1、第第二十八二十八章章 移植免疫及其免疫检测移植免疫及其免疫检测移植（移植（transplantationtransplantation）:将健康细胞、组织或器将健康细胞、组织或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以替代或补偿机体所丧失的结构和（或）功能的现代替代或补偿机体所丧失的结构和（或）功能的现代医疗手段。医疗手段。移植物（移植物（graftgraft）供供 体（体（donordonor）受受 体（体（recipientrecipient）或宿主（）或宿主（hosthost）概 述 自体移植自体移植根据移植物来源根据移植物来源 同系移植同
2、系移植 同种异体移植同种异体移植 异种移植异种移植 原位移植原位移植根据移植部位根据移植部位 异位移植异位移植 器官移植器官移植移植物种类移植物种类 支架组织移植支架组织移植 细胞移植细胞移植移植的类型移植的类型组织器官移植种类和命名 移植名称移植名称 供者、受者关系供者、受者关系 举例举例 自体移植自体移植 同一个体同一个体 自体断肢再植，自体皮片移植自体断肢再植，自体皮片移植 同系或同基因移植同系或同基因移植 同系或同基因同系或同基因 人的单卵双生子间的器官移植人的单卵双生子间的器官移植 的个体间的个体间 同品系小鼠的皮片移植同品系小鼠的皮片移植 同种同种异基因异基因移植移植 同种不同基因
3、同种不同基因 人与人之间的肾移植人与人之间的肾移植 的个体间的个体间 不同品系小鼠间的皮片移植不同品系小鼠间的皮片移植 异种移植异种移植 异种动物间异种动物间 狗的器官移植给猩猩狗的器官移植给猩猩 猪的器官移植给狗猪的器官移植给狗 第一节 引起排斥反应的靶抗原1 1 主要组织相容性抗原主要组织相容性抗原人人 HLA HLA 鼠鼠 H-2 H-2遗传特征：遗传特征：单倍型遗传单倍型遗传高度多态性高度多态性2 2 次要组织相容性抗原次要组织相容性抗原 主要组织相容性抗原（MHC分子）父父 母母 HLAHLA是人体多态性最丰富的是人体多态性最丰富的基因系统。据基因系统。据19991999年的统计，年
4、的统计，HLAHLA复合物等位基因总数已达复合物等位基因总数已达到到10311031个，其中个，其中HLA-BHLA-B等位基等位基因有因有301301个个 A9Cw3B7A2Cw2B13A1Cw1B5A3Cw4B8HLAHLA的遗传特征的遗传特征第二节 排斥反应的种类及发生机制移植排斥反应（transplantation rejection）针针对对移移植植抗抗原原产产生生免免疫疫应应答答，从从而而导导致致移移植植物物功功能能丧丧失失或或受者机体损害的过程。受者机体损害的过程。分类：分类：超急性排斥反应超急性排斥反应 急性排斥反应急性排斥反应 慢性排斥反应慢性排斥反应机制：机制：受受者者体体
5、内内存存有有抗抗供供者者移移植植物物的的预预存存抗抗体体，与与抗抗原原结结合合，激激活补体和凝血系统活补体和凝血系统,导致血管内凝血。导致血管内凝血。预存抗体来源：预存抗体来源：1 1、供受者之间、供受者之间ABO ABO 血型不合；血型不合；2 2、受者反复多次输血、妊娠或既往作过移植。、受者反复多次输血、妊娠或既往作过移植。处理：重新移植处理：重新移植预防：预防：ABOABO血型配型、细胞毒实验血型配型、细胞毒实验1.1.超急性排斥反应超急性排斥反应 2.2.急性排斥反应急性排斥反应 体液性排斥体液性排斥 抗体激活补体，并有抗体激活补体，并有CD4CD4+T T 细胞参与，导致急性血管炎细
6、胞参与，导致急性血管炎细胞性排斥细胞性排斥 CD8CD8+CTLCTL细胞的细胞毒作用、细胞的细胞毒作用、CD4CD4+T T和巨噬细胞的作用，导致和巨噬细胞的作用，导致急性间质炎。急性间质炎。处理处理 使用免疫抑制剂使用免疫抑制剂在急性排斥反应中的两条抗原提呈途径：在急性排斥反应中的两条抗原提呈途径：直直接接途途径径（direct direct pathpath）:残残留留于于供供者者移移植植物物内内的的抗抗原原提提呈呈细细胞胞（过过客客细细胞胞）对对受受者者机机体体的的免免疫疫系系统统提提供供最最初初的的抗抗原原刺刺激激。这这种种抗抗原原性性刺刺激激，来来自自移移植植物物中中树树突突状状细
