1、ICS65.120B46中华人民共和国国家标住GB/T30956一2014饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法Determination of deoxynivalenol in feeds-High performanceliquid chromatography with immunoaffinity column clean-up2014-07-08发布2015-01-10实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T30956-20145.1免疫亲和柱，柱容量1.25mg,回收率85%。5.2振荡器。5.3氮吹仪。5.4高速均质器
2、：18000r/min22000r/min,5.5高效液相色谱仪，配有紫外检测器或二极管阵列检测器。5.6真空装置或空气压力泵，符合免疫亲和柱的要求。5.7玻璃纤维滤纸，直径21mm、125mm。6试样的制备按GB/T14699.1采集有代表性的样品，按GB/T20195进行样品制备。粉碎过1mm孔筛，混合均匀，装入密闭容器，低温保存备用。7分析步骤7.1提取称取粉碎试样约50g(精确到0.1g)置于250mL具塞锥形瓶中，加入10g聚乙二醇(4.3)及200mL水，高速均质(5,4)2min,或振荡器(5.2)振荡60min。静置，通过快速定性滤纸过滤，以玻璃纤维滤纸(5.7)过滤1一2次，
3、至滤液澄清，随即进行免疫亲和柱净化操作。7.2净化将免疫亲和柱(5.1)连接于10mL玻璃定量管下。准确移取1mL澄清提取滤液(7.1)注入玻璃定量管中，将空气压力泵(5.6)与玻璃定量管连接，凋节压力使溶液以不超过2mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至有部分空气通过柱体。以5mL水清洗柱子1次，弃去全部流出液，并使3L以上空气通过柱体。准确加人1mL甲醇(4.1)洗脱，流速不超过1mL/mi,收集洗脱液于玻璃试管中，再用氨吹仪(5.3)于50以下吹干。用0.5mL流动相(4.4)溶解残渣，涡旋混匀，过0.45um滤膜，供液相色谱测定。7.3测定7.3.1液相色谱测定参考条件色谱柱：C1柱，柱长150mm,内径4.6mm,填料直径5m或相当者：流动相：见44；流速：0.8mL/min:检测波长：218nm进样量：20L:柱温：室温。7.3.2色谱测定分别取试样溶液和标准工作液各20L(或相同体积)注入高效液相色谱仪进行测定，以标准工作液浓度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制标准工作曲线，以保留时间定性，用标准工作曲线对试样进行定量。脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准溶液色谱图参见附录A。
