1、农药残留的速测技术第一页，共二十页。农药残留是指农药使用后残存于环境、生物体和食品中的农药母体衍生物、代谢物、降解物和杂质的总称。造成蔬菜农药残留量超标的主要是一些国家禁止在蔬菜生产中使用的有机磷农药和氨基甲酸酯类农药，如甲胺磷、氧化乐果、甲拌磷、对硫磷、甲基对硫磷等。食用含有大量高毒、剧毒农药残留引起的食物会导致人、畜急性中毒事故。长期食用农药残留超标的农副产品，虽然不会导致急性中毒，但可能引起人和动物的慢性中毒，导致疾病的发生，诱发癌症，甚至影响到下一代。第二页，共二十页。农残检测必要性农残检测必要性随着农业产业化的开展，农产品的生产越随着农业产业化的开展，农产品的生产越来越依赖于农药、抗
2、生素和激素等外源物来越依赖于农药、抗生素和激素等外源物质。我国农药在粮食、蔬菜、水果、茶叶质。我国农药在粮食、蔬菜、水果、茶叶上的用量居高不下，而这些物质的不合理上的用量居高不下，而这些物质的不合理使用必将导致农产品中的农药残留超标，使用必将导致农产品中的农药残留超标，影响消费者食用平安，严重时会造成消费影响消费者食用平安，严重时会造成消费者致病、发育不正常，甚至直接导致中毒者致病、发育不正常，甚至直接导致中毒死亡。农药残留超标也会影响农产品的贸死亡。农药残留超标也会影响农产品的贸易。易。第三页，共二十页。1、农药残留速测卡农药残留速测卡第四页，共二十页。检测原理检测原理胆碱酯酶可催化靛酚乙酸
3、酯红色水胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯红色水解为乙酸与靛酚蓝色，有机磷或氨解为乙酸与靛酚蓝色，有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。磷或氨基甲酸酯类农药的存在。第五页，共二十页。外表测定法粗筛法外表测定法粗筛法1.擦去蔬菜外表泥土，滴擦去蔬菜外表泥土，滴2-3滴洗脱液在滴洗脱液在蔬菜外表，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩蔬菜外表，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。擦。2.取一片农药残留检测取一片农药残留检
4、测卡，将蔬菜上的液卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。滴滴在白色药片上。3.放置放置10min以上进行预反响，预反响后以上进行预反响，预反响后的药片外表必须保持湿润。的药片外表必须保持湿润。4.将农药残留检测卡对折，用手捏将农药残留检测卡对折，用手捏3min，使红色药片与白色药片叠合发生反响。使红色药片与白色药片叠合发生反响。5.每批测定应设一个纯洁水的空白对照卡。每批测定应设一个纯洁水的空白对照卡。第六页，共二十页。整体农药残留检测法整体农药残留检测法1.选取有代表性的蔬菜样品，擦去外表泥选取有代表性的蔬菜样品，擦去外表泥土，剪成土，剪成1cm左右见方碎片，取左右见方碎片，取5g放入放入带盖瓶
5、中，参加带盖瓶中，参加10mL纯洁水，震摇纯洁水，震摇50次，次，静置静置2min以上。以上。2.取一片农药残留检测卡，用白色药片沾取取一片农药残留检测卡，用白色药片沾取提取液，放置提取液，放置10min以上进行预反响，预以上进行预反响，预反响后的药片外表必须保持湿润。反响后的药片外表必须保持湿润。3.将农药残留检测卡对折，用手捏将农药残留检测卡对折，用手捏3min，使红色药片与白色药片叠合发生反响。使红色药片与白色药片叠合发生反响。4.每批农药残留检测应设一个纯洁水的空白每批农药残留检测应设一个纯洁水的空白对照卡。对照卡。第七页，共二十页。农药残留检测结果判定：农药残留检测结果判定：与空白对
6、照卡比较，白色药片不变色或略与空白对照卡比较，白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果不合格，不变有浅蓝色均为阳性结果不合格，不变蓝为强阳性结果，说明农药残留量较高，蓝为强阳性结果，说明农药残留量较高，显浅蓝色为弱阳性结果，说明农药残留量显浅蓝色为弱阳性结果，说明农药残留量相对较低。白色药片变为天蓝色或与空白相对较低。白色药片变为天蓝色或与空白对照卡颜色相同，为阴性结果合格。对照卡颜色相同，为阴性结果合格。对阳性结果的样品，可用其它分析方法进对阳性结果的样品，可用其它分析方法进一步确定具体农药品种和含量。一步确定具体农药品种和含量。保存条件和有效期：保存条件和有效期：1、农药残留检测卡开封前需4
7、冷藏保存，保质期12个月。2、农药残留检测卡开封后可短时间4冷藏保存，应尽快用第八页，共二十页。检测下限检测下限农药残留速测卡对几种常用农药的最低检测限如下：甲胺磷1.7乙酰甲胺磷3.5水胺硫磷3.1对硫磷1.7乐果1.3久效磷2.5马拉硫磷2.0敌敌畏0.3敌百虫0.3呋喃丹0.5西维因2.5好年冬1.0氧化乐果2.3第九页，共二十页。2、霉抑制率分光光度法检测原理检测原理.在一定条件下在一定条件下,有机磷和氨基甲酸酯农药对人体胆有机磷和氨基甲酸酯农药对人体胆碱酯酶正常功能有抑制作用碱酯酶正常功能有抑制作用,其抑制率与农药浓度其抑制率与农药浓度呈正相关呈正相关.正常情况下正常情况下,酶催化神
8、经传导代谢产物酶催化神经传导代谢产物(乙酰胆碱乙酰胆碱)水解水解,其水解产物与显色剂反响其水解产物与显色剂反响,产生黄产生黄色物质色物质,通过测定通过测定412纳米处吸光度随时间的变化值纳米处吸光度随时间的变化值,计算出抑制率计算出抑制率.通过抑制率可以判断出样品中是否通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在.酶抑制法即用有机磷农药来抑制酶，使本可以由酶参与酶抑制法即用有机磷农药来抑制酶，使本可以由酶参与的显色反响失去颜色，而呈白色。抑制率即指有机磷农的显色反响失去颜色，而呈白色。抑制率即指有机磷农药抑制酶能力的强弱表示。药抑制
