1、第二节病原性真菌(zhnjn)检验,医学(yxu)检验系临床微生物及免疫学教研室井申荣,第一页，共六十页。,真菌（Fungus）具有典型细胞结构(jigu)（细胞核、细胞器、细胞壁）细胞壁含几丁质和（或）纤维素无根、茎、叶，不含叶绿素以腐生或寄生方式摄取养料能进行有性生殖和（或）无性繁殖,第一(dy)部分 病原性真菌概述,第二页，共六十页。,对人类致病的真菌分为：浅部真菌：侵犯皮肤、毛发、指甲，为慢性，对 治疗有顽固性，但影响身体较小，深部真菌：可侵犯全身内脏，严重(ynzhng)的可引起死亡。此外有些真菌寄生于粮食、饲料、食品中，能产生毒素引起中毒性真菌病。,第三页，共六十页。,一、生物学性
2、状（一）形态(xngti)结构,真菌细胞结构比细菌复杂(fz)细胞壁为几丁质(Chitin)（多聚N乙酰葡萄糖组成），并含葡聚糖，甘露聚糖及蛋白质，某些酵母菌还含类脂体。细胞内有较为典型的核结构和细胞器。,第四页，共六十页。,真菌(zhnjn)形态分单细胞和多细胞两类,单细胞真菌主要为酵母和类酵母菌（如隐球菌、念珠菌），呈圆形或椭圆形。以出芽方式繁殖。多细胞真菌由菌丝和孢子组成 菌丝分枝交织成团，形成菌丝体（Mycelium），并长有各种孢子，这类真菌即一般(ybn)称为霉菌（Mold）。由于生活环境（如营养、温度、氧气等）的改变，有些真菌的孢子与菌丝两种形态可以互变，这类真菌称为二相性真菌（
3、dimorphic fungus），如球孢子菌、组织胞浆菌及芽生菌。,第五页，共六十页。,真菌孢子和细菌(xjn)芽胞的区别,第六页，共六十页。,真菌的形态(xngti)构成,第七页，共六十页。,真菌(zhnjn)菌丝形态,第八页，共六十页。,真菌孢子形态(xngti),第九页，共六十页。,第十页，共六十页。,第十一页，共六十页。,（二）培养(piyng)特性,大多数真菌营养要求不高，常用沙保氏培养(piyng)基（SDA）培养(piyng)。浅部病原性真菌的最适温度为2228，生长缓慢，大多于14周出现典型菌落。深部病原性真菌培养在37中生长最好，生长较快，经3-4天即长出菌落。,第十二页，
4、共六十页。,真菌(zhnjn)菌落类型,第十三页，共六十页。,第十四页，共六十页。,（三）变异性,真菌易发生变异，在人工培养基中多次传代或孵育过久，可出现形态(xngti)结构、菌落性状、色素及毒力等改变。,第十五页，共六十页。,（四）抵抗力,真菌对干燥(gnzo)、阳光、紫外线及一般化学消毒剂有一定的耐受力，但充分暴露于阳光，紫外线及干燥情况下大多数真菌可被杀死，且对2.5%碘酒，10%福尔马林都敏感，一般可用福尔马林薰蒸被真菌感染的房间。对热敏感，一般601小时可杀死真菌菌丝和孢子。,第十六页，共六十页。,二、致病性与免疫性（一）致病性,真菌引起的疾病大致包括 真菌性感染：主要是外源性感染
5、 浅部真菌侵犯(qnfn)皮肤、指甲及须发等组织，顽强繁殖，发生机械刺激损害，同时产生酶及酸等代谢产物，引起炎症反应和细胞病变。深部真菌侵犯皮下，内脏及脑膜等处，引起慢性肉芽肿及坏死。2条件致病性真菌感染：主要是内源性感染（如白色念珠菌），亦有外源性感染（如曲霉菌）。,第十七页，共六十页。,3过敏性真菌病：由真菌性过敏原（如孢子抗原）引起过敏症，如哮喘，变态反 应性肺泡炎和癣菌疹等。4真菌毒素中毒症：侵犯害肝、肾、脑、中枢神经系统及造血组织(zzh)。如黄曲霉毒素、某些镰刀菌素和黑葡萄穗素。,第十八页，共六十页。,（二）免疫性,1非特异性免疫：人类对真菌感染有天然免疫力。皮肤(p f)分泌短链
6、脂肪酸和乳酸、血液中转铁蛋白、中性粒细胞和单核巨噬细胞的吞噬作用，以及正常菌群的拮抗作用。2特异性免疫：真菌感染中细胞免疫是机体排菌杀菌及复原的关键，T细胞分泌的淋巴因子、以T细胞为主导的迟发型变态反应引起免疫病理损伤能局限和消灭真菌，以终止感染。,第十九页，共六十页。,三、微生物学诊断(zhndun)（一）直接检查,1不染色标本的直接镜检：直接采取标本制片、显微镜下直接观察(gunch)，若发现真菌菌丝或孢子存在时，即可初步判定为真菌感染。1）标本制备：2）检查方法：3）封固液：,第二十页，共六十页。,KOH溶液：本液适于检查致密的难以透明的材料（如毛发、指甲、鳞屑等）。墨汁：主要用于检查有
