1、高效液相色谱法同时测定口服液体制剂中 8 种防腐剂郭智聪，黄婉锋，蔡金莲，谭彩花(佛山市食品药品检验检测中心，广东佛山 528000)摘要:目的建立高效液相色谱法同时测定口服液体制剂中苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、对羟基苯甲酸丁酯 8 种防腐剂含量的方法。方法Agilent ZOBAX Extend XDB-C18(4.6 250 mm，5 m)，流动相 A 为 20 mmolL1乙酸铵;流动相 B 为甲醇，梯度洗脱，流速1 mLmin1，检测波长230 nm 和254 nm，柱温30，进样量10 L。结果方法线性范围在0.2 20 gmL1，相关系数
2、 20.9992，检出限(S/N=3)为 0.007 0.1 gmL1，加标平均回收率为 99.4%100.2%(SD 为 0.1%0.5%)。结论方法操作简单，灵敏度高，适用于口服液体制剂中防腐剂含量检测。关键词:高效液相色谱法;口服液体制剂;苯甲酸;脱氢乙酸;防腐剂中图分类号:927文献标识码:A文章编号:1006-3765(2023)-04-0031-04作者简介:郭智聪，男(1984 )。学历:大学本科。职称:主管药师。研究方向为药品、化妆品、医疗器械相关检验工作。Simultaneous Determination of Eight Preservatives in Oral Liq
3、uid Prepara-tions by High Performance Liquid ChromatographyGUO Zhi-cong，HUANG Wan-feng，CAI Jin-lian，TAN Cai-hua(Foshan food and drug inspection and tes-ting center，Foshan 528000，China)ABSTACT:OBJECTIVETo establish a HPLC method for simultaneous determination of 8 preservatives in oralliquid preparat
4、ions，including benzoic acid，sorbate，dehydroacetic acid，benzyl alcohol，methyl parabens，hydroxyphe-nylate，hydroxypropyl parabens and butyl parabens.METHODSAgilent Zorbax extend xdb-C18(4.6 250 mm，5m)，mobile phase A was 20 mmolL1ammonium acetate.Mobile phase B was methanol，gradient elution，flowrate 1 m
5、Lmin1，detection wavelength 230 nm and 254 nm，column temperature 30，injection volume 10 L.ESULTSThe linear range of the method was 0.2 20 gmL1，linear correlation coefficient 20.9992，de-tection limit(S/N=3)was 0.007 0.1 gmL1，the average recovery of spiked standard was 99.4%100.2%(SD was 0.1%0.5%).CONC
6、LUSIONThe method is simple，sensitive and suitable for the determination ofpreservatives in oral liquid preparations.KEY WODS:High performance liquid chromatography;Oral liquid preparations;Benzoic acid;Dehydroacetic acid;Preservative口服液体制剂(此文指口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂)因其含水分比例比较高，易被微生物污染，特别是含蛋白质和糖类等营养物质的品种，更易引
7、起微生物的滋长和繁殖。为了抑制液体制剂中微生物的生长和繁殖，延长其保质期，生产企业往往会添加一定量的防腐剂。防腐剂作为口服液体制剂中的一个重要组分，大多数情况下是安全的。但这些防腐剂本身存在着一定的刺激性、毒性，过量被人体吸收后会直接产生副作用，危害人们的身体健康1。目前国内生产口服液体制剂的企业众多，其产品存在不合理使用防腐剂的情况，比如超量使用、标注或不标注使用、与标注不符等，所添加防腐剂的成分和含量有待分析。虽有文献报道2对药品口服液制剂中常用防腐剂如苯甲酸、山梨酸、羟基苯甲酸酯类等的含量测定方法，但其方法没有涉及到苯甲醇和脱氢乙酸，因此，建立一种简单、快速并同时适用于多品种多种类防腐剂
8、的含量检测方法，并对其用量加于限制，对公众用药安全具有重大意义。本研究建立高效液相色谱法同时测口服液体制剂中 8种防腐剂的方法，并对市售的 9 个品种 11 批次的口服液体制剂进行防腐剂测定与分析。1材料与实验方法1.1材料1.1.1供试品:所有供试品均为市场在售产品，其名称、编号、批号、防腐剂标注情况详见表 1。1.1.2仪器、标准品及试剂:戴安 U3000 高效液相色谱仪(二极管阵列检测器 DAD)、METTLE AB135-S 电子天平、KQ-250B 超声波清洗器;苯甲酸钠(批号:100433-202103)、山梨酸(批号:190126-202102)、对羟基苯甲酸甲酯(批号:1002
9、78-201906)、羟苯乙酯(批号:100847-202105)、羟苯丙酯(批号:100444-202005)、对羟基苯甲酸丁酯(批号:110792-2005503)、脱氢乙酸(CAS:520-45-6)，以上除脱氢乙酸由北京索莱宝科技有限公司提供外，其余来源于中国食品药品检定研究院;甲醇为色谱纯，乙酸铵为分析纯，超纯水。1.2实验方法13Strait Pharmaceutical Journal Vol.35 No.4 20231.2.1色谱条件与系统适用性试验:色谱柱 ZOBAX ExtendXDB-C18(4.6 250 mm，5 m);流动相 A 为 20 mmolL1乙酸铵;流动相