9、酶能力的强弱表示。第十页，共二十页。一、试剂配制1.缓冲液试剂：整包倒入大烧杯中，加1000mL纯洁水溶解，酸碱度为pH8.0，常温保存；2.乙酰胆碱酯酶：取一支酶粉加20mL缓冲溶液溶解，4冰箱中保存，一周内用完。也可将溶解后的酶液分成几个小瓶，将其冷冻，用时融化，但不能重复屡次冷冻、化解。3.显色剂：取一支显色剂参加20mL缓冲溶液，避光保存；4.底物：取一支底物加20mL缓冲溶液，摇匀后置4冰箱中保存；第十一页，共二十页。二、分析步骤1.样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉外表泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，非叶菜类取2g放入烧杯或提取瓶中，参加5mL缓冲溶液，手摇振荡12
10、分钟，或超声波振荡30秒钟，倒出提取液，静置35min，待用。2.对照溶液测试：先于试管中参加100微升酶液和100微升显色剂，再参加2.5mL缓冲溶液，摇匀后于37C放置15min，参加100微升底物摇匀，此时检液开始显色反响，应立即放入仪器比色池中，记录初始吸光度A1和反响3min时的吸光度A2，A2-A1=DA0。3.样品溶液测试：先于试管中参加100微升酶液和100微升显色剂，再参加2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录初始吸光度A1和反响3min时的吸光度A2，A2-A1=DAt。第十二页，共二十页。三、结果计算结果以酶被抑制的程度抑制率表示。抑制率%=DA0-DAt
11、/DA01001当蔬菜样品提取液对酶的抑制率50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检验2次以上。2对阳性结果的样品，可用其它方法进一步确定具体农药品种和含量。第十三页，共二十页。四、注意1.每批样品的控制时间、温度条件必须与对照溶液的条件完全一致。2.葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，不要剪的太碎。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也不要剪的太碎。3.当温度条件低于37C，酶反响的速度随之放慢，参加酶液和显色剂后放置反响的时间应相对延长，延长时间确实定，应以胆碱
12、酯酶对照溶液测试得到的吸光度A2-A10.3以上，即可往下操作。当对照溶液酶液的参加量大一些时，也可使A2-A10.3以上。4.当吸光度大到无法读取时，说明测定液浑浊有干扰。第十四页，共二十页。农药名称最低检测限农药名称最低检测限单位mg/kg敌敌畏0.01毒死蜱0.5灭多威0.1好年冬0.05马拉硫磷0.5敌百虫0.1辛硫磷0.1乐果1.0呋喃丹0.05甲胺磷0.2氧化乐果0.6对硫磷0.4第十五页，共二十页。3、农药残留速测仪速测原理利用速测卡中的胆碱酯酶白色药片可催化靛酚乙酸酯红色药片水解为乙酸与靛酚，由于有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的活性有抑制作用，使催化水解后的显色发生改变。根
13、据显色的不同，可以判断样品中含有有机磷残或氨基甲酸酯类农药的残留情况。第十六页，共二十页。速测范围主要用于蔬菜，水果，茶叶，粮食及水中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测，适用于农业生产基地，农贸市场，质量监督，卫生防疫，宾馆饭店等部门。第十七页，共二十页。速测步骤1.装入速测卡开机预热，开始测试2.加洗脱液、反响计时1粗筛法擦去蔬菜外表的泥土，在被测蔬菜正面接近叶尖部位滴两滴洗脱液，用另一只菜叶在滴液处轻轻摩擦，将菜叶上洗出的水滴，滴一滴在白色药片上，按“启动键，反响计时开始2整体测定法擦去水果外表的泥土，用刀切成1cm见方碎片，取5克放入三角瓶中，参加10ml萃取液，摇晃50次，静置2分钟后
14、待用，用滴管移取上述液，滴一滴在白色药片上，按“启动键，反响计时开始。3.加热、显色反响显色时间为3min。当屏幕显示亮点指示“提示，翻开仪器上盖。4.结果判定观察速测卡上白色药片上的颜色并与标准色卡进行比对，判断农药残留的强弱。蓝色表示农药为阴性，浅蓝色味弱阳性，白色表示农药为阳性。第十八页，共二十页。注意葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、蘑菇及番茄汁液中含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性，处理这些样品时，可采取整株蔬菜浸提或采用外表测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，可采用整株蔬菜浸提法，减少色素干扰。红色药片和白色药片叠合后，反响时间以3min为准，3min后蓝色会逐渐加深，24h后颜色会逐渐褪去。预反响后的药片外表必须保持湿润。第十九页，共二十页。内容总结农药残留的速测技术。甲胺磷1.7乙酰甲胺磷3.5。2.乙酰胆碱酯酶：取一支酶粉加20mL缓冲溶液溶解，4冰箱中保存，一周内用完。根据显色的不同，可以判断样品中含有有机磷残或氨基甲酸酯类农药的残留情况。观察速测卡上白色药片上的颜色并与标准色卡进行比对，判断农药残留的强弱。预反响后的药片外表必须保持湿润第二十页，共二十页。
