1、第七章 肠道致病菌的检验(jinyn)与鉴定,第一页，共七十页。,第一节 概述(i sh),一、食品(shpn)中常见的肠道致病菌沙门氏菌志贺氏菌大肠艾希氏菌变形杆菌耶尔森菌,第二页，共七十页。,二、生物学特性(txng),1、形态与染色均为革兰氏阴性杆菌，中等(zhngdng)大小，无芽胞，多数具有周身鞭毛能运动，志贺氏菌属无鞭毛无动力。2、培养和生化反应（1）、需氧或兼性厌氧，菌落中等大小，表面光滑，液体培养基混浊生长。（2）、肠道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多能分解乳糖、葡萄糖产酸或产酸产气。（3）、可还原硝酸盐为亚硝酸盐。,第三页，共七十页。,三、抗原(kngyun)类型,第四页，
2、共七十页。,四、致病性,（一）、致病物质1、内毒素：能引起机体发热，白细胞减少，低血糖，血压(xuy)降低，严重者休克。2、外毒素：对小肠粘膜细胞具有物殊毒害作用，引起腹泻。,（二）、所致病疾 1、伤寒(shnghn)和副伤寒(shnghn)2、食物中毒 3、细菌性痢疾,第五页，共七十页。,五、微生物检验(jinyn)的基本程序,检样处理增菌培养分离培养生化试验(shyn)血清学鉴定报告,第六页，共七十页。,思考题,1、肠道致病菌具有哪些生物学特性(txng)?2、肠道致病菌具有哪些抗原？又称为什么？有什么特点？3、写出肠道致病菌检验的基本程序,第七页，共七十页。,第二节、沙门氏菌(sh mn
3、 sh jn)检验,一、概况（一）沙门氏菌的发现与食物中毒(shwzhngd)（二）沙门氏菌的命名 根据所致疾病命名 根据菌的发现地区命名 以发现者的名字命名（三）沙门氏菌的抵抗力 60 30可杀死,第八页，共七十页。,（四）沙门氏菌的分类地位(dwi)及定义,1、地位(dwi)：是肠杆菌科、埃希氏菌族、沙门氏菌属中的细菌2、定义 是肠杆菌科中形态和培养特征，生化反应及抗原结构相似，被O1噬菌体裂解的一群革兰氏阴性杆菌。,第九页，共七十页。,二、生物学特性(txng),（一）、形态与染色：革兰氏染色阴性，无荚膜，无芽胞，多数有鞭毛(binmo)，有动力，短小杆菌。（二）、培养特性 1、需氧或兼
4、性厌氧，最适温度37，PH7.27.4。,第十页，共七十页。,(沙门氏菌（红色(hngs)）侵入人体细胞,第十一页，共七十页。,2、对营养要求不高，在普通培养基生长良好，37，24h，能形成菌落中等大小，直径23mm，圆形或卵形，表面光滑湿润，无色半透明，边缘整齐的菌落3、在液体(yt)培养基中，呈均匀混浊性生长，无菌膜。,第十二页，共七十页。,（三）、生化特性1、发酵GLU，甘露醇，山梨醇产酸产气（伤寒鸡伤寒沙门氏菌少数不产气）2、不发酵乳糖，蔗糖，侧金黄花醇3、多数产生(chnshng)H2S（+），不产靛基质（-），不分解尿素（-），不产生乙酰甲基甲醇（VP）（-），4、能还原硝酸盐为亚
5、硝酸盐（+）5、在KCN培养基中生长（-），苯丙氨酸脱氨酸（-）,第十三页，共七十页。,（四）、抗原结构(jigu)主要两种：A、O抗原 B、H抗原C、表面抗原（K抗原）D、菌毛抗原,第十四页，共七十页。,2、O抗原（1）O抗原的表示方法共有58种，用字母(zm)O和阿拉伯数字标记：O1、O2、O3、O4如：伤寒杆菌：O9、O12,第十五页，共七十页。,（2）沙门氏菌的分群及表示方法(fngf)用大写字母及相关符号表示：A、B、C、D、E、F Z、O51 O63、O65 O67,第十六页，共七十页。,（3）沙门氏菌(sh mn sh jn)中的主要菌群及其群特异性抗原 A群-O2 B群-O4
6、C群-O6 C1群-O7、C2群-O6 O8、C3群-O8、C4群-O6 O7 O14 D群-O9 F群-O11 E群-O3 E2群-O3、O10族 E3群-O3、O15 E4群-O1、O3、O19,第十七页，共七十页。,3、H抗原(kngyun)（鞭毛抗原(kngyun)）,耐热性差：6015或酒精处理可破坏沙门(shmn)氏H抗原有两种：第1相：特异相，用英文小写字母表示a、b、cz z1z55第2相：非特异相，用阿拉伯数字表示1、2、3其中也有用小写字母a、n、x等表示。,第十八页，共七十页。,4、表面抗原：,沙门氏菌有三种：Vi、M、5抗原、K抗原Vi抗原位于菌体的最表层，包围了O抗原