7、细胞胞和和单单核核细细胞胞等等表表面面富富含的含的HLA-HLA-、-类分子类分子 间间接接途途径径 （indirect indirect pathpath）:通通过过受受者者体体内内的的抗抗原原提提呈呈细细胞胞对对具具有有同同种种异异基基因因HLA-HLA-、-类类分分子子的的移移植植物物实实质质细细胞胞的的识识别别。无无论论是是供供者者还还是是受受者者，其其抗抗原原提提呈呈细细胞胞提提供供的的IL-1IL-1、IL-6IL-6等等刺刺激激信号，有助于触发淋巴细胞的活化信号，有助于触发淋巴细胞的活化 同种移植排斥反应的发生机制同种移植排斥反应的发生机制 慢性排斥反应的介导因素：慢性排斥反应的
8、介导因素：T T细胞、巨噬细胞等介导的迟发型超敏反应等免疫损伤。细胞、巨噬细胞等介导的迟发型超敏反应等免疫损伤。B B细胞产生的抗体活化补体或通过细胞产生的抗体活化补体或通过ADCCADCC破坏血管内皮细胞。破坏血管内皮细胞。急性排斥反应反复发作所导致的移植物组织退行性变，此与细胞急性排斥反应反复发作所导致的移植物组织退行性变，此与细胞 和体液免疫均有关系。和体液免疫均有关系。非免疫相关因素，诸如局部缺血、再灌注损伤、微生物感染等。非免疫相关因素，诸如局部缺血、再灌注损伤、微生物感染等。受者患有高血压或糖尿病也可促使慢性排斥反应的发生受者患有高血压或糖尿病也可促使慢性排斥反应的发生临床特征：临
9、床特征：对免疫抑制疗法不敏感对免疫抑制疗法不敏感无特异性治疗方法，无特异性治疗方法，最终需要重新进行器官移植最终需要重新进行器官移植 3.3.慢性排斥反应慢性排斥反应定定义义：在在骨骨髓髓移移植植时时，供供者者骨骨髓髓中中的的免免疫疫细细胞胞启启动动以以受受者者细细胞胞为为靶靶抗抗原原的的免免疫疫应应答答反反应应，引引起起攻攻击击受受者者的的移移植植物物抗抗宿主反应。宿主反应。GVHDGVHD也可见于脾、胸腺和小肠移植。也可见于脾、胸腺和小肠移植。发生机制：发生机制：T T细胞起主要作用细胞起主要作用 IL-2IL-2、IL-6IL-6、TNF-TNF-、IFN-IFN-等等 ICAMICAM
10、、VCAMVCAM、CD44CD44、ELAM-1ELAM-1等等4.4.移植物抗宿主反应移植物抗宿主反应第三节 HLA分型方法血清学分型法应应用用一一系系列列已已知知抗抗HLAHLA的的特特异异性性标标准准分分型型血血清清与与待待测测淋淋巴巴细细胞胞混混合合，借借助助补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。操作简便易行、操作简便易行、节约试剂、结果可靠、重复性好节约试剂、结果可靠、重复性好 无需特殊设备无需特殊设备 耗时长耗时长不同批号抗血清结果常有不同不同批号抗血清结果常有不同用于用于HLAHLA分型的微量细胞毒试验分型的微量细胞毒试验 血清学分
11、型法血清学分型法死（着染）细胞（死（着染）细胞（%）记分记分结果判断结果判断0 010101 1阴性阴性111120202 2可疑阴性可疑阴性212150504 4弱阳性弱阳性515180806 6阳性阳性80808 8强阳性强阳性0 0未试验或不能读数未试验或不能读数细胞学分型法 以混合淋巴细胞培养以混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte mixed lymphocyte culture,MLCculture,MLC）或称混合或称混合淋巴细胞反应淋巴细胞反应（mixed lymphocyte mixed lymphocyte reaction,MLRreaction,MLR）为基
