1、ICS65.100B13中华人民共和国国家标准GB/T31270.10-2014化学农药环境安全评价试验准则第10部分：蜜蜂急性毒性试验Test guidelines on environmental safety assessment for chemicalpesticides-Part 10:Honeybee acute toxicity test2014-10-10发布2015-03-11实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T31270.10-2014化学农药环境安全评价试验准则第10部分：蜜蜂急性毒性试验1范围GB/T31270的本部分规定了蜜
2、蜂急性经口毒性试验和急性接触毒性试验的材料、条件、操作、质量控制、数据处理、试验报告等的基本要求。本部分适用于为化学农药登记而进行的蜜蜂急性经口毒性试验和急性接触毒性试验，其他类型的农药可参照使用。本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1半致死剂量median lethal dose在急性经口试验或急性接触毒性试验中，引起50%的供试生物死亡时供试物剂量，用LD表示。注：单位为gi/嫌，2.2供试物test substance试验中需要测试的物质。2.3化学农药chemical pesticide利用化学物质人工合成的农药。其中有些以天然产品中的活
3、性物质为母体，进行仿制、结构改造，创新而成，为仿生合成农药。同义i词：有机合成农药synthetic organic pesticide。NY/T1667.1-2008,定义2.3.12.4原药technical material在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品，不能含有可见的外来物质和任何添加物，必要时可加入少量的稳定剂。NY/T1667.2-2008,定义2.5.12.5制剂formulation product由农药原药（或母药）和助剂制成使用状态稳定的产品。NY/T1667.2-2008,定义2.42.6有效成分active ingredient;a.i.农药产品中具有生
4、物活性的特定化学结构成分。NY/T1667.2-2008,定义3.11GB/T31270.10-20142.7参比物质reference substances在测试中为证实或否定供试物的某种特性或判断测试系统有效性而使用的化学物质或混合物。3试验概述3.1方法概述蜜蜂急性毒性试验包括急性经口毒性试验方法和蜜蜂急性接触毒性试验方法，根据农药登记管理法规及其他规定选择相关方法进行试验。3.2急性经口毒性将不同剂量的共试物分散在蔗糖溶液中，用以饲喂成年工蜂，并对药液的消耗量进行测定，药液消耗完后饲限不含供试物的蔗糖溶液。在48h的试验期间每天记录蜜蜂的中毒症状及死亡数，并求出24h和48h的LDo值
5、及95%置信限。3.3急性接触毒性在蜜蜂被麻醉后，将不同浓度试验药液点滴在试验用蜜蜂的中胸背板处，待溶剂挥发后，将蜜蜂转人试验笼中，用脱脂棉浸泡适量谁糖水饲喂。在48的试验期间每天记录蜜蜂的中毒症状及死亡数，并求出24h和48h的LDo值及95%置信限。4试验方法4.1材料和条件4.1.1供试生物试验用蜜蜂推荐使用意大利成年工蜂(Apis mellifera L.),供试鲨蜂应在清晨或前一日夜晚收集，避免在早春和晚秋季节进行蜜蜂试验，如果在早春和晚秋季节进行试险，要在试金环境下以蜂巢花粉饲吸一周：蜜蜂接受抗生素、抗螨虫药物后四周内不得用于试验。试验蜜蜂要求为健康、大小一致的个体。用于急性经口毒
6、性试验的蜜蜂应在试验前饥饿2h。4.1.2供试物农药制剂、原药或纯品。准溶于水的可用少量对蜜蜂苛性小的有机溶剂、乳化剂或分散剂助溶。4.1.3主要仪器设备主要仪器设备如下：一试验蜂笼；一电子天平：一人工气候室：微量点滴仪；一饲哏器等。4.1.4试验条件试验在温度25士2、相对湿度50%70%、黑暗条件下进行。GB/T31270.10-20144.2试验操作4.2.1急性经口毒性4.2.1.1预试验按正式试验的条件，以较大间距设置4个5个剂量组，通过预试验求出试验用蜂最高全存活剂量与量低全致死剂量。4.2.1.2正式试验根据预试验确定的浓度范围按一定比例间距（几何级差应控制在2.2以内）设置5个
7、7个剂量组，每组至少需10只蜜蜂，并设空白对照组，使用有机溶剂助溶的还需设置溶剂对照组。将贮蜂笼内的蜜蜂引入试验笼中，然后在饲喂器（如离心管、注射器等）中加入100L200L含有不同浓度供试物的50%(质量浓度)蔗糖水溶液，并对母组药液的消耗量进行测定。一旦药液消耗完（通常需要3一4），将食物容器取出，换用不含供试物的蔗糖水进行饲喂（不限量）。对于一些供试物，在较高试验剂量下，蜜蜂拒绝进食，从而导致食物消耗很少或几乎没有消耗的，最多延长至6山，并对食物的消耗量进行测定（即测定该处理的食物残存的体积或重量）。对照组及各处理组均设3个重复。观察记录处理2448h后的中毒症状和死亡数。在对照组的死亡
8、率低于10%的情况下，若处理24h和48h后的死亡率差异达到10%以上时，还需将观察时间最多延长至96h。4.2.1.3限度试验设置上限剂量100gai./蜂，即在供试物达100g8.i./蜂时仍未见蜜蜂死亡，则无需继续试验。如供试物溶解度小于100gai./蜂，则采用最大溶解度作为上限浓度。4.2.2急性接触毒性4.2.2.1预试验按正式试验的条件，以较大间距设置4个一5个剂量组，通过预试验求出试验用蜂最高全存活剂量与最低全致死剂量。4.2.2.2正式试验根据预试验确定的剂量范围按一定比例间距（几何级差应控制在2.2以内）设置5个7个剂量组，每个处理至少需10只蜜蜂。同时设空白对照组及溶剂对
9、照组，对照组及每一剂量组均设3个重复。供试物用丙酮等溶剂溶解，配制成不同浓度的药液。对准蜜蜂中胸背板处，用微量点滴仪分别点滴各浓度供试药液1.0uL2.0L,待蜂身晾干后转入试脸笼中，用50%（质量浓度）蔗糖水饲喂。观察记录处理24h,48h后的中毒症状和死亡数，在对照组的死亡率低于10%的情况下，若处理24h和48h后的死亡率差异达到10%以上时，还需将观察时间最多延长至96h。4.2.2.3限度试验设置上限剂量100ga,i./蜂，即在供试物达100ga,i./蜂时仍未见蜜蜂死亡，则无需继续试验。如供试物溶解度小于100gai./蜂，则采用最大溶解度作为上限浓度。4.2.3参比物质试验为检验实验室的设备、条件、方法及供试生物的质量是否合乎要求，设置参比物质作方法学上的可