7、，可阻碍O抗原的血清学凝集试验(shyn)。破坏Vi抗原：60 30，100 5含有Vi 抗原的沙门氏菌：伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌,第十九页，共七十页。,三、沙门氏菌(sh mn sh jn)食物中毒,（一）、引起食物中毒最常见的沙门氏菌：鼠伤寒沙门氏菌、肠炎(chngyn)沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌（二）、易引起沙门氏菌中毒的食品 肉、蛋、乳类食品,行业关注：美国(mi u)两种花生酱含沙门氏菌,第二十页，共七十页。,(三)、中毒(zhng d)原因,1、食用(shyng)病畜禽的肉制品食品 2、病畜禽、带菌人和动物使食品受污染 3、用不洁净水外理食品,第二十一页，共七
8、十页。,（四）、临床(ln chun)病状（所致病菌）,1、肠热病：伤寒与副伤寒病，为慢性发热的菌血病。由伤寒与副伤寒菌引起(ynq)，潜伏期720天2、急性肠胃类：主要症状：头痛、发热、恶心、呕吐、腹泻、出冷汗、及全身不适，病程23天3、败血病：高烧、寒战、厌食、局部发炎、由猪霍乱沙门氏菌等引起,第二十二页，共七十页。,四、微生物检验(jinyn),（一）、基本步骤（程序）检样增菌（前增菌）分离培养生化(shn hu)试验初步鉴定血清学反应最后鉴定报告,第二十三页，共七十页。,1、前增菌：用无选择性的培养基使处于濒死状态的M恢复活力;2、选择性增菌：使沙门氏菌优势繁殖(fnzh)，基它细菌变
9、到抑制;3、选择性平板分离培养：分离出所需的细菌;4、生化试验：鉴定分离出来的细菌是否符合所检项目的细菌;5、血清学鉴定：进一步鉴定。,第二十四页，共七十页。,（二）、检验(jinyn)操作关键点,1、增菌：使待检菌复壮，抑制杂菌生长，提高检出率。前增菌：用于加工(ji gng)过的食品，37，48h 或1824h，长有杂菌。增菌培养基：增菌液一般用MM和SC两种，如可能是伤寒沙门氏菌用TTB，用42培养。,第二十五页，共七十页。,2、平板(pngbn)分离,选择性培养基：BS、DHL、HE、WS、SSBS中最好，DHL、HE、WS很好，SS最差一般要用：BS和WS/SS两个平板(pngbn)
10、，BS主要用于伤寒沙门氏菌的分离,第二十六页，共七十页。,BS上的菌落(jnlu),DHL上的菌落(jnlu),SS上的菌落(jnlu),第二十七页，共七十页。,3、五项生化(shn hu)试验,H2S、靛基质(j zh)、PH7.2尿素酶、KCN、赖氨酸脱羧酶,第二十八页，共七十页。,（1）三糖铁培养(piyng)的培养(piyng),典型沙门氏菌在三糖铁培养上的特征：表面(biomin)（-）粉红色、底层（+）黄色、H2S（+）底层有黑色、有动力。在TSI培养基中：表面（+）黄色、H2S（-）的培养物可排除，其它培养物均有可能是沙门氏菌。,第二十九页，共七十页。,（2）其余四项生化(shn
11、 hu)实验,靛基质(j zh)PH7.2尿素酶 KCN 赖氨酸脱羧酶 反应序号：A1、A2多见，B1少见,第三十页，共七十页。,（3）、典型沙门氏菌的五项生化反应(fnyng)及其检验的利用,A、典型(dinxng)五项生化反应：A1 H2S（+）靛基质（-）PH7.2尿素酶（-）KCN（-）赖氨酸脱羧E（+）,第三十一页，共七十页。,B、利用五项生化反应鉴定(jindng)沙门氏菌的最简单方案,a、对于H2S阳性菌，利用五项生化反应试验可判别沙门氏菌和柠檬酸杆菌(gnjn)。b、对于H2S阴性菌，查到B1时即：H2S（-）靛基质（-）PH7.2尿素酶（-）KCN（-）赖氨酸脱羧E（+），补
