1、GB/T18979一20032.2.15黄曲毒毒素标准品(黄曲毒毒素B1、B,、G1、G2):纯度99%。2.2.16黄曲霉毒素标准储备溶液:用苯-乙晴(98十2)溶液分别配制0.100mg/mL的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准储备液,保存于4C备用。2.2.17黄曲霉毒素混合标准工作液:准确移取适量的黄曲霉毒素B,B,、G、G:标准储备液,用苯-乙腈(98十2)溶液稀释成混合标准工作液。2.2.18柱后衍生溶液(0.05%碘溶液):称取0.1g碘,溶解于20mL甲醇后,加纯水定容至200mL,以0.45m的尼龙滤膜过滤,4C避光保存,2.3仪器和设备实验室常规仪器、设备及下列各项。2.
2、3.1高速均质器:18000r/min22000r/min,2.3.2黄曲霉毒素免疫亲和柱。2.3.3玻璃纤维滤纸:直径11cm,孔径1.5m。2.3.4玻鸦注射器:10mL,20mL。2.3.5玻璃试管:直径12mm,长75mm,无荧光特性。2.3.6高效液相色谐仪:具有360nm激发波长和大于420nm发射波长的荧光检测器。2.3.7空气压力泵。2.3.8微量注射器:100L。2.3.9色谱柱:Cs柱(柱长150mm,内径4.6mm,填料直径5m),2.4分析步骤2.4.1提取2.4.1.1大米、玉米、小麦、花生及其制品:准确称取经过磨细(粒度小于2mm)的试样25.0g于250mL具塞锥
3、形瓶中,加入5.0g氯化钠及甲醇-水(7十3)至125.0mL(V,),以均质器高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤,准确移取15.0mL(Vz)滤液并加人30.0mL(V)水稀释,用玻璃纤维滤纸过滤1一2次,至滤液澄清,备用。2.4.1.2植物油脂:准确称取试样25.0g于250mL具塞锥形瓶中,加入5.0g氯化钠及加入甲醇-水(7十3)至125.0mL(V),以均质器高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤,准确移取15.0mL(V2)滤液并加入30.0mL(V3)水稀释,用玻璃纤维滤纸过滤1一2次,至滤液澄清,备用。2.4.1.3酱油:准确称取试样50.0g于250.0mL具塞锥形瓶中,加入2.
4、5g氯化钠及加入甲醇-水(8十2)至100.0mL(V),以均质器高速搅排提取1min。定量滤纸过滤,准确移取10.0mL(Vz)滤液并加入40.0mL(V3)水稀释,用玻璃纤维滤纸过滤12次,至滤液澄清,备用。2.4.1.4食醋:准确称取5.0g样品,加入1.0g氯化钠,以pH7.0磷酸盐缓冲容液稀释至25.0mL(V1),混匀,定量滤纸过滤。取10.0mL(Vz)滤液加入10.0mL(V)级冲液,混匀,以玻瑞纤维滤纸过滤1一2次,至滤液澄清,备用。2.4.2净化2.4.2.1大米、玉米、小麦、花生及其制品、植物油脂:将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确移取15.0mL(V,)样
5、品提取液注入玻璃注射器中,将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2mL3mL空气通过柱体。以10mL水淋洗柱子两次,弃去全部流出液,并使2mL3mL空气通过柱体。准确加人1.0mL(V)色谐级甲醇洗脱,流速为1mL/min一2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。2.4.2.2酱油:将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL(V,)酱油样品提取液注入玻璃注射器中,将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约6mL/i流速级慢通过免疫亲和柱。用10mL0.1%的吐温-20/PBS清洗,再以10mL水清洗柱子两次,弃去全部流出液,并使2mL3mL空气通过柱体。准确加人1.0mL(V)色谱级甲醇洗脱,流速为1mL/min2mL/min,2