1、高效液相色谱法测定芦丁片的溶出度及溶出行为评价马燕，李海霞，刘莹德州市食品药品检验检测中心(山东 德州 253015)摘要目的:建立芦丁片溶出度检验方法，对不同厂家 4 批样品进行溶出行为评价。方法:采用 HPLC 法，使用Kromasil C18 柱(250mm46mm，5m)，以甲醇04%磷酸(50 50)(用三乙胺调节 pH 至 30)为流动相;流速 08mLmin1，检测波长为 254nm，柱温 30，进样量 20L;溶出度试验采用桨法，转速 75rmin1，溶出介质为 900mL 磷酸盐缓冲液(pH80)。结果:在本文试验条件下，芦丁在 24969984gmL1(r=09999)范围
2、内呈现良好的线性关系，检测限为:001gmL1;定量限为 004gmL1;本溶出度测定方法很好地反映了 4 批样品溶出行为的不同。结论:本文建立的芦丁片溶出度测定法专属性强、简便准确、区分度好，可为芦丁片提升检验标准以及提高药品内在质量提供可靠参考。关键词:芦丁片;溶出度测定法;HPLC 法;溶出行为评价中图分类号:9272文献标识码:A文章编号:10062882(2023)0358904DOI:1014035/jcnkihljyy202303027Determinition of the Dissolution in utin Tablets by HPLCof Evaluation of
3、Dissolution BehaviorMa Yan，et alDezhou Food and Drug Inspection Center(Dezhou Shandong 253000)Abstract Objective:To establish a dissolution test method for rutin tablets and evaluate the dissolution behavior of 4 batches ofsamples from different manufacturers Methods:HPLC method was used in a Kromas
4、il C18 column(250mm 46mm，5m)with(内文见下页)40李娜，邵辉，刘磊，等中药材黄芪中有机磷农药残留量的超高效液相色谱串联质谱法研究J 药物分析杂志，2012，32(05):852856 41Martyniuk CJ，Mehinto AC，Denslow ND Organochlorine pesti-cides:agrochemicals with potent endocrinedisrupting propertiesin fishJMol Cell Endocrinol，2020，507:110764 42蒋开年，宋学伟，崔志斌，等气相色谱法测定黄芪甘草中有
5、机氯农药残留量J西南民族大学学报(自然科学版)，2008，01:120123 43朱日然，瀚海洋，朱宗民黄芪中有机氯类农药残留量的毛细管气相色谱测定 J齐鲁药事，2009，28(11):662664 44Fu H，Tan P，Wang，et al Advances in organophosphorus pesti-cides pollution:Current status and challenges in ecotoxicological，sustainable agriculture，and degradation strategiesJ J HazardMater，2022，424:
6、127494 45Mishra S，Pang S，Zhang W，et al Insights into the microbial deg-radation and biochemical mechanisms of carbamatesJ Chemo-sphere，2021，279:130500 46Bhatth P，Zhou X，Huang Y，et al Characterization of the role ofesterases in the biodegradation of organophosphate，carbamate，and pyrethroid pesticides
7、 JJ Hazard Mater，2021，411:125026 47梁祈，颜庆嫦中药材黄芪中氨基甲酸酯农药残留量的毛细管气相色谱法测定 J 分析测试学报，1999，2:6769 48夏卉芳，王毓贵州地区药食同源动物资源开发应用研究进展 J现代医药卫生，2019，35(16):24732475 49予辑药食同源原料目录(2017 版)J口腔护理用品工业，2017，27(06):2428 50郝佳伟，董田，高少康，等黄芪中氟啶虫酰胺和除虫菊素残留量及膳食风险评估 J 农药，2021，60(08):591595收稿日期:20230317作者简介:白海斌，男，在读本科生，研究方向为中药学。通信作者:
8、綦峥，女，副研究员，研究方向为环境科学与工程。985黑龙江医药Heilongjiang Medicine Journal Vol36 No3 2023methanol04%phosphoric acid(50 50)(pH was adjusted to 30 with triethylamine)as mobile phases The flow rate was 08 mL min1，the detection wavelength was 254nm，the column temperature was 30，and the sample size was 20L Disso-lutio
9、n test was carried out by paddle method，the speed was 75rmin1，and the dissolution medium was 900mL phosphatebuffer(pH80)esults:The linear range of rutin was 2496 9984gmL1(r=09999)，and the detection limit was 001gmL1 The limit of quantitation was 004gmL1 This method can well reflect the different dis
