1、第十三章 肝功能检验(jinyn),Department of Clinical Laboratory Biochemistry,第一页，共六十八页。,本章内容(nirng)概要：,本章(bn zhn)教学要求：,掌握:黄疸的发生(fshng)机理、类型及实验室鉴别诊断要点；肝功能实验生化检查指标的种类和重点项目的测定方法及评价。熟悉:肝脏的生物化学功能，胆红素代谢；各测定项目的临床意义。了解：肝脏的基本机构；肝功能实验项目选择的原则。,第二页，共六十八页。,第一节 概 述,肝脏结构肝脏的生化功能肝脏疾病(jbng)的生化改变,第三页，共六十八页。,一、肝脏(gnzng)结构,（一）解剖学特点
2、(tdin),双重(shungchng)血液供应,腹主动脉的分技肝动脉,氧,门静脉,营养,双重输出管道,肝静脉,代谢降解物,下腔静脉,胆道系统,脂溶性物质及其代谢产物,体外,第四页，共六十八页。,（二）肝脏(gnzng)的显微结构特点,1、组织(zzh)结构,2、亚细胞(xbo)结构,（三）细胞的再生,第五页，共六十八页。,二、肝脏的生物化学(shn w hu xu)功能,排泄功能(gngnng)物质代谢功能生物转化,重要(zhngyo)生化功能,第六页，共六十八页。,（一）排泄(pixi)功能,主要排泄(pixi)对象：胆汁酸、胆红素、氨,1、胆汁酸代谢(dixi),胆汁功能,胆汁的来源：,
3、肝胆汁 胆囊胆汁 十二指肠,胆汁的成分：,水/胆汁酸（盐）、卵磷脂、蛋白质、脂肪酸和胆固醇,第七页，共六十八页。,（2）胆汁酸生成(shn chn)及种类：,初级(chj)胆汁酸（肝细胞）次级胆汁酸（肠道）,初级(chj)游离胆汁酸初级结合胆汁酸（甘氨酸/牛磺酸）次级游离胆汁酸次级结合胆汁酸（甘氨酸/牛磺酸）,第八页，共六十八页。,（3）胆汁酸肝肠(n chn)循环：,（4）胆汁酸的功能(gngnng)：,促进脂类消化促进脂类吸收抑制胆固醇从胆汁中析出(xch)沉淀,游离型胆汁酸,结合型胆汁酸,第九页，共六十八页。,2、胆红素代谢(dixi),胆色素,尿胆素原 粪胆素原尿胆素粪胆素胆绿素胆红素
4、,胆素原,第十页，共六十八页。,第十一页，共六十八页。,3、血氨代谢(dixi),药物(yow)及体内含氮物质（如嘌呤、嘧啶等）,来源(liyun),去路,相对平衡,第十二页，共六十八页。,部位(bwi)肝脏细胞,鸟氨酸,瓜氨酸,瓜氨酸,精氨酸代琥珀酸,ATP,AMP+PPi,延胡索酸,鸟氨酸,精氨酸,H2O,尿素(nio s),天门冬氨酸,NH3,CO2,氨甲酰磷酸(ln sun),+H2O,尿素循环,第十三页，共六十八页。,（二）物质代谢(dixi)功能,1、营养物质代谢(dixi),(1)在蛋白质代谢(dixi)中的作用(2)在氨基酸代谢中的作用(3)在糖代谢中的作用(4)在脂代谢中的作
5、用,第十四页，共六十八页。,2、激素(j s)及维生素代谢,激素的灭活多种维生素的储存(chcn)与转化,第十五页，共六十八页。,（三）肝脏(gnzng)的生物转化,定义(dngy)：,转化(zhunhu)对象：药物、毒物、致癌物,转化过程：氧化、还原、水解、结合,生理意义：,第十六页，共六十八页。,三、肝脏疾病的生化(shn hu)改变,（一）胆红素代谢(dixi)障碍（黄疸）,定义(dngy):,黄疸分类:,黄疸?,阻塞性黄疸,溶血性黄疸,肝细胞性黄疸,高胆红素血症?,第十七页，共六十八页。,第十八页，共六十八页。,（二）胆汁酸代谢(dixi)障碍,1、胆汁酸合成障碍2、胆汁酸向肠道排出障
6、碍3胆汁酸肠肝循环紊乱(wnlun)4胆汁瘀积病变时胆汁酸代谢紊乱,第十九页，共六十八页。,（三）血浆(xujing)酶异常,1肝脏合成酶类:胆碱脂酶、凝血因子、铜蓝蛋白；2.肝细胞内酶:ALT、AST 3肝脏阻塞性疾病(jbng)酶活性改变：ALP、GGT4肝硬化疾病酶活性改变：单胺氧化酶（MAO）,（四）血浆蛋白(dnbi)异常,第二十页，共六十八页。,第二节 肝功能试验(shyn),血清(xuqng)（浆）蛋白测定血清酶测定血清胆红素测定血清胆汁酸测定血氨测定,第二十一页，共六十八页。,一、血清(xuqng)（浆）蛋白测定,（一）总蛋白、白蛋白、及白蛋白/球蛋白（A/G）比值(bzh)测
