1、请核对导学案(xu n)答案,绪1.差异性2.来源和性质3.20、4、2个、2个、亚铁、一分子 氧、一分子二氧化碳4.血红蛋白含量丰富(fngf)，容易获取。,课前准备(zhnbi)提前5分钟,第一页，共三十页。,（一）样品处理及粗提取1.样品处理、粗分离、纯化 和纯度鉴定(jindng)。2.血浆、杂蛋白、柠檬酸钠、五、生理盐 水、缓慢、低速短时、上清液没有黄色3.红细胞、等、蒸馏水、甲苯、磁力搅拌器4.血红蛋白、高速离心、无、甲苯、白、脂溶 性沉淀、红、血红蛋白溶液、暗红、破碎物沉 淀、滤纸、脂溶性沉淀、分液漏斗、血红蛋白 溶液5.无机盐离子、有机小分子、透析袋、磷酸缓冲 液,第二页，共三
2、十页。,（二）凝胶色谱操作2.交联程度、膨胀程度和分离范围、得水值、7.5、蒸馏水、均匀、气泡、磷酸缓冲液、紧密(jnm)。3.管壁、凝胶面、色谱柱底部、5（三）操作提示1.白细胞2.洗脱液、沸水浴、微生物、空气3.扰乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,第三页，共三十页。,请拿出课本、双色笔、导学案 让我们(w men)准备好进行思维的碰撞,回顾：1.凝胶色谱法和电泳的基本原理？2.缓冲溶液(hun chn rn y)的作用？,请3组A1阐述(chnsh),请5组A2阐述,第四页，共三十页。,知识(zh shi)回顾,凝胶色谱法分离蛋白质的原理（根据分子量的大小）相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内
3、部通道(tngdo)，路程较长移动速度较慢；相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部通道，路程较短移动速度较快；相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。凝胶电泳的原理 带电粒子在电场的作用下发生定向迁移，在加入SDS排除电荷多少的影响后，使电泳迁移率完全取决于分子大小，从而达到分离的目的。,第五页，共三十页。,课题3 血红蛋白的提取和分离(fnl)实验操作要领,知识目标：（1）描述凝胶色谱分离蛋白质的步骤(bzhu)；（2）理解进行样品的预处理的目的；（3）运用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离纯化。重、难点：（1）描述凝胶色谱分离蛋白质步骤；（2）运用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离纯化。,全班同学一起
4、(yq)朗读,第六页，共三十页。,蛋白质提取和分离(fnl)步骤,具体操作,步骤(bzhu),（一）,（二）,（三）,（四）,第七页，共三十页。,哺乳(b r)血液,血 浆,水 分,固体(gt)物质,血浆(xujing)蛋白,无机盐磷 脂葡萄糖等,血细胞,白细胞,血小板,红细胞（最多）,血红蛋白（）,90,有没有，多不多，易不易,第八页，共三十页。,1.洗涤(xd)红细胞,1.1 洗涤的目的：洗去血液(xuy)中血浆及血小板等中的杂蛋白1.2 洗涤过程：,血液(xuy)100mL,重复洗涤3次，直至上清液没有,（一）样品处理,黄色,第九页，共三十页。,2.血红蛋白(xuhng dnbi)的释放
5、,原理：红细胞渗透作用吸水涨破，释放(shfng)血红蛋白,第十页，共三十页。,3.分离(fnl)血红蛋白溶液,分离(fnl)过程：,红细胞混合液,离心管,第十一页，共三十页。,透析的目的(md)是什么？,去除(q ch)血红蛋白中的小分子杂质,（二）粗分离(fnl)透析血红蛋白,第十二页，共三十页。,注意事项,（1）生理盐水(shnglynshu)作用？,（3）两次离心(lxn)的差异？,（4）透析袋的作用(zuyng)机理？,模拟红细胞生存环境，保持红细胞结构完整。,破碎红细胞；溶解细胞膜释放血红蛋白。,前慢后快，前短后长。,渗透作用,（2）蒸馏水和甲苯的作用？,第十三页，共三十页。,（三
6、）纯化(chn hu),1.凝胶色谱(s p)柱的制作,（2）规格：玻璃管长40cm，内径(ni jn)1.6cm，两端磨平；橡皮塞能塞入玻璃管，上平小凹；移液管0.5mL，长5cm；尼龙网100目；打孔器移液管能塞入。,（1）材料：玻璃管，橡皮塞、移液管、尼龙网 尼龙管、打孔器、小刀、螺旋夹,第十四页，共三十页。,2.凝胶色谱(s p)柱的填装,（1）认识(rn shi)凝胶Sephadex G75 G:交联程度、膨胀程度、分离范围 75：凝胶得水值，即每克凝胶膨胀得水7.5克,（3）填装：缓慢一次填装，均匀，紧密、不能有气泡(qpo)，迅速 连接缓冲液,（2）认识缓冲液：300mL、20m
7、mol/L、PH=7.0磷酸缓冲液,第十五页，共三十页。,3.样品(yngpn)的加入和洗脱,开下端(xi dun),关下端(xi dun),开下端,加样,样品完全渗入,缓冲液面=凝胶面,关下端,加缓冲液接洗脱瓶,开下端,注意：待红色的蛋白质接近柱底是，开始收集，连续收集，每管5ml,疑问：连续收集得到的每一管中是否为同一分子质量的蛋白质？,第十六页，共三十页。,（四）纯度鉴定(jindng)电泳,1.原理：带电粒子在电场中发生定向迁移，从而把不同质量和电量的粒子分离开。加入电量远大于比粒子自身带电量的SDS，排除电荷对粒子迁移大小的影响，据此将不同分子(fnz)质量的粒子分开。,2.电泳结果
8、分析如果出现一个条带：样品中含有一个分子质量(zhling)级别多肽；如果出现两个条带：样品中含有两个分子质量级别多肽。,第十七页，共三十页。,第十八页，共三十页。,第十九页，共三十页。,合作(hzu)探究 6分钟,题目：（1）探究问题1、2、3（2）自己存在的其他疑问要求：（1）小组长搞好组织调控：先一对一讨论，再组内跨层 交流；重点讨论答案的科学性；（2）讨论形成的答案要条理清晰、要点化、序号化。帮 助展示同学做好展示准备。A层 解决全部疑难，并帮助B层完善答案,帮助其他同学解决疑难点。B层 解决疑难后，负责(fz)展示。C层 解决疑难，狂记导学案自主学习部分。,第二十页，共三十页。,展示
