1、GB/T5009.22-2003E=4484681nns(1）c式中：E一重铬酸钾溶液的摩尔消光系数；A一测得重铬酸钾溶液的吸光度；c一重铬酸钾溶液的摩尔浓度。再以此平均值与重铬酸钾的摩尔消光系数值3160比较，即求出使用仪器的校正因素，按式(2)进行计算。f=3160E式中：F一使用仪器的校正因素：E一测得的重铬酸抑摩尔消光系数平均值。若f大于0.95或小于1.05，则使用仪器的校正因素可路而不计。3.14.2黄曲霉毒素B,标准溶液的制备：准确称取1mg1.2mg黄曲毒毒素B标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100mL,避光，置于4冰箱保存。该标准溶液约为10g/mL。用紫外分光光
2、度计测此标准溶液的最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值。结果计算：黄曲露毒素B标准溶液的浓度按式(3)进行计算。X=AX MX1000 x f44440n4n940nnn944an(3）E2式中：X一黄曲霉毒素B标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(g/L):A一测得的吸光度值：f一使用仪器的校正因素：M一黄曲霉毒素B,的分子量312：E一黄曲霉毒素B,在苯-乙腈混合液中的摩尔消光系数19800。根据计算，用苯-乙睛混合液调到标准溶液浓度恰为10.0业g/L,并用分光光度计核对其浓度。3.14.3纯度的测定：取5L10g/mL黄曲霉毒素B标准溶液，滴加于涂层厚度0.25mm的硅胶G薄层板上，用甲醇-
3、三氯甲烷(4十96)与丙围-三氯甲烷(8十92)展开剂展开，在紫外光灯下观察荧光的产生，应符合以下条件：3.14.3.1在展开后，只有单一的荧光点，无其他杂质荧光点，3.14.3.2原点上没有任何残留的荧光物质。3.15黄曲霉毒素B,标准使用液：准确吸取1mL标准溶液(10g/mL)于10mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于1.0g黄曲霉毒素B,。吸取1,0mL此稀释液，置于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液稀释至刻度，此溶液每毫升相当于0.2g黄曲霉毒素B。再吸取黄曲霉毒素B标准溶液(0.2g/mL)1.0mL置于5mL容量瓶中，加苯-乙晴混合液稀释至刻度。此溶液每毫
4、升相当于0.04g黄曲霉毒素B,3.16次氯酸钠溶液（消毒用）：取100g漂白粉，加入500mL水，搅拌均匀。另将80g工业用碳酸钠(Na,CO:10H,O)溶于500mL温水中，再将两液混合、搅并，澄清后过滤。此滤液含次氯酸浓度约为25g/L。若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍。所得溶液的浓度约为50gL。污染的玻璃仪器用10gL次氯酸钠溶液浸泡半天或用50g/L次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果。4仪器4.1小型粉碎机。2GB/T5009.22-20034.2样筛。4.3电动振荡器。4.4全玻璃浓缩器。4.5玻璃板：5cmX20cm。4.6薄层板涂布器。4.7展开槽：内长25cm、
5、宽6cm,高4cm。4.8紫外光灯：100W125W,带有波长365nm滤光片。4.9微量注射器或血色素吸管。5分析步骤5.1取样试样中污染黄曲毒毒素高的毒粒一粒可以左右测定结果，而且有毒毒粒的比例小，同时分布不均匀。为避免取样带来的误差，应大量取样，并将该大量试样粉碎，混合均匀，才有可能得到确能代表一批试样的相对可靠的结果，因此采样应注意以下几点。5.1.1根据规定采取有代表性试样。5.1.2对局部发霉变质的试样检验时，应单独取样。5.1.3每份分析测定用的试样应从大样经粗碎与连续多次用四分法缩减至0.5kg1kg,然后全部粉碎。粮食试样全部通过20目筛，混匀。花生试样全部通过10目筛，混匀
6、。或好、坏分别测定，再计算其含量。花生油和花生酱等试样不需制备，但取样时应搅拌均匀。必要时，每批试样可采取3份大样作试样制备及分析测定用，以观察所采试样是否具有一定的代表性。5.2提取5.2.1玉米、大米、麦类、面粉、薯干、豆类、花生、花生酱等5.2.1.1甲法：称取20.00g粉碎过筛试样（面粉、花生酱不需粉碎），置于250mL具塞锥形瓶中，加30L正己烷或石油碰和100mL甲醇水溶液，在瓶塞上涂上一层水，盖严防漏。振荡30min,静置片刻，以叠成折叠式的快速定性滤纸过滤于分液福斗中，待下层甲醇水溶液分清后，放出甲醇水溶液于另一具塞锥形瓶内。取20.00L甲醇水溶液（相当于4g试样）置于另一
7、125mL分液漏斗中，加20mL三氯甲烷，振摇2，静置分层，如出现乳化现象可滴加甲醇促使分层。放出三氣甲烷层，经盛有约10g预先用三氯甲烷湿润的无水硫酸钠的定量慢速滤纸过滤于50mL蒸发皿中，再加5mL三氯甲烷于分液浦斗中，重复振摇提取，三氣甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗过滤器，洗液并于蒸发皿中。将蒸发皿放在通风柜于65C水浴上通风挥干，然后放在冰盒上冷却2min3min后，准确加入1mL苯-乙腈混合液（或将三氯甲烷用浓缩蒸馏器减压吹气蒸干后，准确加人1mL苯-乙腈混合液)。用带橡皮头的滴管的管尖将残渣充分混合，若有苯的结品析出，将蒸发皿从冰盒上取出，继续溶解、混合，晶体即消失，
8、再用此滴管吸取上清液转移于2L具塞试管中。5.2.1.2乙法（限于玉米、大米、小麦及其制品）：称取20.00g粉碎过筛试样于250mL具塞锥形瓶中，用滴管滴加约6mL水，使试样湿润，准确加入60mL三氯甲烷，振荡30mi,加12g无水硫酸钠，振摇后，静置30mi,用叠成折叠式的快速定性滤纸过滤于100mL具塞锥形瓶中。取12mL滤液（相当4g试样)于蒸发皿中，在65C水浴上通风挥干，准确加入1mL苯-乙腈混合液，以下按5.2.1.1自“用带橡皮头的滴管的管尖将残渣充分混合”起依法操作。5.2.2花生油、香油、菜油等称取4.00g试样置于小烧杯中，用20mL正已烷或石油醚将试样移于125mL分液漏斗中。用20mL甲醇水溶液分次洗烧杯，洗液一并移入分液漏斗中，辰摇2m,静置分层后，将下层甲醇水溶液移入第二个分液漏斗中，再用5mL甲醇水溶液重复振摇提取一次，提取液一并移入第二个分液漏斗中，在第二个分液漏斗中加人20mL三氣甲烷，以下按5.2.1.1自“振摇2min,静置分层”起依法3