10、solution behavior of four batches ofsamples Conclusion:The established method for the dissolution determination of rutin tablets is specific，simple，accurate and hasgood differentiation，which can provide a reliable reference for improving the test standard of rutin tablets and improving the internalq
11、uality of drugsKey words:utin tablets;High performance liquid chromatography;Dissolution;Evaluation of dissolution behavior芦丁片是止血药，主要功效用于血管脆性增加导致的出血，也用于高血压脑病、脑出血等的辅助治疗1。芦丁片的现行标准 WS150(B)892 中检查项下仅有崩解时限，没有溶出度检验项目，国内外文献中未见报道，本实验首次建立了芦丁片的溶出度方法，且对 4 批不同厂家芦丁片的溶出行为进行评价，可为芦丁片体外溶出评价和仿制药一致性评价提供参考。1仪器与试药Agile
12、nt 708DS 溶出度测定仪、包括 850DS 取样系统，(Agilent Technology Co，Ltd)，Agilent 1260 高效液相色谱仪、包 括 Agilent 色 谱 工 作 站 和 紫 外 检 测 器(AgilentTechnology Co，Ltd);XS105DU 型电子天平(Swiss companyMettler Toledo);DTC27 型超声仪(鼎泰公司)。芦丁对照品(来自中国食品药品检定研究院，批号:100080201811 供 HPLC 法测定，含量为 917%);4 批样品，规格:20mg(厂家 a;厂家 b;厂家 c;厂家 d);水(纯化水)，十二
13、烷基硫酸钠(SDS)(A)、磷酸二氢钾(A)，氢氧化钠(A)，甲醇为色谱纯。2方法与结果21溶液的制备芦丁对照品溶液:取芦丁对照品适量，精密称定，加 50%甲醇溶液溶解，定量稀释制成每 1mL 中约含 01mg 的溶液，作为芦丁对照品贮备液，精密量取储备液 5mL，置 25mL 量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH80)稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液。供试品溶液:取样品研细，精密称定适量(约相当于芦丁 20mg)，置 200mL 量瓶中，加 50%甲醇约 150mL，超声20min，振摇 20min，溶解，冷却，加 50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5mL，置 25mL 量瓶中
14、，用磷酸盐缓冲液(pH80)稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。空白辅料溶液:精密称取芦丁片空白辅料细粉适量，按供试品溶液配制方法配制。22方法的建立221色谱条件色谱柱:Kromasil C18 柱(250mm46mm，5m);流动相:甲醇04%磷酸(50 50)(用三乙胺调节 pH至 30);流速:08mLmin1;检测波长:254nm;柱温:30;进样量:20L。按照该色谱条件，芦丁峰的保留时间为 69min，见图 1。A空白辅料溶液;B对照品溶液;C供试品溶液;1芦丁图 1HPLC 色谱图222精密度试验取芦丁对照品溶液进样 6 次，测得芦丁峰面积(75425，75714，75522，7
15、5589，75457，75396)，SD=02%(n=6)，说明精密度良好。223检测限与定量限取芦丁对照品溶液用磷酸盐缓冲液(pH80)不断稀释并进样测定，按 3 倍信噪比(S/N=3)时的浓度确定芦丁检测限为 001gmL1。按 10 倍信噪比(S/N=10)时的浓度确定芦丁定量限为 004gmL1。224线性考察精密量取芦丁对照品贮备液 050，100，200，500，1000，2000mL 分别置 25mL 量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH80)稀释至刻度，摇匀，作为线性考察用测定溶液。进样量均为 20L，记录色谱图。以对照品溶液峰面积为纵坐标(A)，浓度为横坐标(C，gmL1)，进行计算
16、，芦丁线性回归方程为:A=49409C12876，r=09999。结果说明芦丁在 24969984gmL1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。225重复性试验分别精密称取厂家 b 样品细粉适量(相当于芦丁 20mg)6 份，按“21”项下供试品溶液配制方法配制，分别进样测定，计算含量分别为 9985%，99095黑龙江医药Heilongjiang Medicine Journal Vol36 No3 202379%，9966%，10002%，10013%，10006%，平均含量为999%，SD=04%(n=6)，实验结果说明此方法重复性较好。226回收率试验根据芦丁片的处方比例，按样品标示量 50%，80%，100%分别精密称取芦丁对照品及空白辅料各3 份，按“21”项下分别配制，按“221”项下色谱条件测定，计算回收率，结果平均回收率为 1002%，SD=03%(n=9)。结果见表 1。表 1回收率试验结果(n=9)样品加入量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)SD(%)50%110051008100302100110061005039929971004080%1160
