1、花药(花粉(hufn)培养,第一页，共二十五页。,花药和花粉培养(piyng)技术,花药培养是将花粉发育至一定阶段的花药(huyo)接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。,第一节 花药和花粉(hufn)培养技术,第二页，共二十五页。,花粉培养：是将花粉从花药中分离出来,接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而(jn r)分化成植株的过程。,油菜成熟花药(huyo)的结构,第一节 花药和花粉(hufn)培养技术,第三页，共二十五页。,一、花药和花粉(hufn)的培养方法：,（一）花粉发育时期：1、适宜(shy)时期：单核期,尤其是单核中、晚期(单核
2、靠边期),第一节 花药和花粉培养(piyng)技术,第四页，共二十五页。,2、花粉发育时期(shq)的检测：,外部形态观察：(单核靠边期的花粉)小麦旗叶和旗叶下一叶之叶耳距离约是515cm。烟草中，花蕾的花冠大约与萼片等长。压片染色法：是检测花粉发育时期的简便有效方法(fngf)，常用染色剂为醋酸洋红。,第一节 花药和花粉(hufn)培养技术,第五页，共二十五页。,（二）培养(piyng)过程,1 花药培养过程 1）预处理:低温冷藏是最常用(chn yn)的方法烟草79，714d黑麦13，714d,第一节 花药和花粉(hufn)培养技术,第六页，共二十五页。,（二）培养(piyng)过程,2）
3、表面消毒 用70%酒精(jijng)喷洒或擦拭花器或包被着麦穗的叶鞘表面，即可以达到灭菌的要求。,第一节 花药(huyo)和花粉培养技术,第七页，共二十五页。,（二）培养(piyng)过程,3）接种 在无菌的条件(tiojin)下把雄蕊上的花药从花丝上摘下，水平地放在培养基上进行培养。不要使花药受到损伤，否则会刺激花药壁形成二倍体愈伤组织。接种的“密度效应”，要有一个合理的群体数量。,第一节 花药和花粉培养(piyng)技术,第八页，共二十五页。,（二）培养(piyng)过程,4）培养形成花粉(hufn)植株。花粉-愈伤组织-苗 花粉-胚状体-苗,选幼年(yunin)树花蕾,第一节 花药和花粉
4、培养技术,第九页，共二十五页。,（二）培养(piyng)过程,4）培养形成花粉植株(zhzh)。培养方式：琼脂固化培养基表面培养 30%Ficoll的液体培养基表面漂浮培养 固-液双层培养,第一节 花药(huyo)和花粉培养技术,第十页，共二十五页。,水稻(shudo)花药培养过程：,旗叶鞘(yqio)用70酒精擦洗一遍,剥去旗叶鞘(yqio)，取出稻穗,10漂白粉10 min,无菌水洗3次,培养5天，花药变褐，20天后花药裂开，长出淡黄色的花粉愈伤组织，先长芽，后长根，形成幼苗。,用接种环接种到培养基上,左手持穗，右手用镊子取花药，放无菌培养皿中,第一节 花药和花粉培养技术,第十一页，共二十
5、五页。,花药培养脱毒技术(jsh),1974年日本：花药培养可以脱除草莓病毒；花药采取时期单核期：花蕾(huli)4-6mm，花药1mm花药诱导愈伤组织培养基MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L增殖分化培养基MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L生根培养基1/2MS+IBA0.2mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g+琼脂7g/L,第一节 花药和花粉培养(piyng)技术,第十二页，共二十五页。,草莓花药愈伤组织(zzh),花药植株,第一节 花药和花粉培养(piyng)技术,第十三页，共二十五页。,2、花粉
6、(hufn)培养,花粉培养(piyng)成苗途径与花药培养(piyng)比较:相同点：胚状体成苗途径、愈伤组织再分化成苗途径 不同点：花粉培养：需进行花粉的分离 特殊的花粉诱导培养,第一节 花药和花粉培养(piyng)技术,第十四页，共二十五页。,花粉培养(piyng)过程,取花蕾（镜检）,取花药,第一节 花药(huyo)和花粉培养技术,第十五页，共二十五页。,二、培养基,基本(jbn)培养基,激素(j s)种类和浓度,蔗糖(zhtng)浓度,第一节 花药和花粉培养技术,第十六页，共二十五页。,（一）基本(jbn)培养基：,B5培养基：适合(shh)豆科和十字花科花药培养；N6培养基：适合禾谷
7、类作物的花药培养。,第一节 花药和花粉培养(piyng)技术,第十七页，共二十五页。,第一节 花药(huyo)和花粉培养技术,细胞分裂素可促进胚状体形成；生长素可诱导(yudo)愈伤组织形成。细胞分裂素与生长素比值高时可诱导愈伤组织分化苗,（二）激素(j s)种类和浓度,第十八页，共二十五页。,较高浓度蔗糖可诱导花粉(hufn)形成愈伤组织；较低浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗。,第一节 花药和花粉培养(piyng)技术,（三）蔗糖(zhtng)浓度,第十九页，共二十五页。,三、单倍体植株(zhzh)染色体加倍的方法,第一节 花药(huyo)和花粉培养技术,1、自然加倍：花粉(hufn)细胞核有丝
8、分裂或核融合，染色体可自然加倍，获得纯合二倍体。2、人工加倍：用秋水仙素处理单倍体植物，可使染色体加倍（溶液浸苗、处理愈伤组织和用含0.4%秋水仙素的羊毛脂涂抹单倍体植株的顶芽、腋芽，可得到能结实的二倍体植株）3、将单倍体植株诱导的愈伤组织反复继代培养，再分化可得到二倍体植株。,第二十页，共二十五页。,花药(huyo)和花粉培养的应用-单倍体植株育种,1、克服后代分离，缩短育种周期；2、有利于筛选隐性突变体，选择(xunz)效率高;3、有利于隐性基因控制性状的选择4、快速获得自交系的超雄株,第二节 花药和花粉培养(piyng)的应用,第二十一页，共二十五页。,大大缩短育种(y zhng)周期,
9、第二节 花药和花粉(hufn)培养的应用,第二十二页，共二十五页。,(1)花药培养是器官培养，花粉培养属细胞培养。(2)花药培养一般选择花粉的单核期进行接种。(3)花药培养包括：选择材料(cilio)-消毒-接种培养-愈合组织生成-分化出单倍体植株。(4)花粉培养包括花粉的分离-预处理-培养过程。,本章(bn zhn)小结：,第二十三页，共二十五页。,第二十四页，共二十五页。,内容(nirng)总结,花药(huyo)(花粉)培养。烟草79，714d。黑麦13，714d。花粉-愈伤组织-苗。花粉-胚状体-苗。MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L。MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L。1/2MS+IBA0.2mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g+琼脂7g/L。胚状体成苗途径、愈伤组织再分化成苗途径,第二十五页，共二十五页。,
