1、GB/T28975-2012前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口，本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本标准主要起草人：李锦丰、陈艳、马吉湘、田世民、戴华、张帆、金涌、邹明强。IGB/T28975-20125.3试剂材料纳米颗粒增敏胶体金免疫层析法测定莴苣花叶病毒试剂材料（见附录B)。6实验步骤6.1生物安全与废弃物处理实验过程中的生物安全要求应严格按照GB19489的规定进行操作，实验废弃物按照GB/T23629一2009中5.7进行处理。6.2样品制备称取1g植物或
2、其产品组织，加入2mL样品提取缓冲液用研钵研磨，然后4下3000g5000g离心10min,取上清液制备成一个样品。6.3样本存放制备的样品在28条件下保存应不超过24h,若需长期保存，应置一70以下，避免反复冻融。6.4病毒检测6.4.1检测步骤取同一批次胶休金免疫层析增敏快速检测试纸条（即开即用），置于平整的台面上，向样品垫中分别加入被检样品、阳性对照和阴性对照各100L,每个试验同时做平行。室温放置15mi,观察检测线和质控线条带。6.4.2质量控制质控线条带出现颜色，阳性对照检测线条带出现颜色，阴性对照检测线条带不出现颜色，检测结果有效。如果质控线条带不出现颜色，或阳性对照检测线条带不出现颜色，或阴性对照检测线条带出现颜色，出现任何一种现象以上者，说明检测结果无效，另选一批次试纸条重新按6.4.1操作。6.4.3增敏实验向检测线没有产生颜色条带的试纸条样品垫上加人100L的PBST缓冲溶液进行清洗，反复清洗3次，每次1min,然后在硝酸纤维素膜靠近结合垫端加入30L增敏试剂，室温反应5min8min后，观察检测线条带颜色。6.4.4结果判定检测线条带出现颜色，判定为阳性：检测线条带不出现颜色，判定为阴性。注：增敏前条带颜色为红色，增敏后因为氧化还原反应使条带颜色变为黑灰色，7结果的确认可疑阳性样品应采用莴苣花叶病毒RT-PR检测方法进行确认。
