准品：用生理盐水(shnglynshu)稀释蛋白标准品BSA。5、按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品（原液，1：10,1:100稀释液）各150 l分别加到作好标记的试管中,第十二页，共十二页。,