7、定,1总蛋白(dnbi)测定,化学法(双缩脲法)、物理法、染料结合法、电泳法,染料结合法(BCG、BCP）、沉淀法,2.白蛋白测定,3A/G比值,第二十二页，共六十八页。,【参考(cnko)范围】,总蛋白(dnbi)6080g/L 白蛋白 3555g/L球蛋白：1532g/L A/G比值:1.52.0/1,【临床意义】,血中白蛋白（总蛋白浓度）减少:见于严重(ynzhng)肝 病(?）、肾病（?）A/G比值减少与A/G比值倒置：表示肝功能损 害严重。,第二十三页，共六十八页。,（二）纤维蛋白(xin wi dn bi)原测定,（凝血因子）,测定方法：分为(fn wi)三大类,根据纤维蛋白(xi
8、n wi dn bi)原的生物学特性测定方法,根据纤维蛋白原理化性质而建立的测定方法。,根据纤维蛋白原免疫学特点而建立的测定方法。,【参考范围】2.224.22g/L(热沉淀比浊法),【临床意义】,(1)纤维蛋白原增加：感染；无菌炎症；其它。,(2)纤维蛋白原减少:严重的肝脏疾病；,其它疾病引起纤维蛋白原减少的疾病。,第二十四页，共六十八页。,（三）甲胎蛋白（1-fetoprotein，AFP）测定(cdng),测定方法：,【参考范围】成人1030g/L、400g/L作为肝癌(n i)诊断标准,【临床意义】,酶联免疫吸附法、放射免疫分析法、斑点免疫结合法、火箭电泳(din yn)放射自显影法、
9、酶联火箭电泳(din yn)法等,(1)原发性肝细胞肝癌的诊断标：400g/L(400ng/ml)；(2)活动性急、慢性肝炎、肝硬化或其它肝病病人的诊断,第二十五页，共六十八页。,（四）其它(qt),【临床意义】肝豆状核变性（Wilson病）和遗传性色素(s s)沉积症,1.铜蓝蛋白(dnbi)测定,【参考范围】52.9167.7 IU/L,【临床意义】遗传性血色素沉积症铁沉积,2转铁蛋白,【原理】双联吡啶法,【原理】铜蓝蛋白具有氧化酶活性,【参考范围】TIBC 男 5077mol/L 女54 77mol/L,转铁蛋白饱和度为33.0%35.0%,第二十六页，共六十八页。,二、血清(xuqng
10、)酶测定,（1）ALT的测定(cdng)（赖氏法）原理：丙氨酸+-酮戊二酸 谷氨酸+丙酮酸,37、pH7.4 ALT,丙酮酸+2，4-二硝基苯肼 2，4-二硝基苯腙,第二十七页，共六十八页。,（2）方法评价赖氏法的实验结果(ji gu)需与卡门分光法的结果(ji gu)对比后求出；NaOH的浓度对显色有影响；该法的重复性差。,第二十八页，共六十八页。,卡门氏单位：1.0ml血清在25，340nm，反应体积3.0ml,光径1.0cm时每分钟测定(cdng)吸光度下降0.001，即消耗4.82 10-4mol NADH为一个卡门氏单位,第二十九页，共六十八页。,【参考(cnko)范围】525卡门氏
11、单位,【临床意义】,(2)慢性(mn xng)活动性肝炎或脂肪肝：,(1)肝细胞损伤(snshng)的灵敏指标:,ALT轻度增高(100200IU),或属正常范围.,第三十页，共六十八页。,ALT测定连续监测(jin c)法（速率法）,原理(yunl)：L-丙氨酸+-酮戊二酸 L-谷氨酸+丙酮酸丙酮酸+NAD+,LDH,乳酸(r sun)+NADH,ALT,第三十一页，共六十八页。,（）方法评价：存在着两个副反应，会使测定结果偏高；A、血清中存在的-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH。B、血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)增高时，在有氨存在条件下，亦能消耗NADH。双试剂法，因温育期长，能有效地消除(