7、荚膜的真菌（如新型隐球菌等）。水合氯醛石炭酸乳酸封固液：此液透明力较强，只限于不透明的标本。生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替(dit)氢氧化钾溶液。,第二十一页，共六十页。,第二十二页，共六十页。,第二十三页，共六十页。,2染色标本检查：1）革兰氏染色：各种真菌均为革兰氏阳性，为深蓝色。常用于酵母菌、白色念珠菌、孢子丝菌、诺卡菌及组织(zzh)胞浆菌等。2）乳酸酚棉蓝染色3）糖原染色：菌体均染成红色。用于标本直接涂片及组织病理切片染色。4）嗜银染色（GMS）：染成黑色。,第二十四页，共六十页。,5）粘蛋白卡红染色法（MCS）：主要(zhyo)用于新型隐球菌荚膜的染色。隐球菌荚膜和
8、细胞壁呈红色，细胞核呈黑色。6）荧光染色：主要使用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、培养涂片及组织切片。,第二十五页，共六十页。,第二十六页，共六十页。,（二）培养(piyng)检查,本法可确定菌种，辅助直接检查的不足；通常(tngchng)用沙保氏培养基（SDA）（2228）；深部真菌可用血琼脂或脑心葡萄糖血琼脂37培养；,第二十七页，共六十页。,（三）免疫学试验(shyn),用于检测深部感染真菌的抗体(kngt)，作为辅助诊断组织胞浆菌、念珠菌、曲霉菌。检测深部感染真菌的抗原，用于早期、快速、特异的诊断。乳胶凝集法检测新型隐球菌病患者的荚膜多糖抗原 ELISA法检测白色念珠菌感染者的甘露聚糖抗
9、原 免疫荧光法检测孢子丝菌病患者的可溶性抗原,第二十八页，共六十页。,四、防治(fngzh)原则,真菌感染尚无特异预防，主要注意公共卫生和个人卫生；碘化物治疗孢子丝菌病、毛霉菌病有一定疗效；制霉素、灰黄霉素、克霉唑（三苯甲霉唑）等外用或内服对癣症和白色(bis)念珠菌病等有较好疗效；近年报道5-氟胞嘧啶（5-FC）治疗单细胞真菌感染疗效显著；二性霉素B可用于深部全身真菌感染。,第二十九页，共六十页。,第二(d r)部分浅部真菌,浅部真菌主要为皮肤丝状菌（Dermatophytes），侵犯(qnfn)皮肤、毛发、指甲等角化组织引起癣症，又称癣菌(Ringworm)，分为三属，共37个种。,第三十
10、页，共六十页。,(一)、生物学特征(tzhng),第三十一页，共六十页。,（二）检验(jinyn)方法：,1直接镜检：直接采取病变部位的标本，用显微镜检查有无菌丝及孢子的存在(cnzi)，本法迅速简便，是临床真菌检查最常用的方法,第三十二页，共六十页。,2分离培养：取毛发、皮屑、甲屑等标本，用70乙醇(y chn)消毒，接种沙保氏琼脂斜面培养基，25培养714天，根据菌落形态及颜色、并挑取菌落镜检菌丝及孢子的特征进行鉴定。,第三十三页，共六十页。,毛癣菌属,第三十四页，共六十页。,小孢子(boz)菌属,第三十五页，共六十页。,表皮(biop)癣菌属,第三十六页，共六十页。,3荧光检查：本法主要
11、用于头癣检查。病发在滤过紫外灯照射下可发出不同色泽的荧光，如黄癣菌病发呈暗绿色荧光，白癣小孢子(boz)菌属的病发呈亮绿色荧光等。,第三十七页，共六十页。,第三(d sn)部分深部感染真菌,深部真菌是侵犯皮下组织和内脏，引起全身性感染的真菌。多数能引起慢性肉芽肿样炎症(ynzhng)、溃疡及坏死等病变,第三十八页，共六十页。,深部感染真菌分两大类：1.致病性真菌：此类真菌在正常人体内部不存在，一旦侵入机体，即可致病，如组织胞浆菌、球孢子菌、芽生菌等，属外源性，我国少见；2.条件(tiojin)致病性真菌：是人体正常菌群的成员，当机体抵抗力下降时才致病，如新型隐球菌、白色念珠菌、曲霉菌和毛霉菌等
