1、安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）高通量测序技术联合瞬态诱发性耳声发射技术在新生儿遗传性聋筛查中的应用价值研究刘咏梅，冯会颖，殷美乐，李文，桑艳峰作者单位：承德市中心医院新生儿科，河北 承德，067000通信作者：桑艳峰，女，副主任医师，研究方向为临床医疗，Email：基金项目：河北省科学技术与发展研究课题计划（201706A026）摘要：目的 探究高通量测序（NGS）技术联合瞬态诱发性耳声发射（TEOAE）技术在新生儿遗传性聋筛查中的应用价值。方法 采用整群随机抽样方法，根据纳入、排除标准选取2018
2、年1月至2020年10月承德市中心医院625例新生儿作为研究对象，均于出生后37 d内行新生儿遗传性聋筛查，筛查方法采用NGS技术和TEOAE技术，并于出生后1个月、2个月采用TEOAE技术进行第1、2次复筛，统计NGS技术、TEOAE技术筛查结果，分析NGS技术联合TEOAE技术筛查新生儿遗传性聋的价值。结果 本组共纳入625例新生儿，NGS技术筛查结果显示6.08%存在耳聋基因异常，主要为GJB2基因（2.40%）、SLC26A4基因（2.72%）异常，0.80%存在2个耳聋基因位点异常；TEOAE技术初筛8.48%的新生儿未通过，第1次、2次复筛未通过率分别为 6.40%、5.12%；N
3、GS技术、TEOAE技术筛查新生儿遗传性聋的曲线下面积（AUC）分别为 0.920、0.880，二者联合筛查的AUC最大，为0.976，联合筛查的灵敏度、特异度分别为95.65%、99.50%。结论 NGS技术、TEOAE技术均为新生儿遗传性聋筛查的有效方法，二者联合能有效提高筛查效能，减少误诊漏诊。关键词：先天性遗传性新生儿疾病和畸形；聋；新生儿筛查；瞬态诱发性耳声发射技术；高通量核苷酸序列分析Study on the application value of high-throughput sequencing combined with transient evoked otoacous
4、tic emission technology in the screening of newborns for genetic deafnessLIU Yongmei,FENG Huiying,YIN Meile,LI Wen,SANG YanfengAuthor Affiliation:Department of Neonatology,Chengde Central Hospital,Chengde,Hebei 067000,ChinaAbstract：Objective To explore the application value of high-throughput sequen
5、cing(NGS)technology combined with transient evoked otoacoustic emission(TEOAE)technology in the screening of neonatal hereditary deafness.Methods Six hundred and twenty-five newborns in Chengde Central Hospital from January 2018 to October 2020 was selected as subjects by a whole-group random sampli
6、ng method according to the inclusion and exclusion criteria,all of them were screened for neonatal genetic deafness within 3-7 d after birth,and the screening methods were NGS technique and TEOAE technique,and the 1st and 2nd re-screening was performed by TEOAE technique at 1 and 2 months after birt
7、h.The results of the NGS and TEOAE screening were calculated and the value of the NGS technique combined with the TEOAE technique in screening newborns for hereditary deafness was analyzed.Results A total of 625 newborns were included in this group.The NGS technology screening results showed that 6.