12、做ONPE试验，可判定沙门氏菌属和埃希氏菌属（ONPE（-）为沙门氏菌，ONPE（+）大肠艾希氏菌,第三十二页，共七十页。,5、血清学试验(shyn)（最后鉴定）,（1）、沙门氏菌诊断血清的种类(zhngli)：10种组合血清：主要用于伤寒和副伤寒沙门氏菌鉴定 26种组合血清：常见致病菌的定群与分型 57种组合血清：常见定型，初步鉴定AF群以外的菌型144种组合血清：全套装,第三十三页，共七十页。,（2）、血清学检验(jinyn)步骤,抗原准备(zhnbi)AF多价血清检验（判定是否是沙门氏菌）群特异性抗体血清（如O2、O4、O3、O7、O8、O9、O10、O11（判定O群别）O单因子血清检查
13、 H因子血清检查（分型）报告,第三十四页，共七十页。,五、检验(jinyn)结果的报告,1、凡血清学鉴定与生化反应均符合者，报告发现沙门氏菌(sh mn sh jn)。经检验，食品发现有沙门氏菌 2、凡血清学鉴定与生化反应均不符合者，报告未发现沙门氏菌。,第三十五页，共七十页。,思考题：,1、典型沙门氏菌的五项生化试验结果如何？2、沙门氏菌的形态特征，培养特性(txng)是什么？3、沙门氏菌检验时为什么要进行前增菌和增菌？4、沙门氏菌有哪些抗原？各有何特点？O、H抗原如何表示，AF群沙门氏菌中，代表每群O特异性抗原的独特因子是什么？,第三十六页，共七十页。,5、沙门氏菌哪几个菌型具有Vi抗原，
14、Vi抗原对O抗原血清涟试验有何影响，对含Vi抗原菌，如何做O抗原血清学试验。6、沙门氏菌在SS平板，TSI培养基上生长的现象如何，说明其原理。7、分离(fnl)纯化后怎样选用最少的生化试验方法初步鉴定检验菌是否是沙门氏菌属的细菌。8、如何进行沙门氏菌的血清学试验。,第三十七页，共七十页。,第三节、志贺氏菌的检验(jinyn),一、生物学特性（一）、形态(xngti)与染色 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛 23um*0.50.7um,第三十八页，共七十页。,（二）、培养(piyng)特性,1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37，PH7.27.42、在普通琼脂(qingzh)和SS平板上，能
15、形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。,第三十九页，共七十页。,（三）、生化(shn hu)反应,1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌外，均不发酵乳糖(r tn)。2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，不能利用柠檬酸盐。4、甲基红阳性。,第四十页，共七十页。,（四）、抗原(kngyun)结构,1、抗原构成(guchng)：O抗原：群特异性抗原：A、B、C、D K抗原：除B群外，一般有K抗原,第四
16、十一页，共七十页。,2、志贺氏菌的分群(fn qn)与血清型,志贺氏菌分为四群：A群（痢疾(l ji)志贺氏菌）：110型 B群（福氏志贺氏菌）：16型+X、Y两个变种，C群（鲍氏志贺氏菌）：115型D群（宋内氏志贺氏菌）：1个型,第四十二页，共七十页。,志贺氏菌属抗原(kngyun)的分类,第四十三页，共七十页。,葡萄糖+,乳糖(r tn)-,甘露醇-,痢疾(l ji)志贺氏菌1、3、4、5、6、9、10型,痢疾(l ji)志贺氏菌2、7、8型,福氏6型，鲍氏1、2、3、4、5、6、8、10、12、14型,福氏痢疾菌（1、2、3、4、5型）鲍氏5、7、9、11、13、15型,靛基质-,乳糖+,宋氏志贺氏菌,靛基质-,靛基质+,靛基质-,靛基质+,甘露醇+,第四十四页，共七十页。,3、属内外抗原(kngyun)关系,（1）群内抗原关系：A群：2与10型，具有密切关系 C群：1与4和11型，10与11相关(xinggun)B群：群抗原是B群各型之间的共同抗原（2）群间抗原关系：C群17型与A群3型相关 C群18型与A群11型相关,第四十五页，共七十页。,（3）属外抗原关系：志贺氏菌与艾希