9、点评(din pn)安排,题目(tm),展示(zhnsh)小组,点评小组,非展示同学,探究1,讨论完后B、C层落实基本原理的理解和记忆（3分钟记住）A层及时补充点评,探究2,探究3,点评、拓展、升华 约10分钟点评答题规范、答案的正误或全面否，进行答案的补充修正，或知识拓展，或规律方法的总结。其他同学注意倾听、积极思考,重点内容记好笔记。有不明白或有补充的同学要大胆提出。其它小组可进行补充点评或拓展,我的舞台我做主 20分钟,1B2,4B2、5B1,2B1、3B1,6B1,7B2,8B2,要求：展示人及时到位，规范快速、脱稿。答案要序号化、要点化。组长搞好调控，可分工展示。准备质疑、补充，高效
10、科研小组成员发挥带头作用。,第二十一页，共三十页。,巩固(gngg)反刍,要求：1.B层、C层结合学习目标，巩固落实(lush)本课的基础知 识；A层达成目标后，整理合作探究答案。2.组长抽查本组基础知识的掌握情况。,（1）记忆凝胶色谱分离蛋白质的步骤；（2）理解进行(jnxng)样品的预处理的目的；,第二十二页，共三十页。,本堂小结(xioji),本节内容目标：获取(huq)血红蛋白溶液,获 取红细胞（离心(lxn)）,破碎红细胞，释放血红蛋白,从各红细胞的成分中获取血红蛋白（离心）,初步纯化血红蛋白（透析）,第二十三页，共三十页。,1.下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述正确的是（）多选
11、A.样品的处理就是(jish)通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B.通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C.可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D.可通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度,ACD,2.下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（）A.可采集猪血作为实验材料(cilio)B.用蒸馏水重复洗涤红细胞 C.血红蛋白释放后应低速短时间离心 D.洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液,A,2组A1,1组A2,当堂(dn tn)反馈,第二十四页，共三十页。,3.样品的加入和洗脱的操作不正确(zhngqu)的是（）A.加样前
12、，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓 冲液缓慢下降到凝胶面的下面B.加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内C.等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口D.用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要 破坏凝胶面,4.在装填凝胶柱时，不能有气泡存在的原因是（）A.气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离(fnl)效果B.气泡阻碍蛋白质的运动C.气泡与蛋白质发生化学反应D.气泡在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密,A,A,5组A2,3组A1,第二十五页，共三十页。,6.下列操作正确的是（）A.分离红细胞时采用低速长时间离心 B.红细胞释放出血红蛋白只需要(xyo)加入蒸馏水就可C.分
13、离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D.透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h,5.选用红细胞作分离蛋白质的实验材料(cilio)，下列是其优点的是()多A.血红蛋白是有色蛋白 B.红细胞无细胞核C.红细胞蛋白质含量高 D.红细胞DNA含量高,ABC,D,4组A1,6组A2,第二十六页，共三十页。,7.下面关于(guny)对血红蛋白提取和分离的样品的处理措施中，正确的是()多A.采集血样后要高速短时问离心获得血细胞B.洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血 浆蛋白无法除净。C.在蒸馏水和甲苯的作用下，细胞破裂，释放出血红蛋白D.释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红蛋白和其
14、他杂 质分离开来,BCD,8组A2,第二十七页，共三十页。,8.在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误(ww)的是()A洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐B洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果C洗涤过程选用0.1%的生理盐水D透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质下,D,7组A1,第二十八页，共三十页。,课堂(ktng)评价,学科助理：1.回扣目标 总结(zngji)收获 2.评出优秀小组和个人,谢谢(xi xie)！,第二十九页，共三十页。,内容(nirng)总结,请核对导学案答案。3.扰乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序。相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部通道，路程较短移动速度较快。助展示同学做好展示准备。A层 解决全部疑难，并帮助B层完善(wnshn)答案,。讨论完后B、C层落实基本原理的理解和记忆（3分钟记住）A层。有不明白或有补充的同学要大胆提出。答案要序号化、要点化。1.B层、C层结合学习目标，巩固落实本课的基础知。D.洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液。谢谢,第三十页，共三十页。,