10、 B 为甲醇;梯度洗脱:0 min，A-B(955);23 min，A-B(8911);60 min，A-B(2575);65 min，A-B(955);进样量10 L;柱温30;流速1 mLmin1;检测波长:230 nm、254 nm。表 1供试品名称、编号、批号、防腐剂标注情况编号供试品名称批号防腐剂标注情况01蛇胆川贝液20060苯甲酸钠02橘红痰咳液20201244苯甲酸钠、羟苯乙酯03治咳枇杷液200701苯甲酸04右美沙芬愈创甘油醚糖浆20020217苯甲酸、枸橼酸05氯雷他定糖浆20211101苯甲酸钠、枸橼酸06阿胶益寿口服液200721苯甲酸钠07阿胶益寿口服液201236
11、苯甲酸钠08急支糖浆22010086苯甲酸、山梨酸钾09阿奇霉素糖浆20211101/10复方阿胶浆2110040/11阿胶益寿口服液202111057/注:表 1 中“/”表示供试品包装上未标注防腐剂名称;同一厂家不同品牌;与不同厂家在此色谱条件下，8 种防腐剂色谱峰之间或与相邻杂质峰的分离度均大于 1.5，理论板数均大于 6500，拖尾因子均在 0.951.05 范围内。1.2.2标准溶液制备:精密称取苯甲酸钠、山梨酸、脱氢乙酸、苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、对羟基苯甲酸丁酯对照品 10 mg，分别置 50 mL 容量瓶，加甲醇溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为储备对照品溶
12、液;精密量取储备对照品溶液各 5 mL 置同一 50 mL 容量瓶，加甲醇溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制备成 20.0 gmL1的溶液，作为混合对照品溶液。精密量取混合对照品溶液，配制成 0.2、1.0、5.0、10、15、20 gmL1的系列标准工作溶液。1.2.3供试品溶液制备:精密量取供试品溶液适量，分别置50 mL 容量瓶，用 30%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即可。2结果与分析2.1标准曲线和检出限取 1.2.2 中的系列标准品工作溶液(0.2 20 gmL1)按 1.2.1 色谱条件进行分析，以各标准品浓度(X)为横坐标，其对应的峰面积(Y)为纵坐标建立标准曲线，8 种防腐剂的相关
13、系数(r2)均达到 0.9992 以上;取1.2.2 中的储备对照品溶液，逐级稀释至各标准品峰高达到 3倍信噪比，得出检出限。8 种防腐剂线性方程、线性范围、相关系数、检出限(见表 2)。表 28 种防腐剂的线性方程、线性范围、相关系数、检出限(n=6)防腐剂名称线性方程线性范围(gmL1)相关系数(2)检出限(gmL1)苯甲酸钠y=0.4744x+0.06060.2 200.99990.05山梨酸y=1.5358x 0.14430.2 200.99950.04脱氢乙酸y=0.5085x 0.05120.2 200.99920.1苯甲醇y=12.961x 0.00070.2 200.99930
14、.015对羟基苯甲酸甲酯y=0.8466x 0.03670.2 200.99960.007羟苯乙酯y=0.8426x 0.03970.2 200.99950.007羟苯丙酯y=0.7537x 0.01470.2 200.99940.007对羟基苯甲酸丁酯y=0.7207x 0.02220.2 200.99910.0072.2精密度考察精密量取 1.2.2 的混合对照品溶液，连续进样 6 次，记录峰面积，苯甲酸钠、山梨酸、脱氢乙酸、苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的 SD 分别为 0.3%、0.2%、0.3%、0.1%、0.2%、0.2%、0.2%、0.4%。2.3
15、重复性和稳定性精密量取供试品氯雷他定糖浆 1.0mL 共 6 份，分别置 50 mL 容量瓶中，加 30%甲醇稀释至刻度，过滤，进样分析。测得苯甲酸钠含量的 SD 为 0.5%。取上述溶液其中一份于室温下放置 0、2、4、8、10、24 h，按 1.2.1色谱条件进样分析，测得苯甲酸峰面积 SD 为 0.6%。2.4加标回收率试验精密量取已知含量的供试品 1.0 mL共 6 份，分别置 50 mL 容量瓶中，分别精密加入 1.2.2 下的储备对照品溶液(200.0 gmL1)0.5 mL，加 30%甲醇稀释至刻度，过滤，按 1.2.1 色谱条件下进样分析。结果见表 3。2.5样品分析精密量取
16、36 批供试品 1.0 mL，分别置 50mL 容量瓶中，加30%甲醇稀释至刻度，过滤，按1.2.1 色谱条件下进样分析。对照品及典型样品色谱图见图 1，结果见表4。表 38 种防腐剂的加标回收率及 SD(n=6)防腐剂名称样品含量(mgmL1)加入量(mgmL1)平均回收率(%)SD(%)苯甲酸钠1.81600.1035299.60.5山梨酸/0.10244100.20.2脱氢乙酸/0.10198100.00.3苯甲醇/0.1003299.40.3对羟基苯甲酸甲酯/0.1010499.80.1羟苯乙酯/0.10172100.10.3羟苯丙酯/0.10326100.00.5对羟基苯甲酸丁酯/0.0995099.90.5注:表 3 中“/”表示供试品不含此类防腐剂23海峡药学2023 年第 35 卷 第 4 期图 1对照品及典型样品色谱图表 436 批供试品防腐剂成分分析(%)样品编号苯甲酸钠山梨酸脱氢乙酸苯甲醇对羟基苯甲酸甲酯羟苯乙酯羟苯丙酯防腐剂种类标注是否一致010.2826是020.29360.05140.03490.0004否030.26510.00040.03310.0003