8、08%had deafness gene abnormalities,mainly GJB2 gene(2.40%),SLC26A4 gene(2.72%)abnormality,0.80%had 2 deafness loci Abnormal points;8.48%of newborns failed the initial screening of TEOAE technology,and the failure rates of the first and second re-screening were 6.40%and 5.12%respectively;the area und
9、er the curve(AUC)of NGS technology and TEOAE technology in screening newborns for hereditary deafness were 0.920 and 0.880,respectively.The combined screening of the two had the largest AUC,which was 0.976.The sensitivity and specificity of the combined screening were 95.65%and 99.50%,respectively.C
10、onclusion NGS technology and TEOAE technology are both effective methods for neonatal hereditary deafness screening.The combination of the two can effectively improve the screening efficiency and reduce misdiagnosis and missed diagnosis.Key words：Congenital,hereditary,and neonatal diseases and abnor
11、malities;Deafness;Neonatal screening;Transient evoked otoacoustic emission technology;High-throughput nucleotide sequencing耳聋是常见的单基因遗传病，也是常见的出生缺陷之一，我国新生儿耳聋的发生率约为 13，高危新生儿听力障碍发生率则高达2%4%，且高危新生儿发生迟发性听力损失的风险更高，每临床医学引用本文：刘咏梅，冯会颖，殷美乐，等.高通量测序技术联合瞬态诱发性耳声发射技术在新生儿遗传性聋筛查中的应用价值研究 J.安徽医药，2023，27（7）：1359-1363.DOI
12、：10.3969/j.issn.1009-6469.2023.07.019.1359安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）年约有3万重度听障新生儿出生1-2。因此尽早对新生儿开展听力筛查非常有必要。高通量测序（NGS）技术是近些年发展起来的新型DNA测序技术，目前广泛应用于新生儿遗传性疾病的筛查中，但部分新生儿虽存在耳聋基因异常，但现阶段对声音反应较好，与筛查结果不符3。瞬态诱发性耳声发射（TEOAE）技术是目前国内外筛查新生儿耳聋的常用方法之一，具有测试简便、灵敏度高等优势，但单独采用TEOAE对高危新生
13、儿进行听力筛查时，仍然会丢失部分病儿有听力障碍的检查信息，造成漏诊4-5。基于此，本研究尝试探讨NGS技术联合TEOAE技术在新生儿遗传性聋筛查中的应用价值，报告如下。1资料与方法1.1一般资料采用整群随机抽样方法，根据纳入排除标准选取2018年1月至2020年10月承德市中心医院625例新生儿作为研究对象，男419例，女206例；分娩孕周（38.261.62）周，范围为3542周；出生体质量（3.860.65）kg，范围为2.35.2 kg；剖宫产218例，顺产407例；新生儿轻度窒息52例，新生儿重度窒息18例，无新生儿窒息555例；有家族耳聋史20例。本研究获承德市中心医院伦理委员会批准
14、 批号院科伦审（2017）伦审第（1162）号，所有新生儿近亲属均知晓本研究，已签署知情同意书。排除不愿参与筛查者。1.2方法所有新生儿均于出生后37 d内采用NGS技术和TEOAE技术行新生儿耳聋筛查，并于出生后1个月、2个月采用TEOAE技术进行第1、2次复筛。NGS技术筛查方法：采集新生儿足跟血制成8 mm 的干血斑，于 4 保存，采用 Mag Pure Blood DNA LQ Kit 提取干血斑中的模板基因组DNA，并利用Qubit荧光计（赛默飞世尔科技）进行定量分析。采用引物-特异性标签序列进行多重PCR技术构建DNA文库并定量，利用OneTouch2自动化乳液PCR仪扩增测序模板
15、并使用ES磁珠纯化仪进行富集，采用BioelectronSeq 4000高通量测序仪（北京博奥生物有限公司）测序，共检测18个常见耳聋基因的共100个位点。采用 Ion PI Hi-Q Sequencing 200Kit 试剂盒，检测操作严格按照说明书进行。TEOAE技术筛查方法：先行外耳道检查，将新生儿外耳道分泌物、胎脂等清除，待新生儿睡着后进行检查，要求检查环境噪声40 dB（A），采用Accu-Screen便携式耳声发射仪（丹麦MADSEN公司生产），参数设置：疏波短声刺激，脉宽80 s，非线性给声测试频率1.54.5 KHZ，刺激强度7084 dB最小声压级。将大小合适的耳塞置入外耳道
16、，并与筛查仪探头连接，耳塞尖端小孔正对鼓膜，必要时放置于外耳道外1/3处，开始测试，筛查仪自动显示结果（PASS为通过，REFER为未通过），并分别于出生后1、2个月进行复筛。听力诊断：NGS技术筛查和TEOAE技术复筛中有一种未通过者，需要在出生后36个月转诊至省级卫生行政部门指定的听力障碍诊治机构接受进一步诊断，新生儿重症监护病房婴儿出院前行自动听性脑干反应（AABR）筛查，未通过者直接转诊至听力障碍诊治机构。诊断流程：（1）病史采集；（2）耳鼻喉科检查；（3）听力测试，包括电生理、行为听力测试，主要为声导抗（含1 000 Hz探测音）、耳声发射（OAE）、听性脑干反应（ABR）及行为测听等疾病测试；（4）辅助检查，必要时进行相关影像学和实验室辅助检查。仪器分别为：诊断型听觉诱发电位仪（美国智听听觉诱发电位仪 SmartEP M010000），诊断型耳声发射仪（美国智听耳声发射仪SmartOAE），诊断型声导抗仪（日本理音声导抗仪RS-H1），诊断型听力计（麦力声听力计AD104）。AABR恒定强度35 dB 小样本听力级，测听标准：测听方法按照GB/T16403-1996国家标准