12、。,第三十九页，共六十页。,一、白色(bis)念珠菌,白色念珠菌（canidia Albicans）又称白色假丝酵母菌，广泛存在于自然界，也存在于正常人口腔(kuqing)，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病。为条件致病性真菌。,第四十页，共六十页。,（一）生物学特性(txng),卵圆形，大小(dxio)2m4m，革兰氏染色阳性。有假菌丝。,第四十一页，共六十页。,培养特性(txng)：典型类酵母型菌落，表面光滑，呈灰白色或奶油色，有酵母气味。涂片镜检，可看到表层为卵圆形芽生细胞，底层有较多假菌丝。,第四十二页，共六十页。,（二）致病性和免疫性,白色念珠菌可侵犯人体许多部
13、位，可引起：1.皮肤念珠菌病：好发于皮肤皱褶处；2.粘膜念珠菌病：鹅口疮、口角炎、阴道炎最多见。3.内脏及中枢神经念珠菌病：肺炎、肠胃炎、心内膜炎、脑膜炎、脑炎等。机体可产生(chnshng)一定免疫力。,第四十三页，共六十页。,（三）检验方法(fngf)及鉴定,1直接(zhji)镜检：革兰氏染色镜检2培养特点：典型的酵母菌落。,第四十四页，共六十页。,3鉴定(jindng)试验,1）芽管试验：取少许待检的白色念珠菌接种(jizhng)于0.5ml人或兔血清中，混匀，直37水浴2-3h后，取出一接种(jizhng)环菌液，涂片、镜检。有芽管产生者为白色念珠菌，其他念珠菌不产生芽管。,第四十五页
14、，共六十页。,2）TZC试验：将白色念珠菌接种于含0.005氯化三本四氮唑的沙保培养基中，经2225，2448h培养，白色念珠菌不变色或仅淡红色，其他念珠菌或酵母菌呈红色或深红色。3）糖发酵和糖同化试验：根据这两种试验可将常见的几种念珠菌进行(jnxng)鉴别。,第四十六页，共六十页。,4）动物实验：本菌对兔有致病力。给兔耳静脉注射本菌，经45天死亡。解剖可见肾、肝肿胀(zhngzhng)、充血，并有小脓肿，涂片及培养均可见本菌及其假菌丝存在。5）厚膜孢子形成试验：本试验亦是鉴定白色念珠菌的重要方法之一，在玉米粉聚山梨酯80琼脂培养基培养本菌，镜检观察到厚膜孢子及假菌丝。,第四十七页，共六十页
15、。,第四十八页，共六十页。,第四十九页，共六十页。,4血清学诊断(zhndun),用于诊断全身性念珠菌病。以念珠菌为抗原(kngyun)测定机体抗念珠菌抗体,第五十页，共六十页。,二、新型(xnxng)隐球菌,新型隐球菌又名溶组织酵母菌，是土壤，鸽类，牛乳、水果等的腐生菌，也可存在(cnzi)人口腔中。可侵犯人和动物，一般为外源性感染，但也可能为内源性感染，对人类而言，它通常是条件致病菌。,第五十一页，共六十页。,（一）生物学特性(txng),较大球形，直径可达520um，有肥厚的荚膜，折光性强，一般染料不易着色，难以发现，称隐球菌，用墨汁阴性显影法镜检，可见到透明(tumng)荚膜包裹着菌细
16、胞，菌细胞常有出芽，但不生成假菌丝。,第五十二页，共六十页。,第五十三页，共六十页。,在沙保氏琼脂及血琼脂培养基上，于25及37皆可生长，而非病原性隐球菌在37不能繁殖(fnzh)。酵母型菌落，呈白色。本菌能分解尿素，以此与酵母菌和念珠菌鉴别。,第五十四页，共六十页。,第五十五页，共六十页。,（二）致病性,本菌大多由呼吸道转入，在肺部引起轻度炎症，或隐性传染。侵犯(qnfn)中枢神经系统，发生脑膜炎、脑炎、脑肉芽肿等。此外可侵入骨骼、肌肉、淋巴结、皮肤粘膜引起慢性炎症和脓肿。,第五十六页，共六十页。,（三）微生物学(wi shn w xu)检验,1直接镜检：常用墨汁涂片法。2分离培养：在沙保培养基上，室温、3723天即可长出典型(dinxng)酵母型菌落。有荚膜者菌落粘稠。,第五十七页，共六十页。,3糖同化及发酵试验：本菌不发酵各种糖类，但能同化葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、半乳糖、肌醇，不同化乳糖。4酚氧化酶试验：在含多巴橘橼酸铁和咖啡(kfi)酸培养基中，经天培养，新型隐球菌出现棕黑色菌落。尿素酶试验：新型隐球菌产生尿素酶，在尿素培养基（含尿素及酚红指示剂）中分解尿素形成氨和CO2，以致培