12、xioch)干扰反应，测定准确性高，是ALT测定的首选方法；血清不宜反复冰冻保存，以免影响酶活性；避免使用溶血标本。,第三十二页，共六十八页。,3.赖氏法测定AST（）原理与方法评价（类似ALT测定）【参考(cnko)范围】828卡门氏单位,【临床意义】,增高见于：心肌梗死、肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎(fiyn)和各种肝病病人,第三十三页，共六十八页。,4连续(linx)监测法测定AST,（）原理(yunl)：L-门冬氨酸+-酮戊二酸 草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+NADH L-苹果酸+NAD+,双试剂(shj)法:同ALT测定,MDH,AST,第三十四页，共六十八页。,（）方法(fngf)评
13、价,误差来源内源性干扰:主要来自血清(xuqng)中高浓度丙酮酸和L-谷氨酸脱氢酶(GLDH)。外源性:干扰来自试剂中污染的GLDH和AST。,【参考范围(fnwi)】540 IU/L(连续监测法测定),【临床意义】见赖氏法,第三十五页，共六十八页。,(二)ALP测定(cdng),化学法,连续(linx)监测法：,鲍氏法,金氏法,皮氏法,第三十六页，共六十八页。,、金氏法测定(cdng)ALP,（）原理(yunl)：磷酸苯二钠 酚+磷酸 酚+4AA-P 红色醌,ALP OH-,K3Fe(CN)6,第三十七页，共六十八页。,(2)方法(fngf)评价：,磷酸苯二钠比色法与更早的-甘油磷酸钠法相比
14、具有较大的优点，如水解速度快，保温时间较短、灵敏度较高、显色(xin s)稳定、不需去蛋白、操作简单、快速。但与磷酸对硝基酚连续监测法相比，准确度、精密度较低；操作比较繁琐,，灵敏度低。,第三十八页，共六十八页。,【参考范围成人(chng rn)：313 单位,儿童：528单位,ALP金氏单位(dnwi)定义是100ml血清，37与底物保温15分钟，产生1mg酚为1个金氏单位。,ALP主要用于诊断肝胆(gndn)和骨骼疾病,【临床意义】,第三十九页，共六十八页。,2.连续(linx)监测法测定ALP,（）原理(yunl)：,4-NPP+AMP 对硝基(xio j)酚(黄色）,（）方法评价：,线
15、性范围可达500U/L，批内CV为2.06%2.36%，批间CV为2.74%。,ALP,OH,-,第四十页，共六十八页。,【参考(cnko)范围】男性：112岁 15岁 40 150U/L，25岁 40150U/L。,【临床意义】见金氏法,第四十一页，共六十八页。,(三)GGT测定法 化学法（重氮反应(fnyng)比色法）和连续监测法。,1.重氮反应(fnyng)比色法测定GGT,原理(yunl)：,【参考范围】男性 3 17 U/L；女性 2 13 U/L,(2)方法评价：,重氮比色法活性单位：100ml血清在37下反应1hr,生成0.5mol的-苯胺为1个GGT活性单位。,第四十二页，共六
16、十八页。,(1)原理(yunl)：,(2)方法(fngf)评价：,【参考(cnko)范围】,男性：1150 U/L；(以-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺为底物)女性：732 U/L 男性：40U/L；女性：30U/L(以-谷氨酰-4-硝基苯胺为底物),第四十三页，共六十八页。,(四)MAO测定(cdng),原理(yunl),MAO主要作用于CH2-NH2基团，在氧参与(cny)下，氧化脱氨生成相应的卞醛、氨及过氧化氢。以苄氨偶氮-萘酚为底物,在O2和H20参与下，MAO催化生成苄醛偶氮-萘酚、氨及过氧化氢，用环己烷抽提后进行比色测定。,第四十四页，共六十八页。,(2)方法(fngf)评价,【单位(dnwi)定义】：,1ml血清与底物在37孵育60分钟，催化单胺氧化产生(chnshng)1nmol苄醛偶氮-萘酚为1 个MAO单位。,【参考范围】1240 U/ml,【临床意义】：肝硬化时，肝纤维化现象十分活跃，MAO活性明显升高。,第四十五页，共六十八页。,三、血清(xuqng)胆红素测定,重氮盐法,胆红素氧化酶(bilirubin oxidase,BOD)法,高效(o xio)液相色谱法