12、本技术的为基本技术的HLAHLA分分型法。能用本法测定的抗原称为型法。能用本法测定的抗原称为LDLD抗原抗原（lymphocyte defined lymphocyte defined antigenantigen）,包括包括HLA-DHLA-D、-DP-DP。1.1.单向单向MLCMLC原理：将已知原理：将已知HLAHLA型别的分型细胞用丝裂霉素型别的分型细胞用丝裂霉素C C或或X X线照射预处理，使其失去线照射预处理，使其失去增殖能力仅作为刺激细胞；而以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞为增殖能力仅作为刺激细胞；而以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞为反应细胞。两者混合培养时，反应细胞
13、可对刺激细胞发生应答而增殖，用反应细胞。两者混合培养时，反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖，用3H-TdR3H-TdR掺入法测定细胞增殖强度，从而判断受检细胞的掺入法测定细胞增殖强度，从而判断受检细胞的HLAHLA型别。型别。根据选用的刺激细胞类型分为：根据选用的刺激细胞类型分为：1 1阴性分型法阴性分型法 2 2阳性分型法阳性分型法 遗遗传传型型不不同同的的两两个个个个体体淋淋巴巴细细胞胞在在体体外外混混合合培培养养时时，由由于于两两者者HLAHLA不不同同，能能相相互互刺刺激激导导致致对对方方淋淋巴巴细细胞胞增增殖殖，故故称称双双向向MLCMLC。在在此此试试验验中中，各各自自的的淋淋巴巴
14、细细胞胞既既是是刺刺激激细细胞胞，又又是是反反应应细细胞胞，反反应应后后形形态态上上呈呈现现的的细细胞胞转转化化和和分分裂裂现现象象，可可通通过过形形态态法计数转化细胞法计数转化细胞。2.2.双向双向MLCMLC分子生物学分型法限限制制性性片片断断长长度度多多态态性性（restriction restriction fragment fragment length length polymorphism,polymorphism,RFLPRFLP）分析：分析：最早建立的研究最早建立的研究HLAHLA多态性的多态性的DNADNA分型技术分型技术 PCR-RFLPPCR-RFLP分分型型法法：对对
15、DNADNA片片段段进进行行体体外外扩扩增增，然然后后再再用用限限制制性性内内切切酶酶进进行行酶酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度大大增加切分析，可使限制性长度分析的敏感度大大增加1.RFLP1.RFLP与与PCR-RFLPPCR-RFLP分型法分型法 序序列列特特异异性性寡寡核核苷苷酸酸-聚聚合合酶酶链链反反应应（PCR-sequence PCR-sequence specific specific oligonucleotideoligonucleotide,PCR-SSOPCR-SSO）是是以以PCRPCR为为基基础础，将将凝凝胶胶上上扩扩增增的的HLAHLA基基因因DNADNA转转移
16、移至至硝硝酸酸纤纤维维膜膜或或尼尼龙龙膜膜，进进而而用用放放射射性性核核素素或或酶酶、地地高高辛辛等等非非放放射射性性物物质质标标记记的的寡寡核核苷苷酸酸探探针针与与之之进进行行杂杂交，从而对扩增产物作出交，从而对扩增产物作出HLAHLA型别判断。型别判断。分类：分类：斑斑点点或或印印渍渍法法：用用扩扩增增的的待待测测DNADNA印印渍渍或或点点至至固固相相支支持持物物，再再与与探探针针行行杂杂交交，利于大量标本分型利于大量标本分型反反向向斑斑点点或或印印渍渍法法：将将已已知知DNADNA印印渍渍或或点点至至固固相相支支持持物物，然然后后与与扩扩增增的的待待测测DNADNA（预先标记）杂交，用于少量标本分型（预先标记）杂交，用于少量标本分型 PCR-SSOPCR-SSO是是类类HLAHLA分型应用最广泛的方法，分型应用最广泛的方法，能够鉴定所有已知序列的能够鉴定所有已知序列的HLA-DRHLA-DR、DQDQ、DPDP等位基因等位基因 2.PCR-SSO2.PCR-SSO分型法分型法 基基因因芯芯片片(gene(gene chip)chip)是是近近年年发发展展起起来来的的一一项项新新
